許英健 史曉凡

（中國(guó)刑警學(xué)院 遼寧 沈陽(yáng) 110035）

闊葉木樹(shù)皮浸提物的高效液相色譜法分析

許英健 史曉凡

（中國(guó)刑警學(xué)院 遼寧 沈陽(yáng) 110035）

木屑是各種刑事案件、交通肇事案件現(xiàn)場(chǎng)中常見(jiàn)的微量物證之一，對(duì)木屑檢材與比對(duì)樣品進(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定，可以為偵破案件提供科學(xué)的依據(jù)。研究以甲醇為提取劑，對(duì)闊葉木樹(shù)皮進(jìn)行了有效的提取，對(duì)浸提物進(jìn)行了高效液相色譜分析，根據(jù)樹(shù)皮浸提物的外觀顏色、高效液相色譜特征的差異對(duì)不同樹(shù)種闊葉木樹(shù)皮進(jìn)行了有效的鑒別。

闊葉木 樹(shù)皮 浸提物 高效液相色譜法

木材是用途極為廣泛的一種物資，不僅在各種建設(shè)上占有重要的地位，而且在人們的日常工作、生活中也是不可缺少的。因此在縱火、盜竊、兇殺、強(qiáng)奸、破壞森林、毀壞果樹(shù)等各種刑事案件及交通肇事案件現(xiàn)場(chǎng)上，往往會(huì)有微量的木屑?xì)堅(jiān)z留在犯罪嫌疑人和被害人的遺留物及作案工具上。此時(shí)木屑?xì)堅(jiān)N類(lèi)的鑒別及木屑檢材與比對(duì)樣品異同的鑒定結(jié)論可以為快速、準(zhǔn)確地推斷案件的第一現(xiàn)場(chǎng)、尸源、犯罪嫌疑人的職業(yè)特征等提供依據(jù)，從而為縮小偵察范圍、偵破案件提供有價(jià)值的線索。

木材一般分為針葉木材和闊葉木材。闊葉木樹(shù)葉寬大呈片狀，大多數(shù)為落葉樹(shù)，樹(shù)干通直部分較短，密度較大，材質(zhì)較堅(jiān)硬，國(guó)外多稱(chēng)為硬材(hardwood)，種類(lèi)較多。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外法庭科學(xué)工作者在木屑種類(lèi)鑒別方面進(jìn)行了一些研究，建立了一些分析方法，主要有顯微鏡法、氣相色譜法、氣－質(zhì)聯(lián)用法、傅立葉變換紅外光譜法、高效液相色譜法等。

本文以甲醇為提取劑，對(duì)闊葉木樹(shù)皮進(jìn)行了有效的提取，浸提物進(jìn)行了高效液相色譜分析，依據(jù)浸提液外觀顏色的異同可對(duì)不同樹(shù)種樹(shù)皮樣品進(jìn)行初步的檢驗(yàn)，進(jìn)一步依據(jù)色譜圖中特征峰的數(shù)目、保留時(shí)間、峰形的差異能夠?qū)Σ煌瑯?shù)種闊葉木樹(shù)皮的種類(lèi)進(jìn)行鑒別。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 樣品

不同樹(shù)種的樹(shù)皮樣品共67種，詳見(jiàn)表1。

1.2 試劑

甲醇（色譜純），純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)）。所有溶液在使用前均經(jīng)過(guò)0.45μm濾膜過(guò)濾脫氣。

1.3 儀器及條件

日立L-7100液相色譜儀，L-7420 UV-VIS檢測(cè)器，L-7300柱溫箱，D-7000型HPLC管理系統(tǒng)；AS5150A超聲波清洗器（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）。

色譜柱：ZORBAX SB-C18色譜柱5μm4.6× 150mm；檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm，柱溫：35℃，流動(dòng)相A：甲醇，流動(dòng)相B：水，梯度洗脫條件：0～8min，80B；8.1～35min，30%B；35.1～45min，80%B；進(jìn)樣體積：10μl。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 樹(shù)皮浸提成分的高效液相色譜分析

用手術(shù)刀分別削取上述67種不同樹(shù)種的樹(shù)皮樣品少許，放入試管中，加入約0.5ml甲醇，超聲波提取10min，提取液進(jìn)行高效液相色譜分析。

1.4.2 樹(shù)皮浸提成分高效液相色譜分析重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)按1.4.1所述方法分別對(duì)18號(hào)樣品（遼寧沈陽(yáng)桃樹(shù)樹(shù)皮）及62號(hào)樣品（湖北房縣漆樹(shù)樹(shù)皮）平行進(jìn)行三次測(cè)定。

表1 67種樹(shù)皮樣品一覽表

2 結(jié)果和討論

2.1 樹(shù)皮浸提成分高效液相色譜分析的理論依據(jù)

樹(shù)皮浸提成分比木材浸提成分的含量多，種類(lèi)復(fù)雜。主要有蠟和脂類(lèi)、萜類(lèi)和樹(shù)脂酸、植物甾醇和毛地黃苷類(lèi)、色素、黃烷醇類(lèi)及其聚合物、鞣質(zhì)、木質(zhì)酚類(lèi)及酚苷類(lèi)、蛋白質(zhì)和生物堿等。不同樹(shù)種樹(shù)皮中浸提成分不同，而且同樹(shù)種不同產(chǎn)地的樹(shù)皮，因生長(zhǎng)環(huán)境的不同其浸提成分的種類(lèi)也可能不同。如扭葉松樹(shù)皮中含有雙氫槲皮素、雙氫楊梅皮素、香橙素、短葉松素，而黃松樹(shù)皮中則含有槲皮素，松槲皮素、β-甲基槲皮素、松楊梅皮素和雙氫槲皮素。不同樹(shù)種樹(shù)皮、不同產(chǎn)地同樹(shù)種樹(shù)皮浸提成分組成上的差異可以通過(guò)高效液相色譜特征反映出來(lái)，這就是利用高效液相色譜法鑒別樹(shù)皮種類(lèi)的依據(jù)。

