摘要：要讓百姓吃上放心的蔬菜，對(duì)蔬菜中農(nóng)藥殘留量檢驗(yàn)尤為重要，有機(jī)磷含量檢測(cè)是一個(gè)十分重要的環(huán)節(jié)，客觀公正檢測(cè)市場(chǎng)中流通蔬菜的有機(jī)磷含量，是質(zhì)量檢驗(yàn)人員的職責(zé)和義務(wù)，本文從專業(yè)角度介紹該指標(biāo)檢測(cè)的理論依據(jù)和實(shí)施的具體方法措施等。

關(guān)鍵詞：蔬菜 農(nóng)藥殘留 有機(jī)磷

根據(jù)調(diào)查報(bào)告中提到的有關(guān)農(nóng)副產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留問(wèn)題，它不僅關(guān)系到消費(fèi)者的身體健康，也關(guān)系到食品貿(mào)易的發(fā)展，因此已成為政府和百姓普遍關(guān)心的熱點(diǎn)問(wèn)題之一，而對(duì)老百姓日常生活每天都要購(gòu)買和食用的蔬菜尤顯重要。在栽培過(guò)程中濫用農(nóng)藥的現(xiàn)象也非常普遍，由蔬菜引起的食物中毒也頻頻發(fā)生。本設(shè)計(jì)方案從專業(yè)角度介紹蔬菜農(nóng)藥殘留中有機(jī)磷含量的檢測(cè)。

1 農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法的種類及特點(diǎn)

農(nóng)藥殘留含量的檢測(cè)方法分為兩大類，即生物測(cè)定方法和理化分析方法。生物測(cè)定方法，如活體生物測(cè)定法（利用細(xì)菌或敏感家蠅）、免疫生測(cè)定法（酶聯(lián)免疫法）、生化生物測(cè)定法（酶抑制法）等，其優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)方便、快速、經(jīng)濟(jì)，缺點(diǎn)是僅以定性分析為主，很難判斷各組分的準(zhǔn)確含量。理化分析方法即儀器分析法，是采用專業(yè)大型儀器對(duì)農(nóng)藥殘留含量進(jìn)行精確的定量分析，靈敏度高，可靠性強(qiáng)。為了定量準(zhǔn)確測(cè)定，本文主要以理化分析為主，介紹有機(jī)磷含量檢測(cè)的方案。

2 檢測(cè)的依據(jù)（有機(jī)磷的特點(diǎn)和儀器分析原理）

農(nóng)藥殘留中有機(jī)磷的種類很多，如敵敵畏、樂(lè)果、毒死蜱、久效磷、甲基對(duì)硫磷、喹硫磷等。有機(jī)磷是含有C-P鍵或C-O-P、C-S-P、C-N-P鍵的有機(jī)化合物，大部分不溶于水，而溶于有機(jī)溶劑，在中性和酸性條件下穩(wěn)定，不易水解，在堿性條件下易水解而失效。

氣質(zhì)聯(lián)譜是將氣相色譜儀和質(zhì)譜儀聯(lián)用的一種現(xiàn)代化大型專業(yè)檢測(cè)儀器。氣相色譜儀中利用物質(zhì)在流動(dòng)相與固定相中分配系數(shù)的不同，當(dāng)兩相作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，被測(cè)樣品組分在兩相之間進(jìn)行反復(fù)多次分配，諸組分的分配系數(shù)縱然只有微小差異，隨著流動(dòng)相（氣體）的移動(dòng)也可以有差距，最后被測(cè)樣品組分可得到分離，并被測(cè)定。但對(duì)組分定性時(shí)，若僅依據(jù)保留值，則難以對(duì)復(fù)雜未知物作出最終判斷。在質(zhì)譜儀中，有機(jī)分子在高真空下，受電子流轟擊或強(qiáng)電場(chǎng)作用，離解成各具特征質(zhì)量的碎片離子和分子離子。這些帶正電荷的離子，具有不同的質(zhì)荷比m/z（即相對(duì)離子質(zhì)量與電荷之比），在磁場(chǎng)中它們被分離。收集、記錄這些離子的信號(hào)及其強(qiáng)度，便可得到各組分的質(zhì)譜圖。根據(jù)圖中質(zhì)譜峰出現(xiàn)的位置進(jìn)行定性分析，根據(jù)質(zhì)譜峰的強(qiáng)度進(jìn)行定量分析。

