王紅艷，張先庚，劉 琴，梁小利，彭德忠

《素問(wèn)·舉痛論》云：“余知百病生于氣也，恐則氣下，恐則精卻，卻則上焦閉，閉則氣還，還則下焦脹，故氣下行矣”[1]?？譃槟I志，恐則氣下，恐則精卻，過(guò)度恐懼可致腎精虧虛。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)恐傷腎的中醫(yī)病因病機(jī)理論，用模擬地震恐嚇孕鼠[2]，傷其腎精，造成孕鼠腎精虧虛，并給予金匱腎氣丸進(jìn)行干預(yù)，以此研究金匱腎氣丸對(duì)孕鼠產(chǎn)仔數(shù)量及仔鼠出生體質(zhì)量、多巴胺水平的調(diào)節(jié)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠72只，其中雌性48只，雄性24只；體質(zhì)量224.5～260.5 g，均無(wú)生育史。由成都達(dá)碩生物科技有限公司〔生產(chǎn)合格證號(hào)：SCXK(川)2008-24〕 提供。實(shí)驗(yàn)前置SD大鼠于室溫內(nèi)適應(yīng)環(huán)境1周，室溫20～22 ℃，濕度50%～60%。飼料由成都達(dá)碩生物科技有限公司〔生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(川)2010-01〕 提供。

1.1.2 藥物 金匱腎氣丸：由中藥地黃、山藥、山茱萸(酒炙)、茯苓、牡丹皮、澤瀉、桂子、附子(炙)、牛膝(去頭)、車前子(鹽炙)組成，北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)8030876。

1.1.3 儀器與試劑 地震測(cè)速器(由成都高新減災(zāi)研究所研制，成都市美幻科技有限公司生產(chǎn))、Multiskan MK3型酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo Electron Corporation，編號(hào)：BKY-ZX-014)、LD5-10B型低速離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠，編號(hào)：BKY-ZX-0162)、天平秤、多巴胺(201112,dze30326)試劑盒(生產(chǎn)公司：R&D Systems China Co.Ltd)、微量加液器、吸頭、EP管，眼科剪等手術(shù)器械。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組 按雌∶雄2∶1比例隨機(jī)配對(duì)交配，次日清晨發(fā)現(xiàn)陰栓者為妊娠，當(dāng)天作為受孕的第1天，發(fā)現(xiàn)妊娠后分籠飼養(yǎng)。將34只初次受孕孕鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組11只，體質(zhì)量(234.9±2.2)g；地震組11只，體質(zhì)量(235.0±2.0)g；中藥組12只，體質(zhì)量(235.2±2.0)g。3組體質(zhì)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.186，P=0.767)。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 將3組孕鼠放置于標(biāo)準(zhǔn)鼠籠中飼養(yǎng)，從孕期第1天開(kāi)始給予相同的飲水(自來(lái)水)和光照。地震組和中藥組模擬地震震動(dòng)2次/d，15～20 min/次。利用地震測(cè)速器測(cè)定數(shù)據(jù)如下：烈度:9.6～10.5,三軸合成峰值加速度:1 350～1 400 mg,水平合成峰值加速度:1 000～1 050 mg，東西向峰值加速度:850～900 mg,南北向峰值加速度:1 050～1 100 mg,垂直向峰值加速度:800～850 mg。中藥組用藥量按成人公斤體質(zhì)量用量的10倍進(jìn)行折算(根據(jù)成人體質(zhì)量50～60 kg，每日服用約10 g，折算出250～300 g體質(zhì)量的大鼠服用量為0.5～0.6 g/d)，將中藥金匱腎氣丸研碎后混入常規(guī)飼料中喂養(yǎng)。地震組和對(duì)照組喂養(yǎng)普通飼料。模擬地震刺激及中藥飼料喂養(yǎng)持續(xù)干預(yù)至孕期第19天后停止，將每只孕鼠單獨(dú)放置于標(biāo)準(zhǔn)孕鼠盒飼養(yǎng)，待產(chǎn)仔后各組按統(tǒng)一方法飼養(yǎng)，停止干預(yù)措施。

