趙振軍　劉勤晉

摘要：采用高效液相色譜等技術(shù)分析了下關(guān)小沱茶新茶、下關(guān)小沱茶發(fā)酵茶的主要功能成分，并以高脂飼料喂養(yǎng)昆明種小白鼠，建立了高血脂癥模型，觀察下關(guān)小沱茶對(duì)小白鼠肝臟指數(shù)變化及血清指標(biāo)中血脂成分和動(dòng)脈硬化指數(shù)等方面的影響。結(jié)果表明，下關(guān)小沱茶新茶中的水浸出物、茶多酚、酯型兒茶素（EGCG、ECG、GCG）與非酯型兒茶素（EGC、DL-C、EC）等功能成分的含量均高于下關(guān)小沱茶發(fā)酵茶；下關(guān)小沱茶發(fā)酵茶中沒(méi)食子酸的含量高于下關(guān)小沱茶新茶，并含有少量的洛伐他汀成分。下關(guān)小沱茶能顯著降低小白鼠的肝臟指數(shù)，并能顯著降低血清中甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）含量和動(dòng)脈硬化指數(shù)，提高高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）含量。由于下關(guān)小沱茶發(fā)酵茶中含有茶多酚、兒茶素及洛伐他汀等功能成分，是一種非常好的降脂保健飲料。

關(guān)鍵詞：下關(guān)小沱茶；功能成分；降血脂作用

中圖分類號(hào)：TS272.5+4；Q946；R589.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）06-1334-04

下關(guān)小沱茶是近年來(lái)云南省大理市下關(guān)鎮(zhèn)等地生產(chǎn)的一種攜帶便利、沖泡方便的特種緊壓茶，根據(jù)生產(chǎn)工藝的不同，分為新茶（生沱茶）和發(fā)酵茶（熟沱茶）。由于采用了最新的原料配方、緊壓成形等技術(shù)并結(jié)合下關(guān)地區(qū)具有地域特點(diǎn)的微生物發(fā)酵優(yōu)勢(shì)，形成了其特有的生化品質(zhì)與降脂功能，因而深受廣大消費(fèi)者的喜愛(ài)。雖然針對(duì)普洱茶、生沱茶中生化成分與品質(zhì)形成、降血脂作用等的研究較多[1-3]，但關(guān)于下關(guān)小沱茶（包括新茶與發(fā)酵茶）這種新興的緊壓茶產(chǎn)品的功能成分及降脂作用的研究至今未見(jiàn)報(bào)道。一般認(rèn)為茶葉中具有降脂作用的成分主要是茶多酚，宋小鴿等[4]通過(guò)對(duì)高血脂癥大鼠茶多酚溶液灌胃試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)茶多酚可降低大鼠體內(nèi)的甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的含量，同時(shí)提高了高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）的含量，具有防治高血脂癥的作用。普洱茶中調(diào)節(jié)血脂的藥用有效成分洛伐他汀的發(fā)現(xiàn)則為研究普洱茶的降血脂功能提供了新的思路[5， 6]。試驗(yàn)通過(guò)對(duì)下關(guān)小沱茶（包括新茶與發(fā)酵茶）的功能成分進(jìn)行分析，同時(shí)結(jié)合下關(guān)小沱茶的小白鼠降血脂試驗(yàn)，試圖為探索下關(guān)小沱茶降血脂作用機(jī)理提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)材料選擇當(dāng)年生產(chǎn)的下關(guān)小沱茶（新茶與新茶發(fā)酵茶）和存放5年的發(fā)酵茶，茶樣均由云南下關(guān)沱茶（集團(tuán)）股份有限公司提供；試驗(yàn)動(dòng)物為清潔級(jí)昆明種小白鼠；普通顆粒狀基礎(chǔ)飼料、高脂飼料均由重慶滕鑫生物公司提供，高脂飼料配方由10.0%豬油、1.0%膽固醇、10.0%蛋黃粉、0.2%牛膽鹽和78.8%基礎(chǔ)飼料組成；所用生化試劑盒均購(gòu)于上海北海生物技術(shù)工程有限公司，其他化學(xué)試劑均為分析純。儀器與設(shè)備主要有FA2004A電子天平（上海精天電子儀器有限公司），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海青浦滬西儀器廠），DNP-9052型電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司），BS-IE振蕩培養(yǎng)箱（浙江金壇市富華儀器有限公司）；2010型液相色譜儀（日本島津公司）；TU-1900PC 型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）等。