蔬菜試樣中有機(jī)磷農(nóng)藥經(jīng)提取、分離、凈化后，在富氫焰上燃燒，以氫磷氧碎片的形式，放射出波長(zhǎng)526nm的特性光，這種特性光通過(guò)濾光片選擇后，由光電倍增管接收，轉(zhuǎn)換成電信號(hào)，經(jīng)微電流放大器放大后被記錄下來(lái)。試樣的峰面積或峰高與標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積或峰高相比，計(jì)算出試樣相當(dāng)?shù)暮俊?/p>

3 樣本的采集要求

在評(píng)價(jià)分析結(jié)果的可靠性時(shí)，樣本的規(guī)范采集是保證質(zhì)量的一個(gè)重要方面。采樣的原則是：所采集的樣本必須具有代表性，否則，再先進(jìn)的儀器設(shè)備，再仔細(xì)地操作，再好的重復(fù)性，結(jié)果也將毫無(wú)價(jià)值。采集的方法有：對(duì)角線法、S型法、Z型法、棋盤法、五點(diǎn)法等。采集的數(shù)量：3kg（不少于5個(gè)點(diǎn)）。采集的樣本需放入無(wú)污染的容器內(nèi)，如聚乙烯塑料袋（盒），并寫好標(biāo)簽，標(biāo)簽需放置于包裝內(nèi)外各一個(gè)，寫明編號(hào)、取樣日期等。包裝好的樣品應(yīng)立即送到實(shí)驗(yàn)室，運(yùn)輸途中避免樣本受損、污染。

4 樣本的預(yù)處理

采集的樣本送到實(shí)驗(yàn)室，對(duì)易揮發(fā)的農(nóng)藥要立即進(jìn)行分析。如在近日內(nèi)進(jìn)行分析的樣本，放在0～-5℃的冰箱內(nèi)保存，如近期不能分析的須將樣本放在-20℃的冰箱內(nèi)保存。植物樣本貯存時(shí)，細(xì)胞已凍壞，從冰箱取出后要立即分析。

5 樣本的前處理：提取、濃縮與凈化

樣品的前處理在色譜分析過(guò)程中是一個(gè)既耗時(shí)又極易引進(jìn)誤差的步驟，樣品前處理的好壞直接影響色譜分析的最終結(jié)果。因此要加強(qiáng)前處理，盡量去除基體；對(duì)相互干涉的目標(biāo)化合物可采用預(yù)分離方法，分成幾組再分別進(jìn)行測(cè)定等。樣品前處理的方法有好多種，使用時(shí)主要根據(jù)整個(gè)樣品和欲測(cè)組分的物理化學(xué)性質(zhì)以及所要使用的色譜對(duì)樣品的要求，同時(shí)也要考慮處理所需的時(shí)間和費(fèi)用。下面介紹的是有機(jī)磷含量測(cè)定中樣品前處理較為常用的兩種方法：

5.1 將待測(cè)樣品用四分法縮分至100g左右，細(xì)切均勻后，稱取50.0g放入攪拌杯內(nèi)（不銹鋼或玻璃制），加入50ml水和100ml丙酮，用攪拌機(jī)細(xì)碎3分鐘，勻漿液經(jīng)鋪有硅藻土的濾紙減壓抽濾，取濾液100ml移至500ml分液漏斗中。向?yàn)V液中加入10～15g氯化鈉，使溶液處于飽和狀態(tài)，猛烈振搖2～3分鐘，靜置10分鐘，使丙酮與水相分層，將水相放入250ml分液漏斗中，加50ml二氯甲烷振搖2分鐘，再靜置分層，放去下層水相，將二氯甲烷提取液與丙酮提取液合并，經(jīng)裝有20～30g無(wú)水硫酸鈉的玻璃漏斗脫水，濾入250ml圓底燒瓶中，再以約40ml二氯甲烷分?jǐn)?shù)次洗滌容器和無(wú)水硫酸鈉，并入燒瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（蒸發(fā)水浴溫度為40℃）濃縮至約2ml，加二氯甲烷定量至5ml。

