張文漢，胡素君，熊家愔，蘇 蘭，彭金玲，李 創(chuàng)，楊北兵

兒童腹瀉是一種常見疾病,其中50%以上的重癥腹瀉是由產(chǎn)毒性大腸埃希菌(ETEC)感染引起。對(duì)發(fā)展中國家兒童的研究顯示，ETEC每年可引起2.1億次兒童腹瀉，約導(dǎo)致38萬兒童死亡[1-3]。嚴(yán)重的ETEC感染性腹瀉也會(huì)導(dǎo)致兒童生長發(fā)育遲滯[4- 5]。所以專家建議發(fā)展中國家應(yīng)將接種兒童ETEC腹瀉疫苗納入到擴(kuò)大免疫規(guī)劃(EPI)當(dāng)中。本研究探討了重組B亞單位/菌體霍亂疫苗(商品名可唯適疫苗，深圳聯(lián)合賽爾生物科技有限公司生產(chǎn))對(duì)兒童ETEC感染性腹瀉的預(yù)防效果，旨在為社區(qū)預(yù)防兒童腹瀉提供參考依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇2011年3月—2012年9月深圳市上梅林社區(qū)門診2～12周歲有ETEC感染性腹瀉史的兒童108例。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)對(duì)可唯適疫苗成分過敏者；(2)急性發(fā)熱性疾病患者；(3)急性腹瀉患者；(4)試驗(yàn)前3個(gè)月內(nèi)接受過輸血、皮質(zhì)激素、其他疫苗或者免疫調(diào)節(jié)劑者；(5)原發(fā)性免疫缺陷者。采用簡單隨機(jī)抽樣方法將108例受試者分為疫苗組與對(duì)照組，每組54例。疫苗組中男32例，女22例；平均年齡(5.2±3.9)歲。對(duì)照組中男30例，女24例；平均年齡(4.8±3.2)歲。服苗前6個(gè)月內(nèi)兒童ETEC感染性腹瀉次數(shù)疫苗組平均為(7.2±2.1)次，對(duì)照組平均為(6.8±1.7)次。兩組兒童的性別、年齡及服苗前感染性腹瀉次數(shù)間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.859，P=0.562；t=1.940，P=0.255；t=1.256，P=0.356)，具有可比性。

1.2 研究方法 采用隨機(jī)、雙盲、對(duì)照的方法，疫苗組給予口服可唯適疫苗，對(duì)照組給予安慰劑(LB培養(yǎng)基干粉膠囊)。由不參加觀察的專職醫(yī)師將可唯適疫苗按1包/人(3粒/包)予以電腦隨機(jī)編號(hào)，疫苗組兒童通過電腦隨機(jī)編號(hào)后給予相應(yīng)編號(hào)的疫苗。安慰劑與可唯適外觀、顏色及味道一致。參與研究的醫(yī)師及兒童均不知曉分組及用藥情況。觀察期間分3次(第0、7、28 d)給予兩組兒童口服可唯適疫苗和安慰劑，1粒/次。兩組均隨訪觀察12個(gè)月，前6個(gè)月每2周復(fù)訪1次，后6個(gè)月每4周復(fù)訪1次。隨訪期間由兒童家長填寫每日登記卡，記錄出現(xiàn)的ETEC感染性腹瀉次數(shù)及預(yù)防接種后的異常反應(yīng)。兩組兒童口服疫苗前和全程服苗后2周取空腹靜脈血進(jìn)行血常規(guī)、腎功能檢查，且在服苗前及首次服苗2、6、12個(gè)月時(shí)取靜脈血，在全程服苗后1、2、4周時(shí)留取血液與糞便行抗體〔抗霍亂毒素(抗-CT)、抗霍亂弧菌脂多糖(抗-LPS)、殺弧菌抗體(Vab)〕陽轉(zhuǎn)率及抗體滴度測(cè)定。按照服苗后所有抗體升高≥2倍判斷為抗體陽轉(zhuǎn)。觀察期間不使用其他免疫調(diào)節(jié)劑及血制品。

2 結(jié)果

2.1 全程服苗后ETEC感染性腹瀉發(fā)生率比較 疫苗組兒童全程服苗后12個(gè)月內(nèi)ETEC感染性腹瀉發(fā)生率為3.7%(2/54)，低于對(duì)照組的13.0%(7/54)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=95.264，P<0.001)。

2.2 全程服苗后ETEC感染性腹瀉次數(shù)比較 疫苗組兒童全程服苗后12個(gè)月內(nèi)ETEC感染性腹瀉平均次數(shù)為(0.9±0.5)次，少于對(duì)照組的(5.2±0.8)次，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.936，P<0.05)。

2.3 抗體陽轉(zhuǎn)率比較 血清抗體：首次服苗后2、6、12個(gè)月疫苗組3種抗體陽轉(zhuǎn)率均較對(duì)照組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且服苗后6個(gè)月抗體陽轉(zhuǎn)率高于2、12個(gè)月(P<0.05，見表1)。糞便抗體：全程服苗后1、2、4周疫苗組與對(duì)照組3種抗體陽轉(zhuǎn)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；疫苗組4周3種抗體陽轉(zhuǎn)率高于1、2周(P<0.05，見表2)。

