姚衛(wèi)紅 張麗娜 劉美秀

清熱解毒類中成藥微生物限度檢查方法驗(yàn)證

姚衛(wèi)紅 張麗娜 劉美秀

目的探究清熱解毒種類的中成藥的抑制細(xì)菌效果，同時(shí)研究對(duì)于中成藥微生物限度檢查方法。方法 遵照《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版，對(duì)微生物的限度檢查方法進(jìn)行有效的實(shí)驗(yàn)并驗(yàn)證。結(jié)果大腸菌群和大腸埃希菌無(wú)抑制活性，可直接在常規(guī)法檢查中應(yīng)用。結(jié)論有必要建立醫(yī)院專業(yè)的微生物限度檢查，采用培養(yǎng)基稀釋法，冰醋酸薄膜過(guò)濾法進(jìn)行微生物限度檢查。

清熱解毒類；中成藥微生物；限度檢查

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 ①黃連上清片，福建省漳州市樂(lè)爾康藥業(yè)（批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字Z19993035）；②黃連上清片，北京同仁堂（批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字Z11020293）；③三黃片，安徽華佗國(guó)藥，（批號(hào)：0015139）：④黃連上清片，長(zhǎng)春新安藥業(yè)，（批準(zhǔn)文號(hào)：Z22024528）；⑤黃連上清片，吉林省跨海生化藥業(yè)（批準(zhǔn)文號(hào)：Z22025474）；⑥四季三黃片，江西華泰藥業(yè)（批號(hào)：100910）；⑦一清顆粒，浙江偉康藥業(yè)（批號(hào)：20110403）；⑧一清軟膠囊，大連天宇?yuàn)W森制藥（批號(hào)：110407）。

1.1.2 稀釋液與培養(yǎng)基，營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)：101009），玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)：1004193），膽鹽乳糖培養(yǎng)基（批號(hào)：100526），營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（批號(hào)：100914）[1]。

1.1.3 菌株：白色念珠菌，金黃色葡萄球菌，大腸埃希菌，枯草芽孢桿菌。其中枯草芽孢桿菌，金黃色葡萄球菌，大腸埃希菌，白色念珠菌都是由四川省食品藥品檢驗(yàn)所提供。

1.2 檢查方法根據(jù)2010年版《中國(guó)藥典》中關(guān)于X微生物的限度的相關(guān)檢查方式進(jìn)行。使用45C恒溫的瓊脂營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基20ml器具，分別平行測(cè)定器皿，35C培養(yǎng)3d，進(jìn)行計(jì)數(shù)[2]。

用經(jīng)24h培養(yǎng)的26C恒溫的第三代黑去么的改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基，在器皿中加入6ml的0.05%聚山梨酯以及濃度為0.9%的生理鹽水，將孢子洗凈，再把孢子的懸浮液吸去，使用濃度為0.5%的聚山梨酯80、濃度為0.9%的生理鹽水進(jìn)行20倍稀釋，直至10～4，吸取2ml稀釋液，用溫度為45℃的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)液20ml，器皿，分別平行測(cè)定兩器皿，26C培養(yǎng)5d，然后進(jìn)行計(jì)數(shù)。

菌液制備完成后，對(duì)細(xì)菌，霉菌以及酵母菌的數(shù)量進(jìn)行驗(yàn)證，通過(guò)平皿法（方法1）、培養(yǎng)基稀釋法（方法2）、薄膜過(guò)濾法（方法3）。計(jì)算回收率，菌落的回收率=實(shí)驗(yàn)組的平均菌落數(shù)-樣品組的平均菌落數(shù)*菌液組的菌落數(shù)×100%。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)計(jì)數(shù)方法進(jìn)行驗(yàn)證在酵母菌、細(xì)菌和霉菌的計(jì)數(shù)方法實(shí)驗(yàn)證明，清熱解毒類的中成藥能夠很好地抑制菌落活性，而抑制枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌的具體效果則大相徑庭，對(duì)菌落的抑制作用能夠經(jīng)各種方式去除，都能獲得超過(guò)50%的回收率。見(jiàn)表1。

2.2 驗(yàn)證檢查方法的有效性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)上述兩種菌群沒(méi)有活性抑制作用，能在常規(guī)法檢查中進(jìn)行應(yīng)用。見(jiàn)表2。

表1 5種陽(yáng)性回收率額結(jié)果分析(回收率/%)

表2 控制菌檢查結(jié)果

3 討論

研究結(jié)果顯示，采用計(jì)數(shù)法對(duì)細(xì)菌、酵母菌和霉菌的試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示，從抑制菌落活性方面看，清熱解毒類中成藥的效果更為顯著，而對(duì)于枯草芽孢桿菌及金黃色葡萄球菌而言，則其抑制效果各有不同，且該抑菌作用能經(jīng)不同的實(shí)驗(yàn)方式抵消，均達(dá)70%以上的回收率。分別對(duì)控制菌大腸菌群和大腸埃希菌進(jìn)行方法驗(yàn)證，結(jié)果提示大腸菌群和大腸埃希菌無(wú)抑制活性，可直接在常規(guī)法檢查中應(yīng)用。

由此得知，雖然藥品的成分類似，但是他們的抑菌原理并不一樣，抑菌效果也就大相徑庭。在選擇抑菌藥劑時(shí)，要根據(jù)實(shí)際情況選擇合適的抑菌藥劑，從而達(dá)到最好的抑菌效用。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典：一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010：附錄79-88.

[2] 閆紅,薛坤,張?jiān)碌?11種口服中成藥微生物限度檢查方法驗(yàn)證[J].中國(guó)藥房,2010,21(11)：29-32.

R691

B

1673-5846(2013)02-0429-02

四川省雅安市食品藥品檢驗(yàn)所，四川雅安 625000