2.2 不同樹(shù)種闊葉木樹(shù)皮浸提物的外觀分析

由于不同樹(shù)種樹(shù)皮所含浸提物的組成成分不同，特別是其所含色素成分不同，導(dǎo)致其浸提液的外觀顏色不同。據(jù)此可對(duì)其進(jìn)行大類(lèi)的分析，67種樹(shù)皮浸提物的顏色分類(lèi)見(jiàn)表2。

表2 67種樹(shù)皮浸提物的顏色分類(lèi)

2.3 不同樹(shù)種樹(shù)皮浸提成分的高效液相色譜分析

67種不同樹(shù)種樹(shù)皮浸提成分的液相色譜譜圖特征是色譜峰集中分布在二個(gè)區(qū)域，A區(qū)域?yàn)?.00～10.0min，B區(qū)域?yàn)?0.0～40.0min。根據(jù)67種不同樹(shù)種樹(shù)皮浸提成分在這二個(gè)區(qū)域中色譜峰峰數(shù)、峰形的不同可將其分為五大類(lèi)，分類(lèi)情況見(jiàn)表3，色譜圖見(jiàn)圖1。

表3 67種樹(shù)皮浸提成分的HPLC數(shù)據(jù)分析

圖1 五類(lèi)樹(shù)皮浸提物的HPLC圖

以第Ⅰ類(lèi)中的11種樣品為例，根據(jù)11種樹(shù)皮樣品浸提成分高效液相色譜圖A區(qū)中色譜峰數(shù)的不同可進(jìn)一步將其分為四類(lèi)，第Ⅰ-1類(lèi)和第Ⅰ-4類(lèi)各只有1種樣品，其浸提成分的液相色譜特征差異明顯，可一一區(qū)別。第Ⅰ-2類(lèi)、Ⅰ-3類(lèi)分別有6種、4種樣品，雖然同類(lèi)樣品之間A區(qū)中色譜峰數(shù)相同，但B區(qū)中色譜峰數(shù)、峰的保留時(shí)間及峰形均有差異，可以一一鑒別，具體分類(lèi)見(jiàn)表4，第Ⅰ類(lèi)中三種樹(shù)皮浸提成分的HPLC圖見(jiàn)圖2。同理，其它四類(lèi)樣品也可按照A區(qū)中色譜峰數(shù)、B區(qū)中色譜峰數(shù)的差異進(jìn)一步鑒別。

表4 第Ⅰ類(lèi)11種樹(shù)皮浸提成分的HPLC數(shù)據(jù)分析

圖2 第Ⅰ類(lèi)三種樹(shù)皮浸提成分的HPLC圖

2.4 重現(xiàn)性和精密度的考察

樹(shù)皮浸提成分三次平行測(cè)定所得到的高效液相色譜圖中色譜峰的峰數(shù)、保留時(shí)間、峰形相同，峰高比相近。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本文建立的樹(shù)皮浸提物高效液相色譜分析法，具有較好的重現(xiàn)性，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表5。

表5 重現(xiàn)性精密度實(shí)驗(yàn)

3 結(jié)論

在確定的高效液相色譜分析條件下，樹(shù)皮浸提成分的各組分得到了有效的分離。不同樹(shù)種、同樹(shù)種不同產(chǎn)地樹(shù)皮樣品浸提成分的高效液相色譜圖具有一定的特異性，依據(jù)色譜峰的峰數(shù)、保留時(shí)間、峰形等的不同可以對(duì)67種樹(shù)皮進(jìn)行類(lèi)別的鑒定。

1.李瓊瑤.司法物證鑒定技術(shù)[M].北京：中國(guó)民主法制出版社，2005

2.HiroakiYokoi.Rapid characterizeation of wood extractives in wood by thermal desorption-gas chromatography in the presence of tetramethylammonium acetate[J].Journalof AnalyticalandApplied Pyrolysis，2003，67

3.M.P.Fernandez.Gas Chromatography-Mass Specrometrymethodforthesimultaneousdetermination of woodextractivecompoundsinquakingaspen[J].Journal of Chromatography，2001，922

4.K.K.PANDEY.AStudyofChemicalStructure of Soft and Hardwood and Wood Polymers by FTIR Spectroscopy[J].Journal of Applied Polymer Science，1999，71

5.周佳璐，叢培盛.利用氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)木材進(jìn)行分類(lèi)和鑒別[J].建筑材料學(xué)報(bào)，2006，9（1）

6.池玉杰.6種白腐菌腐朽后的山楊木材和木質(zhì)素官能團(tuán)變化的紅外光譜分析[J].林業(yè)科學(xué)，2005，41（2）

7.邵建章.裂解氣相色譜法分析火場(chǎng)燃燒殘留物的研究[J].理化檢驗(yàn)(化學(xué)分冊(cè))，2004，40（7）

注：本文系公安部應(yīng)用創(chuàng)新項(xiàng)目“犯罪現(xiàn)場(chǎng)常見(jiàn)木屑綜合檢測(cè)方法的研究”的階段性成果，項(xiàng)目編號(hào)：2005YYCXXJXY041。