宋曉燕 劉翠紅

RP-HPLC法測定金銀花提取物中藁苯內酯的含量※

宋曉燕 劉翠紅

目的建立反相高效液相色譜法測定金銀花提取物中藁本內酯含量的方法。方法采用伊利特Hypersil ODS2（4.6mm×250mm×5μm）色譜柱，流動相為甲醇-水（60：40），流速0.9ml/min，檢測波長：326nm。結果藁苯內酯在0.01～0.50mg內有良好的線性關系，平均回收率為99.2%，RSD為0.3%（n=6）。結論本法操作靈敏、準確、簡便，可作為金銀花提取物的質量控制方法。

反相高效液相色譜法；金銀花提取物；藁苯內酯；含量測定

金銀花為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或帶初開的花。夏初花開放前采收，干燥，入藥[1]。傳統(tǒng)醫(yī)學中，金銀花為臨床常用中藥，具有清熱解毒、涼散風熱之功效，現(xiàn)代藥理實驗研究證明其具有抗菌、抗病毒、解熱、增強免疫力、止血、利尿和降低膽固醇等作用[2]。一般情況，金銀花以綠原酸含量為質控標準，但綠原酸并非金銀花中唯一抑菌成分?，F(xiàn)代研究表明，金銀花中主要含有揮發(fā)油、黃酮類、有機酸、三萜類及無機元素。揮發(fā)油又名精油，是金銀花中的另一類主要有效成分，而含量較高的藁苯內酯為揮發(fā)油主要活性成分之一，具有解痙擴血管等作用[3-5]。本文采用RP-HPLC法測定金銀花提取物中藁苯內酯的含量，所測藁苯內酯色譜峰與相鄰色譜峰得到很好的分離，其操作靈敏、準確、簡便，具有普遍的實用意義。其中金銀花提取物是由超臨界CO2萃取所得。

1 材料

1.1 儀器MLtimate 3000高效液相色譜儀；伊利特Hypersil ODS2色譜柱（4.6mm×250mm×5μm）。

1.2 試藥金銀花提取物（廣州漢方現(xiàn)代中藥研究開發(fā)有限公司，批號20100301）。藁苯內酯對照品（原中國藥品生物制品檢定所，批號100102-9907）。甲醇：AR級，廣東省化學試劑工程技術研究開發(fā)中心。水：重蒸餾水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗

2.1.1 色譜條件色譜柱：伊利特Hypersil ODS2（4.6mm×250mm×5μm）；色譜柱溫度：30℃；流動相：甲醇-水（60：40）；流速：0.9ml/min；檢測波長：326nm。理論塔板數(shù)按藁苯內酯計算不低于3000。

2.1.2 系統(tǒng)適應性試驗分別精密吸取藁苯內酯對照品溶液，供試品溶液各10μL注入高效液相色譜儀測定，色譜圖見圖1。藁苯內酯的保留時間約為37.5min，與其它組分分離良好（分離度大于1.5），無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 對照貯備液的制備精密稱取藁苯內酯對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備取本品約0.10g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解，超聲10min，過濾，精密取過濾液2ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，過0.45μm濾膜，即得。

2.4 方法學考察

2.4.1 線性關系考察分別精密吸取對照貯備液0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml置10ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm濾膜過濾，得對照溶液。分別吸取10μL各對照溶液，進行HPLC分析，以峰面積（A）-濃度（C）回歸，結果見表1。

表1 藁苯內酯標準曲線的繪制

回歸方程為Y=92.142 X-0.0286，相關系數(shù)R=0.9992。以上結果表明藁苯內酯在0.01～0.50mg范圍內，與峰面積積分值呈良好線性關系。

2.4.2 精密度試驗精密吸取對照貯備液2ml，置10ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。每次進樣10μL，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積分別為：

27.619 ，27.348，27.157，27.518，27.892，27.813，得平均峰面積值為27.558，計算其精密度RSD=1.0%，可見其精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，分別在0、1、2、4、6、8h進樣10μL測定，以峰面積計算得藁苯內酯的峰面積RSD分別為1.1%（n=6），表明供試品溶液中藁苯內酯在8h內穩(wěn)定。

2.4.4 重復性試驗取同批供試品（20100301）6份，精密稱定，按2.3項下方法制備，進樣10μL測定，測得藁苯內酯33.5%，RSD為0.6%（n=6），表明本法具有良好的重復性。

2.4.5 準確度試驗采用加樣回收法，精密稱取已測定含量的金銀花提取物樣品（20100301）6份，每份0.10g，分別置25ml容量瓶中，各加入1ml對照貯備液，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。進樣10μL，測定其峰面積，按測得量與加入量計算回收率分別為99.18，99.58，98.87，99.47，99.05，98.94。測得平均回收率為99.2%，RSD=0.3%(n=6)。

2.5 樣品測定取3批樣品（20100301、20100302、20100303），按2.3項下方法制備，分別精密吸取10μL注入液相色譜儀，測定樣品中藁苯內酯的含量，結果見表2。

表2 金銀花提取物中藁苯內酯的含量(%)

3 結論與討論

一般認為，金銀花的有效成分為綠原酸類化合物，并以綠原酸含量作為金銀花的質控標準。本文對金銀花中另一類的抑菌成分藁苯內酯的質量研究具有現(xiàn)實意義。本實驗同時測定了3批金銀花提取物中藁苯內酯的含量，通過計算，其含量均在30%以上。本文所述方法簡便、準確、重復性及穩(wěn)定性都比較好，可快速測定金銀花提取物中藁苯內酯含量，在實際生產中可為該提取物質量控制提供依據(jù)。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(2000年版1部)[M].北京：化學工業(yè)出版社,2000：177-178.

[2] 王筠默.中藥藥理學[M].上海：上海科學技術出版社,1999：35-38.

[3] 滕紅麗.金銀花藥材的綜合研究分析[J].中藥材,2007,30(6)：744-748.

[4] 阮鳴,彭國平.金銀花揮發(fā)油的萜類化學成分研究進展[J].時珍國醫(yī)國藥,2005,16(1)：59-61.

[5] 陶靜儀,阮于平,梅其炳,等.當歸成分藁苯內酯平喘作用的實驗研究[J].藥學學報,1984,19(8)：561-565.

Content Determination of Ligustilide in Honeysuckle Flower Extract by RP-HPLC

Song Xiaoyan Liu Cuihong

ObjectiveTo develop a method for the content determination of ligustilide in honeysuckle flower extract by RHPLC.MethodsChromatographic column (4.6mm×250mm×5μm) of Erie's Hypersil ODS2 was used. The mobile phase was methanol-water (60∶40), the flow rate was 0.9 ml/min, and the detection wavelength was at 326 nm.ResultsThere was a good linear relationship in the range of 0.01～0.50mg.The average recovery was 99.2%, RSD=1.0%(n=6).ConclusionThe method is sensitive, accurate, simple and can be used for quality control of honeysuckle flower extract.

RP-HPLC; Honeysuckle flower extract; Ligustilide; Content determination

R927.2

A

1673-5846(2013)02-0054-02

廣州白云山漢方現(xiàn)代藥業(yè)有限公司，廣東廣州 510240

廣州市科技計劃項目：從化中藥及天然產物關鍵技術集成創(chuàng)新平臺（項目編號：2010A1-E00011）

宋曉燕，女，大學本科，藥學工程師，研究方向：中藥和保健食品。郵箱：xiaoyan_s@126.com。