1.2 方法

1.2.1 茶湯制備 稱取磨碎的下關(guān)小沱茶3種茶樣各25 g，在100 ℃沸水中用500 mL煮沸的去離子水回流萃取30 min，過(guò)濾后將茶湯真空低溫干燥（45～50 ℃），完全干燥后加去離子水溶解，最后定容制備成濃度為500 mg/mL的茶湯，4 ℃貯藏，備用。

1.2.2 高血脂癥模型建立及試驗(yàn)動(dòng)物分組 選擇生長(zhǎng)健康、體格健壯的成年小白鼠144只，按體重隨機(jī)分為10個(gè)組，其中普通對(duì)照組（CK）有小白鼠16只，喂普通顆粒狀基礎(chǔ)飼料；高血脂癥模型組（HF）有小白鼠16只，喂高脂飼料；沱茶茶湯灌胃組有8個(gè)組，每組14只小白鼠，按灌胃茶湯的類型與濃度分為新茶灌胃組（RTHF），編號(hào)分別為1～4組，對(duì)應(yīng)的新茶茶湯濃度分別為500、1 000、2 000、5 000 mg/（kg·bw）；發(fā)酵茶（存放5年的發(fā)酵茶）灌胃組（FTHF），編號(hào)分別為5～8組，對(duì)應(yīng)的發(fā)酵茶茶湯濃度分別為500、1 000、2 000、5 000 mg/（kg·bw）。每組小白鼠雌雄各半，組間小白鼠體重經(jīng)單因素統(tǒng)計(jì)分析沒(méi)有出現(xiàn)顯著差異。

1.2.3 功能成分測(cè)定 下關(guān)小沱茶3種茶樣茶湯的水浸出物含量采用重量法[7]測(cè)定、茶多酚含量采用酒石酸鐵法[7]測(cè)定、氨基酸含量采用茚三酮比色法[7]測(cè)定；咖啡堿、沒(méi)食子酸與兒茶素組分（包含酯型兒茶素EGCG、ECG、GCG與非酯型兒茶素EGC、DL-C、EC）分析及洛伐他汀含量的檢測(cè)采用高效液相色譜法[2，8]。

1.2.4 小白鼠有關(guān)指標(biāo)測(cè)定 茶湯灌胃40 d后，各組小白鼠禁食16 h以上，然后摘眼球取血，并取出肝臟稱重；血液樣本在常溫下靜置30 min后3 000 r/min離心15 min[9，10]，獲得的小白鼠血清在冰箱中4 ℃保存，備用。應(yīng)用生化試劑盒分別測(cè)定小白鼠血清中的總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇的含量，具體操作參照生化試劑盒使用說(shuō)明書完成。計(jì)算肝臟指數(shù)和動(dòng)脈硬化指數(shù)，肝臟指數(shù)=肝重/體重；動(dòng)脈硬化指數(shù)（AI）=低密度脂蛋白含量/高密度脂蛋白含量[11]。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)小白鼠生長(zhǎng)指標(biāo)與血清指標(biāo)進(jìn)行方差分析（ANOVA）和鄧肯氏多重極差檢驗(yàn)（Duncans multiple range test），所得數(shù)據(jù)以“均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表述。

2 結(jié)果與分析

2.1 下關(guān)小沱茶的功能成分

下關(guān)小沱茶各茶樣主要成分檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，下關(guān)小沱茶茶湯中水浸出物和茶多酚含量隨發(fā)酵時(shí)間的增加呈降低趨勢(shì)；而沒(méi)食子酸的含量隨發(fā)酵時(shí)間增加逐漸升高；蛋白質(zhì)、咖啡堿的含量變化不大，幾乎不受發(fā)酵及貯藏年限等因素的影響。此外，從發(fā)酵茶中檢測(cè)到了洛伐他汀的存在，其含量以存放5年的發(fā)酵下關(guān)小沱茶最高，當(dāng)年生產(chǎn)并發(fā)酵的下關(guān)小沱茶要低一些，而當(dāng)年下關(guān)小沱茶新茶不含洛伐他汀。

