孫文倩　曹碧蘭　顏廷凱　曾霓　陶銳　陳曉紅　曾令芬　方寧

[摘要]目的：觀察耳背靜脈放血治療扁平疣的臨床療效及檢測其對外周血T細胞亞群的影響。方法：應(yīng)用耳背靜脈放血治療扁平疣患者35例，雙側(cè)耳背每周放血1次，療程15周。觀察療效并于治療前后抽取患者的靜脈血，采用流式細胞儀檢測患者外周血T淋巴細胞亞群。結(jié)果：完成隨訪的33例患者總有效率為84.85%?；颊咴谥委熐癈D4+和CD4+/CD8+比值明顯低于正常對照組（P<0.05，P<0.01）；治療后均顯著升高（P<0.01），與正常對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。結(jié)論：耳背靜脈放血治療扁平疣有較好的臨床療效，可調(diào)節(jié)患者外周血T淋巴細胞亞群水平，提高患者的細胞免疫功能，導致疣體脫落。

[關(guān)鍵詞]扁平疣；耳背靜脈放血；T淋巴細胞亞群；流式細胞儀

[中圖分類號]R752.5+2 [文獻標識碼]A [文章編號]1008-6455（2013）09-0950-03

扁平疣是由人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染引起的表皮良性贅生物，常侵犯青少年的顏面、手背及前臂，其發(fā)生、發(fā)展和消退與機體的免疫功能狀態(tài)密切相關(guān)，尤其是細胞免疫。治療上主要有物理治療（如激光、冷凍等），抗病毒治療及免疫療法（主動免疫及被動免疫）等。耳穴治療扁平疣在我國已有多年歷史，且療效確切，總有效率為70%～100%，平均為91%，但既往的研究主要局限于臨床療效觀察[1]。為探討耳穴療法治療扁平疣的免疫機制，本研究應(yīng)用耳穴療法中常用的耳背靜脈放血法治療扁平疣，并觀察臨床療效和檢測其治療前后外周血T淋巴細胞亞群的水平，從免疫學的角度了解耳背靜脈放血對扁平疣患者免疫狀態(tài)的影響。

1 資料和方法

1.1一般資料：實驗組為2011年9月～2012年6月在遵義醫(yī)學院附屬醫(yī)院皮膚科門診就診的扁平疣患者35例，均符合扁平疣的臨床診斷標準[2]，完成耳背靜脈放血治療患者33例，失訪2例。在完成隨訪的病例中，男性12例，女性21例，年齡9～47歲，平均（21.97±7.54）歲，病程2月～7年，平均（2.09±1.75）年；患者皮損主要發(fā)生于面部和手背，少部分為頸部和前臂。入選患者3個月內(nèi)未接受過干擾素、胸腺肽及IL-2等抗病毒及免疫調(diào)節(jié)劑治療，且2月內(nèi)均無突然增多、發(fā)紅、發(fā)癢等癥狀；不伴有自身免疫性疾病、嚴重的系統(tǒng)性疾病和其他病毒感染性疾病。正常對照組15例，均為健康志愿者，其中男性6例，女性9例，平均年齡（26.28±4.25）歲。兩組性別和年齡方面無明顯差異；所有患者及對照組成員均知情同意。

1.2 耳背靜脈放血治療方法：患者取坐位，選患者耳背上1/3近耳輪處明顯靜脈1支，揉搓使其充血，75%酒精消毒后用左手拇指、食指將耳背拉平，中指頂于下，右手持消毒刀片，迅速刺破血管，擠壓出血約10滴，血止后，再以1cm×1.5cm大小的兩層消毒紗布敷于傷口上，并用膠布固定。雙側(cè)耳背每周放血1次，療程15周，治療過程中若疣體脫落即停止治療。

1.3 療效判定標準：痊愈：皮損全部消退，無新出皮疹；顯效：皮損消退>70%；有效：皮損消退在3O%～7O%或有個別新出皮疹；無效：皮損無變化或消退不足30%?？傆行?（痊愈例數(shù)+顯效例數(shù)+有效例數(shù)）/總例數(shù)×100%。

1.4 樣本采集：無菌條件下分別采集患者治療前、治療后及正常對照組EDTA抗凝靜脈血2ml立即送檢。

1.5 試驗方法

1.5.1 儀器與試劑：FACSCalibur流式細胞儀（美國BD公司）。主要試劑：外周血CD4-FITC/CD8-PE/ CD3-PerCP三色抗體、FACS Lysing Solution紅細胞裂解液（均來自美國BD公司）。

1.5.2 實驗操作：樣品測定管中加入熒光抗體CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PerCP20μl，抗凝血50μl混勻，避光靜置20min，再加入紅細胞裂解液200μl充分混勻，避光靜置15min后使用流式細胞儀進行檢測。激光室工作波長488nm，F(xiàn)ITC受激發(fā)后發(fā)綠色熒光，PE受激發(fā)后發(fā)橙色熒光，PerCP受激發(fā)后發(fā)深紅色熒光，每份樣品檢測20 000個細胞。測定結(jié)果采用MultiSET功能軟件分析。