1.2.3 觀察指標(biāo)及測(cè)定 觀察恐傷孕鼠死亡率、產(chǎn)仔率、產(chǎn)仔數(shù)量及仔鼠出生體質(zhì)量，飼養(yǎng)至25 d，仔鼠部分死亡，對(duì)照組存活35只、地震組24只、中藥組34只，測(cè)量仔鼠的行為能力(亮盒排便實(shí)驗(yàn))。同時(shí)在各組隨機(jī)抽取10只，共30只仔鼠，從股動(dòng)脈采全血2 ml，全血標(biāo)本于室溫放置10～20 min凝固分層后，離心半徑15 cm，2 000～3 000 r/min,離心20 min，收集上清液。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)多巴胺水平，按說(shuō)明書操作，Multiskan MK3型酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度，吸光度的檢測(cè)波長(zhǎng)為 450 nm。

2 結(jié)果

2.1 3組孕鼠死亡率、產(chǎn)仔率及產(chǎn)仔數(shù)量比較 地震組死亡3只，對(duì)照組和中藥組均無(wú)死亡孕鼠。3組產(chǎn)仔率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見(jiàn)表1)。

表1 3組仔鼠產(chǎn)仔率比較

2.2 3組仔鼠出生體質(zhì)量比較 對(duì)照組共產(chǎn)鼠65只，地震組共產(chǎn)鼠38只，中藥組共產(chǎn)鼠68只。3組仔鼠出生體質(zhì)量比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中地震組仔鼠出生體質(zhì)量較對(duì)照組和中藥組降低，中藥組較對(duì)照組降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表2)。

表2 3組仔鼠出生體質(zhì)量比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與地震組比較，△P<0.05

2.3 金匱腎氣丸對(duì)仔鼠行為能力的影響 3組仔鼠亮盒排便陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中地震組亮盒排便陽(yáng)性率較對(duì)照組和中藥組升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表3)。

表3 3組仔鼠亮盒排便陽(yáng)性率比較〔n(%)〕

注：與地震組比較，*P<0.05

2.4 金匱腎氣丸對(duì)仔鼠多巴胺水平的影響 3組仔鼠多巴胺水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中地震組仔鼠多巴胺水平較對(duì)照組和中藥組降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表4)。

表4 3組仔鼠多巴胺水平比較

注：△采用秩和檢驗(yàn)；與地震組比較，*P<0.05

3 討論

腎主生殖，恐傷腎陽(yáng)，傷及沖任，動(dòng)搖了雌鼠受孕的基礎(chǔ)，腎虛直接影響孕育。此為，恐傷腎精腎氣，恐則氣下，母代氣機(jī)失調(diào)，腎氣不致，難于安合成孕，難于聚氣成胎，難于聚精養(yǎng)胎。生殖功能自然受到嚴(yán)重的影響，甚至喪失生殖能力。本研究中地震組孕鼠產(chǎn)仔數(shù)量較中藥組減少，說(shuō)明其生殖功能減退。

中醫(yī)認(rèn)為，先天腎精(包括父母天癸)是胚胎發(fā)育的遺傳物質(zhì)基礎(chǔ)，可以促進(jìn)個(gè)體的生長(zhǎng)發(fā)育[3]；母代腎氣虧虛，子代肌骨筋肉生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足，導(dǎo)致其出生體質(zhì)量降低。《素問(wèn)·奇病論》中說(shuō)“人生而有癲疾者，病名為胎病，此得之在母腹中時(shí)，其母有所大驚，氣上而不下，精氣并居，故令子發(fā)為癲疾也”。系指孕婦妊娠期間由于驚恐所致的氣機(jī)逆亂，會(huì)影響胎兒的健康發(fā)育。本研究結(jié)果顯示，地震組仔鼠出生體質(zhì)量較對(duì)照組低。