2.2 下關(guān)小沱茶中兒茶素組分分析

下關(guān)小沱茶各茶樣中兒茶素組分分析檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。從表2可見(jiàn)，當(dāng)年生產(chǎn)的下關(guān)小沱茶新茶中酯型兒茶素（EGCG、ECG、GCG）與非酯型兒茶素（EGC、DL-C、EC）的含量均高于發(fā)酵的下關(guān)小沱茶；當(dāng)年生產(chǎn)的下關(guān)小沱茶新茶、 當(dāng)年生產(chǎn)并發(fā)酵的下關(guān)小沱茶及存放5年的發(fā)酵下關(guān)小沱茶中的酯型兒茶素與非酯型兒茶素的比值分別為2.55、1.77和0.55，這個(gè)結(jié)果與下關(guān)小沱茶發(fā)酵時(shí)間長(zhǎng)短呈現(xiàn)出一種負(fù)相關(guān)的關(guān)系。

2.3 下關(guān)小沱茶茶湯灌胃對(duì)小白鼠生長(zhǎng)的影響

下關(guān)小沱茶茶湯灌胃對(duì)小白鼠體重生長(zhǎng)的影響結(jié)果見(jiàn)表3。在實(shí)驗(yàn)期間觀察到，普通對(duì)照組、高血脂癥模型組以及下關(guān)小沱茶茶湯灌胃各濃度組的小白鼠毛質(zhì)潔白、具光澤，飲食正常、無(wú)稀便出現(xiàn)；其中新茶灌胃組隨茶湯濃度的增加，小白鼠的興奮度增強(qiáng)，特別是高濃度的新茶組（2、3、4組）出現(xiàn)了高頻率的小白鼠爭(zhēng)斗現(xiàn)象，并有7只雄性小白鼠因?yàn)闋?zhēng)斗而死亡；而存放5年的發(fā)酵茶灌胃組的小白鼠其行為未出現(xiàn)異常。在保證飼料不出現(xiàn)剩余的前提下，每天喂食小白鼠正常所需的飼料量，結(jié)果高血脂癥模型組小白鼠的體重極顯著高于普通飼料組和下關(guān)小沱茶茶湯灌胃組的小白鼠體重（P﹤0.01）。在茶湯灌胃等量濃度前提下，新茶組小白鼠體重高于發(fā)酵茶組的小白鼠體重；隨著灌胃濃度的增加，小白鼠體重總體上呈降低的趨勢(shì)。在肝臟指數(shù)上，高血脂癥模型組小白鼠的肝臟指數(shù)極顯著高于普通對(duì)照組和下關(guān)小沱茶茶湯灌胃各濃度組的小白鼠肝臟指數(shù)（P<0.01）。

2.4 下關(guān)小沱茶茶湯灌胃對(duì)小白鼠血清指標(biāo)中血脂成分的影響

下關(guān)小沱茶茶湯灌胃對(duì)小白鼠血脂指標(biāo)的影響結(jié)果見(jiàn)表3。從表3可見(jiàn)，下關(guān)小沱茶茶湯灌胃的新茶、存放5年的發(fā)酵茶2大組的小白鼠血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇含量及動(dòng)脈硬化指數(shù)與高血脂癥模型組相比極顯著降低（P<0.01），高密度脂蛋白膽固醇含量較高血脂癥模型組與普通對(duì)照組的極顯著升高（P<0.01）；下關(guān)小沱茶茶湯灌胃濃度相同的新茶、存放5年的發(fā)酵茶之間對(duì)降低小白鼠血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇含量的效果沒(méi)有顯著差異（P>0.05）；隨著茶湯灌胃濃度的增加，小白鼠血清中的甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇含量基本上呈下降趨勢(shì)，而高密度脂蛋白膽固醇含量呈升高趨勢(shì)；下關(guān)小沱茶茶湯灌胃的新茶、存放5年的發(fā)酵茶2大組的小白鼠動(dòng)脈硬化指數(shù)極顯著低于高血脂癥模型組（P<0.01），其中存放5年的發(fā)酵茶灌胃后降低動(dòng)脈硬化指數(shù)的效果比同等濃度新茶組灌胃的要好，并且高濃度比低濃度的效果要好。

3 討論

研究顯示，當(dāng)年生產(chǎn)并發(fā)酵的的下關(guān)小沱茶和存放5年的發(fā)酵下關(guān)小沱茶中的主要功能成分茶多酚、酯型兒茶素與非酯型兒茶素等的含量明顯低于當(dāng)年生產(chǎn)的下關(guān)小沱茶新茶，但沒(méi)食子酸含量高于當(dāng)年生產(chǎn)的下關(guān)小沱茶新茶，個(gè)中原因可能與下關(guān)小沱茶在發(fā)酵過(guò)程中，茶葉中的茶多酚特別是酯型兒茶素與非酯型兒茶素均發(fā)生氧化降解，形成了小分子沒(méi)食子酸類等物質(zhì)有關(guān)[12，13]。與非酯型兒茶素相比，酯型兒茶素更容易氧化降解，導(dǎo)致下關(guān)小沱茶發(fā)酵茶中非酯型兒茶素占總兒茶素的比例逐漸增加。