1.6 統(tǒng)計學處理：采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對所得數(shù)據(jù)進行治療前后配對t檢驗，組間比較采用成組t檢驗；以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。數(shù)據(jù)采用 x±s表示。

2 結(jié)果

2.1 臨床療效：33例患者治療后痊愈20例（60.61%）；顯效5例（15.15%）；有效3例（9.09%）；無效5例（15.15%）；總有效率為84.85%。其中治愈患者中有18例在治療4～8周后局部皮疹突然增大、發(fā)紅、發(fā)癢或出現(xiàn)新發(fā)皮疹（起效標志），繼續(xù)治療2～3周后疣體脫落痊愈；2例患者皮疹消退無上述反應(yīng)過程，僅表現(xiàn)為原有皮疹逐漸變平至完全消退。治療過程中除有輕微疼痛外，療程結(jié)束后所有患者的耳背靜脈放血部位均未出現(xiàn)瘢痕和感染等任何不良反應(yīng)。

2.2 對外周血T淋巴細胞亞群的影響 患者在治療前CD4+和CD4+/CD8+比值明顯低于正常對照組（t=2.23，P<0.05；t=3.00，P<0.01）；而CD8+明顯高于正常對照組（t=2.66，P<0.05）；治療后與正常對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。治療前與治療后各指標比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01），詳見表1。

3 討論

扁平疣是一種病毒感染性皮膚病。雖然本病有自愈傾向，但因主要發(fā)生于青少年的面部、手背及前臂等暴露部位，嚴重影響美觀和身心健康，因此患者的治療愿望仍十分迫切。從本文臨床就診情況看以年輕女性患者居多，這可能是女性追求美的積極性高于男性所致，然而目前并沒有證據(jù)表明扁平疣的發(fā)病與性別有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示耳背靜脈放血治療扁平疣的總有效率為84.85%；治療前其CD4+和CD4+/CD8+比值降低，而CD8+明顯升高；提示機體存在免疫平衡紊亂。治療后患者的CD4+細胞、CD4+/CD8+比值較治療前顯著升高，CD8+細胞水平顯著下降，與正常對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義。提示耳背靜脈放血可以調(diào)節(jié)扁平疣患者外周血T淋巴細胞亞群水平，恢復(fù)機體的免疫平衡，增強機體的抗病毒能力，最終導致疣體脫落。本結(jié)果與以往的文獻報道相似[1，3-5]。

中醫(yī)認為扁平疣主要是人體感受潮濕毒邪，內(nèi)動肝火所致，其發(fā)生發(fā)展與內(nèi)在的臟腑功能及免疫、內(nèi)分泌、神經(jīng)等功能的失調(diào)密切相關(guān)[1，6]。耳廓上各耳穴與臟腑軀體的聯(lián)系是多途徑的，如耳穴針刺治療主要是通過神經(jīng)體液綜合調(diào)節(jié)來激發(fā)機體內(nèi)非特異性防御反應(yīng)，調(diào)動體內(nèi)各種免疫因素，提高抗御病邪的能力[7]。皮膚作為一個內(nèi)分泌組織，具有神經(jīng)內(nèi)分泌的功能與其他系統(tǒng)互相影響共同維持機體的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。近年來神經(jīng)一內(nèi)分泌一免疫（Neuro-endocrine-immunity Net work，NEI）網(wǎng)絡(luò)的提出和研究[8]拉近了中醫(yī)與現(xiàn)代醫(yī)學的距離；隨著分子生物學的發(fā)展，已逐步認為NEI網(wǎng)絡(luò)是生物體內(nèi)的精密、完整而且復(fù)雜的調(diào)節(jié)體系，正如針灸它本身并不提供任何外源性物質(zhì)，卻能通過NEI網(wǎng)絡(luò)，調(diào)節(jié)下丘腦一垂體一性腺（HPA）軸，產(chǎn)生一系列生理生化改變來維持機體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，恢復(fù)機體的內(nèi)分泌、免疫等功能而達到治療疾病的目的，在病理情況下發(fā)揮其雙向調(diào)節(jié)作用[8-9]。

針對臨床療效的差異性，可能與多種因素有關(guān)，如宿主的主要組織相容性復(fù)合體（MHC）的多態(tài)性、患者感染HPV的類型和數(shù)量，以及患者的年齡、病程等，因此臨床呈現(xiàn)出個體之間不同的治療效果。但耳背靜脈放血治療扁平疣總體療效滿意，方法簡單且不良反應(yīng)小，患者容易接受，值得臨床推廣。

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[收稿日期]2013-03-22 [修回日期]2013-04-24

編輯/張惠娟