郎杰

（河北經(jīng)貿(mào)大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，河北石家莊050061）

酸棗（Ziyphus spinesu（Bunge）Hu.）為鼠李科棗屬植物，原產(chǎn)于中國，多分布于北方。酸棗種仁（酸棗仁）是常用的中藥材。酸棗除去果核的果肉部分仍具有豐富的營養(yǎng)成分和保健功能。對(duì)酸棗果肉部分有待深入研究與開發(fā)。近年來對(duì)植物多糖的研究報(bào)道日趨增多，多糖具有多種生物活性[1]。尤其是多糖在免疫方面的作用研究的更為深入，發(fā)現(xiàn)了很多多糖具有促進(jìn)免疫器官的發(fā)育和促進(jìn)免疫細(xì)胞的生成以及促進(jìn)免疫細(xì)胞的吞噬功能，甚至還促進(jìn)細(xì)胞因子的產(chǎn)生等[2]。為了對(duì)酸棗果肉部分進(jìn)行綜合利用，本文對(duì)酸棗多糖進(jìn)行了提取研究以及對(duì)酸棗多糖的免疫調(diào)節(jié)功能進(jìn)行了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 酸棗多糖的制備

新鮮酸棗剝離果核，將果肉于105℃烘30 min滅其酶活性，于75℃烘干后粉碎過100目篩，放入索氏提取器中，用甲醇-乙酸乙酯混合液在80℃恒溫中回流抽提色素至抽提液顏色呈微黃色。將回流后的酸棗果肉粉取出，加入蒸餾水（1∶10），分別調(diào)至 pH5.0、6.5、8.0 浸泡 10 h，放入 60、70、80、90 ℃恒溫水浴中浸提2 h，冷卻后離心（4 000 r/min）20 min，取上清液加入木瓜蛋白酶（1 U/mL）37℃水浴加熱1 h脫蛋白[3]，再分別加入2、3、4、5倍量無水乙醇，4℃下靜置后再離心20 min，棄去上清液，沉淀物以蒸餾水溶解后加入10%活性炭，60℃脫色30 min，過濾除去活性炭，得到微黃色多糖溶液，用苯酚硫酸法測定含量后[4]，再減壓干燥用于下一步實(shí)驗(yàn)。

1.2 酸棗多糖對(duì)小鼠免疫影響實(shí)驗(yàn)

小白鼠（昆明種）：購于河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物室，體重25 g～30 g雄性小鼠64只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、小劑量組、中劑量和大劑量組各2組，一組用于測定免疫器官指數(shù)（10只重復(fù)），另一組用于測碳粒廓清指數(shù)（6只重復(fù)）。

將酸棗多糖配成所需濃度，每日灌胃一次。大、中、小劑量分別為每千克體重500、350、200 mg多糖，空白對(duì)照組灌以蒸餾水。連續(xù)灌胃60 d。

1.2.1 免疫器官重量的測定

末次給藥24 h后，將小鼠用乙醚麻醉，迅速取出胸腺和脾臟，用濾紙吸干血液后稱重，計(jì)算出脾臟、胸腺指數(shù)單位。

1.2.2 吞噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)測定

末次給藥24 h后對(duì)小鼠用烏拉坦麻醉，將印度墨汁用含1%明膠的生理鹽水稀釋5倍，由尾靜脈注射（1.0 mL/100 g），注射后15 min、24 h分別由眼后靜脈叢取血，用比色法測血漿中碳粒濃度（μL/mL），計(jì)算吞噬指數(shù)[5]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同提取條件對(duì)酸棗多糖的提取效果比較

在不同溫度、不同提取pH及對(duì)提取物用不同比例乙醇沉淀其效果見表1。

表1 不同提取條件對(duì)酸棗多糖的提取效果比較Table 1 Comparison on extraction effect of jujube polysaccharide of different conditions μg/mL