5.2 稱取細(xì)切均勻的樣品50.0g放入搗碎器中，加入100ml乙腈-乙醇混合液（95+5，現(xiàn)配）搗碎5分鐘，加入15g氯化鈉，繼續(xù)搗碎5分鐘。轉(zhuǎn)移40ml上層有機(jī)相于200ml離心瓶中，加入15g無(wú)水硫酸鈉充分振蕩，高速離心5分鐘。定量移取30ml至200ml濃縮管中，通氮?dú)庠?5℃下濃縮至約5ml。在Envi-Carb固相萃取柱中加約2cm無(wú)水硫酸鈉，用5ml甲苯淋洗。1500mg SAX（陽(yáng)離子）固相萃取柱和PSA（陰離子）固相萃取柱分別用5ml甲苯淋洗。將75ml淋洗液儲(chǔ)備管、Envi-Carb固相萃取柱、SAX固相萃取柱和PSA固相萃取柱從上至下，按順序相連，用5ml乙腈-甲苯（3+1，現(xiàn)配）預(yù)淋。將濃縮液轉(zhuǎn)移到儲(chǔ)備管中，通氮?dú)鈱悠吠迫隕nvi-Carb柱中。每次用10ml乙腈-甲苯液淋洗，共淋洗4次，收集淋洗液于200ml濃縮瓶中并濃縮至小于1ml。加入約10ml丙酮再濃縮至2ml。

6 儀器測(cè)定

6.1 色譜柱：①弱極性毛細(xì)管柱：CP-sil5CB 30m×0.25mm（ID）×0.25um，相當(dāng)于SE-30填充柱。②中等極性毛細(xì)管柱：CP-sil24CB 30m×0.25mm（ID）×0.25um，相當(dāng)于OV-70填充柱。

6.2 檢測(cè)器：氮磷檢測(cè)器（TSD）。①載氣流量：2.0ml/

min。②檢測(cè)器氣體流量：氮?dú)?8ml/min，氫氣4.4ml/min，空氣175ml/min。③溫度：拉箱：采取程序升溫過(guò)程，根據(jù)不同的待測(cè)農(nóng)藥采用不同的溫度。a50℃（保持1min）升至250℃（保持4min），升溫速率15℃/min。b80℃（保持0.5min）升至280℃（保持6min），升溫速率20℃/min。汽化室：300℃。檢測(cè)器：300℃。

6.3 測(cè)定。①吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液注入氣相色譜儀中，確定各組分的保留時(shí)間。②配制有濃度梯度的混合標(biāo)準(zhǔn)液，吸取1μl注入色譜儀，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，以峰高或峰面積作為參考值。③吸取1μl試樣提取凈化液注入色譜儀分析，以保留時(shí)間定性，以所得的峰高或峰面積與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。④若出峰異?；驒z出結(jié)果差別較大，則吸取一定量的試樣提取凈化液注入色質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)進(jìn)行確證，將得到的質(zhì)譜圖同標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖相比較，來(lái)判斷檢出物質(zhì)的存在性。

7 檢測(cè)結(jié)果數(shù)據(jù)的處理

i組分有機(jī)磷農(nóng)殘含量按下式計(jì)算：

X■=■

Xi：i組分有機(jī)磷的含量，單位為mg/kg；

X：試樣提取液在分析后同標(biāo)準(zhǔn)曲線比較得到的含量，單位為mg/l；

V1：試樣提取液總體積，單位為ml；

V2：從濾液中取出用來(lái)凈化的體積，單位為ml；

V3：濃縮后的定容體積，單位為ml；

m：試樣的質(zhì)量，單位為g。

以青豆中毒死蜱為例計(jì)算：稱取樣品50.0（g），按5.1法前處理，得到試樣提取液總體積V1=150（ml），從中取出V2=100（ml）進(jìn)行凈化，濃縮后定容體積V3=5.0（ml）。吸取1μl（與標(biāo)樣相同的量）試樣凈化濃縮液注入色譜儀中測(cè)定得色譜圖，同標(biāo)準(zhǔn)曲線比較得到毒死蜱含量X=20.67（mg/l）代入計(jì)算式：

