盧健敏

(泉州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校,福建 泉州 362000)

變態(tài)反應(yīng)性鼻炎(AR)為耳鼻喉科常見病，由于環(huán)境等因素其發(fā)病率逐年上升，目前尚無根本有效的治療方法，給病患的生活和工作造成諸多負(fù)面影響。本病屬祖國醫(yī)學(xué)“鼻鼽”“鼽嚏”范疇，其病機(jī)與肺、脾、腎功能失調(diào)密切相關(guān)。針刺療法是祖國醫(yī)學(xué)治療疾病的重要方法，本實(shí)驗(yàn)對針刺治療大鼠變應(yīng)性鼻炎的機(jī)制進(jìn)行初步探討。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 健康SD大鼠，SPF級，180～220 g，雌雄各半。由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限公司提供，許可證號：scxk(滬)2007-0006，飼養(yǎng)于泉州醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校實(shí)驗(yàn)中心，室內(nèi)溫度控制在20～25 ℃，相對濕度控制在60%～80%。

1.2 藥物與試劑 氯雷他啶粉碎后用生理鹽水配成0.03%的混懸液。卵白蛋白：上?；瘜W(xué)試劑廠(20100212)。IL-5試劑盒,深圳晶美公司生產(chǎn)。PCR引物，TaKaRaRNAPCRKit(AMV)Ver.3.0試劑，購自寶生物工程(大連)有限公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組 將大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為空白組、模型組、針刺組、藥物對照組,每組各10只。

2.2 AR模型的建立 按照安氏的方法[1]。對模型組、針刺組、藥物對照組動物進(jìn)行造模，造模動物以卵白蛋白(OVA)0.30 mg，氫氧化鋁粉末30 mg加生理鹽水至l mL形成混懸液，腹腔內(nèi)注射，隔日1次，共7次。腹腔注射免疫完成后, 每側(cè)鼻腔均以5% OVA的生理鹽水溶液20 μL局部免疫，每日1次，共7次。

2.3 干預(yù)方法 鼻部激發(fā)的同時(shí)分別對針刺組進(jìn)行針刺干預(yù)、對藥物對照組動物進(jìn)行藥物干預(yù)，藥物對照組用氯雷他啶混懸液0.1 mg/(kg·d)，灌胃[2],每日1次，共7次。

針刺組穴位參照華氏[3]及動物比較學(xué)方法選取。雙側(cè)后(足)三里：膝關(guān)節(jié)后外側(cè)在腓骨小頭下約5 mm處；肺俞：第3胸椎棘突下兩旁肋間；腎俞：第2腰椎下旁開約3 mm，各穴位采用直刺法，用醫(yī)用毫針直刺皮膚表層后放手，刺入深度分別為足三里穴約3 mm、肺俞穴約2 mm、腎俞穴約2 mm，留針30 min，每5 min行捻轉(zhuǎn)手法刺激1次，每次1 min，連續(xù)7 d；模型組用生理鹽水灌胃2 mL/次，每日1次，共7次。

2.4 觀察指標(biāo)及檢測方法

2.4.1 血清白細(xì)胞介素-5(IL-5)含量測定 25%烏拉坦腹腔注射麻醉后將大鼠仰臥位固定。腹腔主動脈取血4 mL，放入離心機(jī)離心，取上清液，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法，嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行操作。

2.4.2 鼻黏膜IL-5 mRNA表達(dá)的檢測 取血后取鼻黏膜,用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法，進(jìn)行IL-5 mRNA(信使RNA)水平表達(dá)的檢測。具體方法：從美國國立衛(wèi)生院所維護(hù)的國際權(quán)威數(shù)據(jù)庫網(wǎng)站獲得最新版本的SD大鼠IL-5和內(nèi)參基因β-actin的mRNA序列。利用引物設(shè)計(jì)專業(yè)軟件Primer 5.0設(shè)計(jì)其引物。然后委托大連寶生物工程有限公司完成引物合成。IL-5m RNA引物:5’-GAGGCTTCCTGTTCCTACTC-3’，3’-TCACCCGTTACCTTCAGACT-5’，采用美國TriZol試劑一步法提取總RNA→反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)→PCR反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)果通過凝膠電泳分析系統(tǒng)檢測。

3 結(jié)果

對大鼠血清IL-5含量及鼻黏膜IL-5 mRNA相對表達(dá)量的影響：見表1。

表1 對大鼠血清IL-5含量及鼻黏膜IL-5 mRNA相對表達(dá)量的影響(±s，n=10)

4 討論

AR是臨床常見的非感染性疾病，以鼻癢、噴嚏、清涕、鼻塞為主要表現(xiàn)，AR并不是一個孤立的疾病，常與哮喘、鼻竇炎等合并存在，本病發(fā)病機(jī)理復(fù)雜，是由多種細(xì)胞，多種細(xì)胞因子和多種傳導(dǎo)途徑作用于鼻部的結(jié)果[4]。人類IL-5主要由活化Th2亞群細(xì)胞產(chǎn)生[5]。IL-5調(diào)控著嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)的產(chǎn)生、活化和分布，它能激發(fā)EOS在變應(yīng)性炎癥局部浸潤，從而發(fā)揮生物學(xué)功能，IL-5可使EOS存活時(shí)間延長，抑制EOS的凋亡[6]。IL-5可作為AR療效評價(jià)的一個指標(biāo)[7]。

AR與祖國醫(yī)學(xué)的“鼻鼽”相類似。本病多由臟腑虛損，衛(wèi)表不固，風(fēng)寒異氣侵襲而致，屬本虛標(biāo)實(shí)之證，其病位在肺與脾腎有關(guān)。故針刺穴位治療AR可從溫肺散寒、補(bǔ)腎健脾等方面進(jìn)行[8]。研究[9]表明針刺穴位能夠調(diào)節(jié)人體的免疫功能，可通過影響患者總IgE和特異性IgE進(jìn)而對變應(yīng)性疾病起治療作用。腎俞、肺俞，分別為肺、腎兩臟的背俞穴，是兩臟之氣輸注于背腰部的穴位，針刺該穴可以起到補(bǔ)益肺腎的作用，后(足)三里是足陽明胃經(jīng)的合穴有健脾和胃的功效。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：針刺腎俞、肺俞、后(足)三里可能是通過降低AR大鼠血清IL-5含量,抑制鼻黏膜組織IL-5 mRNA的表達(dá)進(jìn)而對AR起治療作用。

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