2.4 血清和糞便抗體滴度比較 血清抗體幾何平均滴度(GMT)：兩組血清抗體GMT服苗前差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，首次服苗后2、6、12個(gè)月比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；且首次服苗后6個(gè)月均高于首次服苗后2、12個(gè)月(P<0.05，見表3)。糞便抗體GMT：兩組糞便抗體GMT服苗前差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，全程服苗后1、2、4周比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；且疫苗組全程服苗后1、2周與4周比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表4)。

2.5 服苗前和全程服苗后血常規(guī)與肝功能比較 服苗前后疫苗組與對(duì)照組白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、中性粒細(xì)胞分?jǐn)?shù)、血尿素氮(BUN)及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)水平比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；兩組服苗前WBC、中性粒細(xì)胞分?jǐn)?shù)、血BUN及ALT水平與全程服苗后比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見表5)。

表1 兩組首次服苗后血清抗體陽轉(zhuǎn)率比較(%)

注：抗-CT=抗霍亂毒素，抗-LPS=抗霍亂弧菌脂多糖，Vab=殺弧菌抗體；與對(duì)照組比較，*P<0.05；與疫苗組首次服苗后6個(gè)月比較，△P<0.05

表2 兩組全程服苗后糞便抗體陽轉(zhuǎn)率比較(%)

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與疫苗組全程服苗后4周比較，△P<0.05

表3 兩組服苗前和首次服苗后血清抗體GMT比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與疫苗組首次服苗后6個(gè)月比較，△P<0.05

表4 兩組服苗前和全程服苗后糞便抗體GMT比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與疫苗組全程服苗后4周比較，△P<0.05

表5 兩組兒童服苗前和全程服苗后血常規(guī)與肝功能比較

注：WBC=白細(xì)胞計(jì)數(shù)，BUN=尿素氮，ALT=丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶

2.6 不良反應(yīng) 研究過程中疫苗組出現(xiàn)發(fā)熱2例，嘔吐1例，腹痛1例；對(duì)照組出現(xiàn)發(fā)熱3例。以上病例程度較輕，均不需特殊處理，無兒童因不良反應(yīng)而退出。兩組不良反應(yīng)發(fā)生率間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.002，P=1.000)。

3 討論

3.1 免疫效果 本研究采用可唯適疫苗對(duì)ETEC感染性腹瀉兒童的接種效果進(jìn)行探討，結(jié)果顯示疫苗對(duì)兒童ETEC感染性腹瀉有良好的抑制作用，疫苗組3種抗體(抗-CT，抗-LPS，Vab)的陽轉(zhuǎn)率和GMT均高于對(duì)照組；且抗體水平在服苗后1～2個(gè)月迅速升高，糞便抗體的出現(xiàn)先于血清抗體，并略低于血清抗體，與國內(nèi)外同類研究結(jié)果接近[2,6-7]。疫苗組全程服苗12個(gè)月后3種抗體陽轉(zhuǎn)率和GMT仍高于服苗前及對(duì)照組，表明可唯適疫苗所產(chǎn)生的腸道局部免疫至少可維持1年，這與Wei等[3]和Xu等[4]研究顯示的可維持半年的結(jié)果不一致，這可能與血清抗體主要反映腸道局部抗體的產(chǎn)生與存在情況有關(guān)。

3.2 安全性 最近一項(xiàng)在北美軍人中進(jìn)行的研究表明,口服霍亂疫苗有惡心和腹痛的不良反應(yīng)[1，5]。本研究疫苗組出現(xiàn)2例發(fā)熱、1例嘔吐、1例腹痛，均不需特殊處理，未影響疫苗的免疫效果,提示疫苗是安全的。

本研究樣本來自社區(qū)有ETEC感染性腹瀉史的易感兒童，研究結(jié)果相對(duì)局限，樣本量也相對(duì)較小，希望今后進(jìn)行規(guī)模較大的流行病學(xué)調(diào)研，以擴(kuò)大接種范圍，提高此疫苗的服苗率。

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2 Rivera FP,Medina AM,Aldasoro E,et al.Genotypic characterization of enterotoxigenic Escherichia coli strains causing traveler′s diarrhea[J].J Clin Microbiol,2013,51(2):633-635.

3 Wei M,Tong M,Hao J,et al.Detection of coal dust in a mine using optical tomography[J].Journal of Mining Science and Technology,2012,22(4):523-527.

4 Xu S,Shui P.Performance analysis of multi-channel order statistics detector for range-spread target[J].Systems Engineering and Electronics,2012,23(5):689-699.

5 Gao FQ,Zhao SJ.Moderate deviations and hypothesis testing for signal detection problem[J].Chinese Science,2012,55(11):2273-2284.

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