X■=■=■=3.1（mg/kg）

根據(jù)GB18406.1-2001《無(wú)公害蔬菜安全要求》，無(wú)公害蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥毒死蜱的最高殘留限量是1.0（mg/kg）故該青豆中農(nóng)藥毒死蜱含量超標(biāo)。

一般情況下，分析人員都需做平行性試驗(yàn)，即同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，分析人員、分析設(shè)備和分析時(shí)間都相同時(shí)，用同一分析方法對(duì)同一樣品進(jìn)行的雙份平行試驗(yàn)，根據(jù)測(cè)定結(jié)果之間的符合程度確定分析結(jié)果的可靠性。

8 影響分析數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的因素

8.1實(shí)驗(yàn)室環(huán)境：實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的溫度、濕度、氣壓、空氣中的懸浮微粒的含量等參數(shù)，都有可能影響儀器的性能或改變實(shí)驗(yàn)條件。例如溫度過(guò)高會(huì)促使樣品變質(zhì)，稱量不準(zhǔn)確。相對(duì)濕度低于40%，靜電作用變得明顯起來(lái)，對(duì)儀器和樣品都可能產(chǎn)生影響?？諝庵械膽腋∥⒘．a(chǎn)生靜電荷，處理樣品或貯存樣品的塑料袋極易吸附帶電微粒，引起樣品的沾污。

8.2 水和試劑：純水是分析工作中用量最大的，水的純度直接影響分析結(jié)果的可靠性。由金屬或玻璃蒸餾器蒸餾出的水不能滿足痕量分析工作的需要，多數(shù)情況下要先經(jīng)過(guò)離子交換，然后用石英蒸餾器進(jìn)行雙蒸餾。溶劑的選擇是提取的關(guān)鍵，既要注意溶劑本身的性質(zhì)，又要考慮樣品的狀況、農(nóng)藥的極性以及農(nóng)藥在試劑中代謝的情況。溶劑與所用溶質(zhì)的純度應(yīng)相當(dāng)，若其純度偏低，需經(jīng)蒸鎦或分鎦，收集規(guī)定沸程內(nèi)的鎦出液，必要時(shí)應(yīng)進(jìn)行檢驗(yàn)，質(zhì)量合格后再使用。

8.3 器皿和洗滌：分析中應(yīng)根據(jù)被測(cè)樣品的性質(zhì)及被測(cè)組分的含量水平，從器皿材料的化學(xué)組成和表面吸附、滲透性諸方面考慮選用合適的器皿。容器的洗滌也十分重要，不僅要洗去器壁表面上的臟異物，還要用一些特殊的方法洗去容器壁的吸附沾污。

8.4 儀器設(shè)備：通用的色譜檢測(cè)器價(jià)格便宜，操作簡(jiǎn)單，但并不是所有的檢測(cè)器都能用于危害殘留物的痕量分析，要根據(jù)所測(cè)試樣組分的性質(zhì)、儀器的特點(diǎn)及應(yīng)用范圍正確選擇。綜合優(yōu)化前處理、色譜分離和檢測(cè)的操作條件，減少峰的重疊，使目標(biāo)化合物峰盡量分開。

近年來(lái)，蔬菜食品中農(nóng)藥殘留量問(wèn)題日趨突出，百姓反響強(qiáng)烈。為了人民群眾的身體健康，為了農(nóng)副產(chǎn)品市場(chǎng)的健康發(fā)展，必須加強(qiáng)對(duì)農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)，提供準(zhǔn)確、可靠的檢驗(yàn)數(shù)據(jù)，給出公平、公正的檢驗(yàn)結(jié)論，為執(zhí)法提供有力的依據(jù)，確保農(nóng)副產(chǎn)品的質(zhì)量安全水平。

參考文獻(xiàn)：

[1]朱堅(jiān)，陳正夫等.食品中危害殘留物的現(xiàn)代分析技術(shù).上海：同濟(jì)大學(xué)出版社，2003.1.

[2]楊惠芬等.食品衛(wèi)生理化檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè).北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，1997.

[3]黃海.食品快速檢測(cè)技術(shù)與方法研究進(jìn)展[J].價(jià)值工程，2011（31）.

作者簡(jiǎn)介：

王巧林（1968-），女，江蘇常熟人，工程師，從事食品化工產(chǎn)品檢測(cè)。