當(dāng)年生產(chǎn)的下關(guān)小沱茶（包括新茶、發(fā)酵茶）與存放5年的發(fā)酵下關(guān)小沱茶中咖啡堿的含量沒(méi)有明顯差異，說(shuō)明下關(guān)小沱茶中咖啡堿的含量不會(huì)受到發(fā)酵的影響；但是在下關(guān)小沱茶茶湯灌胃小白鼠試驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，新茶灌胃組隨濃度增加，小白鼠興奮度增加，特別是高濃度的新茶灌胃組（2、3、4組）出現(xiàn)了高頻率的小白鼠爭(zhēng)斗現(xiàn)象，并有7只雄性小白鼠因?yàn)闋?zhēng)斗而死亡，而發(fā)酵茶灌胃組的小白鼠行為未見(jiàn)異常。相同濃度的新茶、發(fā)酵茶其咖啡堿含量相當(dāng)，而小白鼠興奮度出現(xiàn)差異的結(jié)果說(shuō)明新茶、發(fā)酵茶中的咖啡堿對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的興奮作用出現(xiàn)了差異，這可能與新茶、發(fā)酵茶中的咖啡堿存在形態(tài)有關(guān)。有研究表明，普洱發(fā)酵茶中的咖啡堿是以與茶多酚絡(luò)合的形態(tài)存在[14]，而絡(luò)合態(tài)的咖啡堿對(duì)動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)的興奮刺激能力明顯降低。

試驗(yàn)還從發(fā)酵的下關(guān)小沱茶中檢測(cè)到了洛伐他汀的存在（含量為0.08～0.09 μg/g），洛伐他汀是下關(guān)小沱茶在發(fā)酵過(guò)程中由青霉屬（Penicillium spp.）[15]和木霉屬（Trichoderma spp.）[16]的部分真菌產(chǎn)生的一種內(nèi)酯化合物，其在降低人類及動(dòng)物的總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇方面具有顯著效果。

高血脂癥主要是指人類體內(nèi)血清總膽固醇、甘油三酯高于正常值上限的脂代謝障礙病癥[17]，血清總膽固醇、甘油三酯水平升高是動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的重要危險(xiǎn)因素，尤其是同時(shí)伴有低密度脂蛋白膽固醇升高或高密度脂蛋白膽固醇降低時(shí)危險(xiǎn)性更大，因?yàn)榈兔芏戎鞍啄懝檀际怯绊憚?dòng)脈粥樣硬化疾病發(fā)生的重要誘導(dǎo)因素，其含量水平與冠心病發(fā)病率呈正相關(guān)[18]。動(dòng)脈硬化指數(shù)是血脂各成分及其之間的關(guān)系結(jié)合起來(lái)進(jìn)行綜合考慮、可反映患動(dòng)脈硬化疾病可能性高低的重要指標(biāo)。下關(guān)小沱茶茶湯灌胃高血脂癥模型小白鼠試驗(yàn)表明，下關(guān)小沱茶茶湯對(duì)小白鼠血清總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇均有明顯的降低作用。在不改變高脂飲食的情況下，通過(guò)下關(guān)小沱茶茶湯灌胃可以顯著降低高脂小白鼠的血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇的水平以及動(dòng)脈硬化指數(shù)，說(shuō)明下關(guān)小沱茶具有較好的降血脂和降低高脂小白鼠患動(dòng)脈硬化疾病的能力。

下關(guān)小沱茶降血脂動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果表明，發(fā)酵茶的效果優(yōu)于當(dāng)年新茶，說(shuō)明下關(guān)小沱茶降血脂功效可能跟茶多酚或兒茶素（特別是酯型兒茶素EGCG）的含量高低沒(méi)有必然的聯(lián)系；決定下關(guān)小沱茶降血脂功效高低的因素可能與其他功能成分如洛伐他汀有關(guān)，并且可能是下關(guān)小沱茶中的茶多酚與其他功能成分（如洛伐他汀等）協(xié)同作用的結(jié)果。

致謝：試驗(yàn)得到云南下關(guān)沱茶（集團(tuán)）股份有限公司多次提供樣品，特此致謝。

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