安柏晶

HLPC法測定心脈通顆粒中葛根素的含量

安柏晶

目的建立反相高效液相色譜法測定心脈通顆粒中葛根素含量的方法。方法采用BOS Hypersil C18 ODS2（150mm×4.6mm，5um）色譜柱，甲醇-水（25：75）為流動相，流速為1ml?min-1，檢測波長為250nm。按外標法進行檢測。結果葛根素在濃度為4.08μg?ml-1～40.8μg?ml-1范圍內線性關系良好，r=0.9999，重復性實驗RSD為0.10%，樣品加樣平均回收率為103.07%（n=9），RSD為1.04%。結論該方法簡便準確、重復性好、專屬性強，可作為心脈通顆粒的含量測定有效方法。

心脈通顆粒；高效液相色譜法；葛根素；含量測定

心脈通顆粒功效活血化瘀、通脈養(yǎng)心、降壓降脂，用于高血壓、高脂血癥等證特效藥[1]。處方由當歸、鉤藤、決明子、葛根、丹參等十味中藥組成，為了更好地控制其質量，需要在制劑標準中建立含量測定項目。其中當歸和決明子在本處方中用量最大，但當歸有效成分阿魏酸性質不穩(wěn)定，難以作為含量測定指標；決明子的有效成分大黃素、大黃酚藥理作用與本處方的功效主治不完全一致，并且大黃酚的含量受溫度影響較大，容易降解，不宜作為含量測定指標；葛根在本處方中為臣藥，其有效成分葛根素具有抗心律失常、降血壓、擴張冠狀動脈等作用，與處方的功能主治一致，故選用葛根素作為含量測定指標。結果表明此方法具有可靠性，專屬性較好。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；G1314A-VWD可變波長檢測器；Agilent化學工作站；BOS Hypersil C18 ODS2色譜柱（150mm ×4.6mm，5um，大連依利特公司）；UV-1201型紫外可見分光光度計（北京瑞利分析儀器公司）；BP-211D電子天平（德國賽多利斯公司）。甲醇為色譜純；水為超純水；其余試劑均為分析純。對照品：葛根素批號：753-2000071（由中國藥品生物制品檢定所提供）；樣品（自制，規(guī)格：每袋3g）

2 色譜條件

色譜柱：大連依利特公司（250mm×4.6mm，5um）；流動相：甲醇-水（25：75）；檢測波長為250nm；流速：1ml?min-1，柱溫為25℃；進樣量10ul；面積外標法定量。理論板數按葛根素峰計算應不低于2000。

3 方法與結果

3.1 檢測波長的選擇取葛根素對照品，加30%乙醇制成適宜的溶液，在紫外區(qū)200～400nm波長處進行掃描，測得最大吸收波長為250nm，因此確定本品含量測定的波長為250nm。

3.2 干擾試驗按含量測定方法處理不加葛根的陰性樣品（包括輔料），吸取10μl注入液相色譜儀，結果可知，葛根素的分離度較好，陰性樣品在相應出峰時間區(qū)域沒有干擾峰出現，故對樣品的測定無干擾作用。

3.3 線性關系的考察精密稱取葛根素對照品10.2mg，以30%乙醇溶解并定容于100ml量瓶中，再從中精密吸取1、3、5、7、10ml，分別稀釋至25ml，即得濃度為4.08、12.24、20.4、30.6、40.8μg/ml的對照品溶液。

按照《藥典》附錄ⅥD高效液相色譜法試驗，分別精密吸取10μl溶液注入色譜儀，記錄峰面積，以濃度（C）為橫坐標，峰面積（A）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程：Y=18955X-4218.1，r=0.9998，可見葛根素在濃度為4.08μg/ml～40.8μg/ml范圍內線性關系良好。

3.4 精密度試驗精密吸取上述對照品溶液，連續(xù)進樣6次，每次進樣量為4μl，記錄峰面積，RSD(n-1)=0.92%，說明儀器精密度好。

3.5 重復性試驗取批號為753-20000701的樣品，重復5次按所附質量標準作含量測定，RSD為0.10%，說明本法重復性良好。

3.6 加樣回收試驗取已知含量的樣品（含量2.63mg/g）約0.15g，共9份，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，分別加入對照品溶液（0.101mg/ml）3.2ml、4ml、4.8ml各三份，照供試品溶液制法操作，測得含量，計算加樣回收率：

結果，樣品加樣平均回收率為103.07%（n=9），RSD為1.04%，說明，該測定方法回收率高，結果準確。

3.7 樣品測定通過制劑的含量測定，確定含量限度，制定制劑的質量標準。取9批不同批號樣品，按照含量測定的方法操作，其均值7.07mg/袋，則本品限度折算值為7.07×85%=6.0mg/袋。同時考慮到藥材的來源及質量情況，以及制劑生產、貯藏、裝量等因素，暫定心脈通顆粒中葛根素的含量不低于6.0mg/袋。

4 討論

4.1 提取方法的選擇參照《中國藥典》2005年版一部收載的葛根藥材及成方中含葛根的含量測定方法[2]，對樣品分別采用30%乙醇超聲30min和30%乙醇加熱回流30min提取方法進行測定，結果測得含量分別為2.66mg/g、2.69mg/g。試驗結果表明，提取30min效果與回流提取30min的效果相當，從方便操作角度考慮超聲提取30min為最佳的提取方法。

4.2 提取溶劑的選擇取樣品，研細，精密稱取0.5g（共3份），分別置具塞錐形瓶中，分別加10%乙醇、30%乙醇、60%乙醇超聲處理30min，測得結果分別為2.37mg/g、2.64mg/g、2.44mg/g。試驗結果表明，30%乙醇提取葛根素含量高，因此確定提取溶劑為30%乙醇。

4.3 提取時間的考察取樣品，研細，精密稱取0.5g（共3份），分別置具塞錐形瓶中，加30%乙醇50ml超聲提取15min、30min、45min，測得結果分別為2.49mg/g、2.72mg/g、2.72mg/g。結果表明，提取時間30min已達到提取效果，因此確定提取時間為30min。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中成藥成方制劑(心脈通片)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2010.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].1版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2005：312.

R927.2

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