不同溫度下對(duì)酸棗多糖的浸提液進(jìn)行吸光度測定并折算為多糖含量，結(jié)果表明多糖提取量隨溫度增高而增加，經(jīng)方差分析顯示，90℃與80℃提取差異不顯著。而90℃和80℃提取效果與70℃及60℃差異顯著。提取液pH對(duì)浸提效果影響較為明顯，在pH5.0、6.5、8.0條件之間差異顯著，其中以pH8.0效果最好。對(duì)酸棗多糖提取液用不同體積比例乙醇進(jìn)行沉淀結(jié)果表明乙醇比例增大沉淀量增加。四種乙醇比例之間差異顯著。由此認(rèn)為在90℃的中性偏堿（pH8）條件提取效果較好及5倍乙醇沉淀較好。

2.2 酸棗多糖對(duì)小鼠免疫功能的影響

用酸棗多糖給小鼠灌胃60 d后，小鼠胸腺和脾重與對(duì)照相比結(jié)果如表2，對(duì)小鼠免疫細(xì)胞吞噬能力的影響結(jié)果如表3。

表2 酸棗多糖對(duì)小鼠免疫器官的影響Table 2 The index of thymus and thymus of mice after taking jujube polysaccharide for 60 d

通過表2數(shù)據(jù)分析比較，酸棗多糖灌胃處理，可增加實(shí)驗(yàn)小鼠的免疫器官重量，提高小鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析（T－檢驗(yàn)）表明，中劑量組、大劑量組與空白對(duì)照組之間胸腺指數(shù)差異顯著；小劑量組、大劑量組與空白對(duì)照組比較，脾臟指差異也達(dá)顯著水平，大劑量組和小劑量組之間差異不顯著。

通過碳粒廓清指數(shù)測定結(jié)果分析（表3），酸棗多糖灌胃處理各劑量組碳粒廓清指數(shù)均高于對(duì)照組，差異顯著。從灌胃劑量效果來看，大劑量效果明顯高于小劑量。由此表明酸棗多糖具有提高小鼠免疫細(xì)胞吞噬能力的作用。

表3 酸棗多糖灌胃小鼠60 d后的碳粒廓清指數(shù)Table 3 The carbon clearance index of mice after taking jujube polysaccharide for 60 days

3 討論與結(jié)論

對(duì)于多糖類物質(zhì)可提高免疫系統(tǒng)功能，過去已有很多報(bào)道[6]。本研究以小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，利用提取的酸棗多糖進(jìn)行灌胃，結(jié)果表明酸棗多糖具有提高小鼠免疫器官重量和提高碳粒廓清指數(shù)的作用，由此可初步認(rèn)為酸棗多糖在增強(qiáng)免疫方面具有一定的作用。

在本實(shí)驗(yàn)中多糖大劑量效果大于小劑量。其效應(yīng)是否為直接作用還有待進(jìn)一步研究。推測其效應(yīng)不是直接的，可能是間接作用。胸腺對(duì)淋巴T細(xì)胞增殖分化有重要作用，脾臟對(duì)T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞，以及巨噬細(xì)胞增殖分化作用較大。本實(shí)驗(yàn)中酸棗多糖能增加胸腺和脾的重量，可能酸棗多糖具有促使T淋巴細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞增值的作用，從而進(jìn)一步提高了吞噬能力。

[1] 章棟梁,郭向瑩,余南靜,等.多糖生物活性及應(yīng)用研究新進(jìn)展[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,48(9):2282-2285

[2] 謝明勇,聶少平.天然產(chǎn)物活性多糖結(jié)構(gòu)與功能研究進(jìn)展[J].中國食品學(xué)報(bào),2010,10(2):1-11

[3] 楊世平,孫潤廣.陜北紅棗中多糖的酶加水法提取工藝研究[J].武漢植物學(xué)研究2005,23(4):373-37

[4] 徐志祥,李剛,李寶健.苯酚-硫酸法測定靈芝多糖含量的條件研究[J].食用菌,2000(3):6-8

[5]陳奇主編.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,1993:712-759

[6] 管敏強(qiáng).多糖與動(dòng)物免疫的研究現(xiàn)狀[J].中獸醫(yī)學(xué)雜志,2006,129(2):43-46