亮盒排便是行為遺傳學(xué)上的一個(gè)經(jīng)典實(shí)驗(yàn)，它用二便粒次作為衡量動(dòng)物情緒遺傳力大小的指標(biāo)，也可以作為中醫(yī)“恐傷腎”、“恐則氣下”的客觀指標(biāo)之一[4]。《醫(yī)學(xué)入門·臟腑》說(shuō)：“腎有二枚……納氣，收血，化精，為封藏之本”?！端貑?wèn)·金匱真言論》說(shuō)：“腎……開(kāi)竅于二陰”，故腎司前后二陰，為封藏之本，“恐傷腎”，封藏失職，二陰失約，而二便排泄次數(shù)增多。地震組仔鼠在亮盒排便測(cè)試中，陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組和中藥組。近年來(lái)，無(wú)論是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)還是人類試驗(yàn)均已證明，孕期心理應(yīng)激不僅對(duì)胎兒神經(jīng)系統(tǒng)、生長(zhǎng)發(fā)育(體質(zhì)量、身長(zhǎng)等)產(chǎn)生影響[5-6]，而且造成子代的遠(yuǎn)期功能損害，甚至與某些生理解剖缺陷相關(guān)聯(lián)[7]。

有人把《婦人大全良方》的胎教思想歸納為5方面進(jìn)行分析，其中第一是孕婦情緒與胎教，可見(jiàn)情緒對(duì)孕婦的重要性[8]。多巴胺是大腦分泌的一種神經(jīng)遞質(zhì)，主要參與情感、運(yùn)動(dòng)、認(rèn)知、攝食、正性強(qiáng)化等多種行為過(guò)程，多巴胺通過(guò)其相應(yīng)的膜受體發(fā)揮作用。D1受體(D1R)主要與空間學(xué)習(xí)能力有關(guān)，D2受體(D2R)功能受損將引起運(yùn)動(dòng)減少,協(xié)調(diào)、空間識(shí)別和短期記憶能力下降[9-10]。本研究發(fā)現(xiàn)地震組多巴胺水平低于其他兩組，提示地震恐懼可降低多巴胺水平，而多巴胺水平的降低可引發(fā)抑郁、恐懼等情志障礙，如張春虎等[11]發(fā)現(xiàn)慢性應(yīng)激大鼠的多巴胺水平明顯低于空白對(duì)照組。補(bǔ)腎中藥治療后多巴胺水平可恢復(fù)正常,提示金匱腎氣丸可能有恢復(fù)多巴胺的合成以及代謝功能。

金匱腎氣丸來(lái)源于漢代張仲景所著的《金匱要略》一書，其作用為溫補(bǔ)腎陽(yáng)，調(diào)節(jié)腎的生理功能?；凇翱謧I”和“補(bǔ)腎”的理論基礎(chǔ)，本研究采用補(bǔ)腎中藥金匱腎氣丸來(lái)調(diào)護(hù)地震恐懼對(duì)孕鼠的損害，結(jié)果提高了孕鼠的產(chǎn)仔數(shù)、增加了仔鼠出生體質(zhì)量，提高了仔鼠的行為能力，說(shuō)明該方可有效糾正地震恐懼對(duì)母鼠造成的“腎不藏精”、“腎氣虛衰”等不良影響，使仔鼠生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、體質(zhì)量降低等不良癥狀得到改善。同時(shí)有效地提高恐懼應(yīng)激下仔鼠血漿多巴胺水平，表明該方對(duì)孕鼠恐傷腎病理變化有防治作用。說(shuō)明補(bǔ)腎法及其方藥具有良好的抗恐懼應(yīng)激損傷作用。本研究亦為進(jìn)一步研究中醫(yī)學(xué)腎臟與恐懼心理應(yīng)激的關(guān)系提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，對(duì)中醫(yī)恐傷腎理論的研究具有良好的理論價(jià)值。

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