肖 蕾，毛 睿，楊 穎，張瑞麗，忙尼沙·阿不都拉，包永星

原發(fā)性肝癌是一種常見的惡性腫瘤，在全球惡性腫瘤致死原因中位居第三位[1]，患者預(yù)后極差且近10年來其死亡率呈上升趨勢(shì)，是我國(guó)腫瘤防治工作的重點(diǎn)，早期診斷對(duì)于提高原發(fā)性肝癌患者臨床療效及改善患者預(yù)后有重要意義。目前，使用最廣泛的診斷原發(fā)性肝癌的血清學(xué)指標(biāo)是甲胎蛋白(AFP)，但約有30%的原發(fā)性肝癌患者血清AFP陰性或低度陽性，并不能滿足早期診斷的需求。因此，尋找新的原發(fā)性肝癌標(biāo)志物或多項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)成為原發(fā)性肝癌早期診斷和治療的研究熱點(diǎn)。高爾基體糖蛋白73(GP73)、α-L-巖藻糖苷酶(AFU)是值得期待的血清腫瘤標(biāo)志物，本研究旨在探討GP73、AFU、AFP單項(xiàng)檢測(cè)與聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇2011年5—9月初次就診于我院的原發(fā)性肝癌患者80例為肝癌組，肝硬化患者65例為肝硬化組，慢性病毒性肝炎患者54例為肝炎組，同期健康體檢正常者50例為對(duì)照組。肝癌組中男52例，女28例；年齡37～78歲，平均59歲。肝硬化組中男42例，女23例；年齡33～77歲，平均59歲。肝炎組中男34例，女20例；年齡33～61歲，平均58歲。對(duì)照組中男26例，女24例；年齡43～69歲，平均58歲。4組受檢者的性別構(gòu)成、年齡具有均衡性；留取血標(biāo)本前均簽署知情同意書。

1.2診斷標(biāo)準(zhǔn)慢性病毒性肝炎的診斷參照2000年中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲病學(xué)分會(huì)、肝病學(xué)分會(huì)聯(lián)合修訂的“病毒性肝炎防治方案”中的診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]；肝硬化的診斷參照2005年中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)、中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì)聯(lián)合修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；原發(fā)性肝癌的診斷參照中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)肝癌專業(yè)委員會(huì)2001年制訂的《原發(fā)性肝癌的臨床診斷與分期標(biāo)準(zhǔn)》[3]。

1.3檢測(cè)方法所有受檢者抽取清晨空腹靜脈血2 ml，室溫放置1 h后500×g分離血清，于-20 ℃冰箱保存。GP73的測(cè)定采用酶聯(lián)免疫定量法，試劑盒由北京熱景生物技術(shù)有限公司提供，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作，以血清GP73水平>150.0 μg/L為陽性；AFU的測(cè)定采用免疫比濁法，由我院臨床檢測(cè)中心完成，以血清AFU水平>37.2 μg/L為陽性；AFP的測(cè)定采用電化學(xué)發(fā)光法，由我院檢驗(yàn)科完成，以血清AFP>13.4 μg/L為陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，血清GP73、AFP和AFU呈偏態(tài)分布，采用〔M(QR)〕表示，多組間比較采用Kruskal-WallisH檢驗(yàn)，兩組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)采用Bonferroni進(jìn)行校正。繪制受試者工作特征(ROC)曲線以確定最佳臨界值，計(jì)算ROC曲線下面積(AUG)，采用Z檢驗(yàn)比較AUG，配對(duì)χ2檢驗(yàn)比較敏感度和特異度。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1檢測(cè)結(jié)果4組受檢者血清GP73、AFU、AFP水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)；且肝癌組血清GP73水平與肝硬化組(U=1 796.0)、肝炎組(U=826.5)、對(duì)照組(U=154.0)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；肝癌組血清AFU水平與肝硬化組(U=1 463.0)、肝炎組(U=718.0)、對(duì)照組(U=402.5)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；肝癌組血清AFP水平與肝硬化組(U=1 187.5)、肝炎組(U=1 145.5)、對(duì)照組(U=217.5)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

2.2單項(xiàng)檢測(cè)通過繪制ROC曲線發(fā)現(xiàn)，血清GP73診斷原發(fā)性肝癌的最佳臨界值為150.0 μg/L，血清AFU為37.2 μg/L，血清AFP為13.4 μg/L(見圖1)。GP73診斷原發(fā)性肝癌的靈敏度(χ2=4.65)、特異度(χ2=28.91)與AFP比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)(P<0.05)；AFU診斷原發(fā)性肝癌的靈敏度與AFP比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.89，P>0.05)，特異度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.40，P<0.05)；GP73、AFU診斷原發(fā)性肝癌的AUC與AFP比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見表2)。GP73、AFU和AFP單項(xiàng)檢測(cè)診斷原發(fā)性肝癌的準(zhǔn)確性分別為69.5%、76.3%、81.5%。

表1　各組受檢者觀察指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果比較〔M(QR)，μg/L〕

注：GP73=高爾基體糖蛋白73，AFU=α-L-巖藻糖苷酶，AFP=甲胎蛋白

表2GP73、AFU、AFP單項(xiàng)檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值比較

Table2Comparison of diagnostic value of GP73，AFU and AFP in single form detecting PHC

觀察指標(biāo)靈敏度(%)特異度(%)AUC(95%CI)Z值P值GP7382 563 30 804(0 746，0 862)0 017>0 05AFU73 877 50 798(0 739，0 858)0 002>0 05AFP66 388 70 797(0 731，0 862)--

注：AUC=受試者工作特征曲線下面積；“-”表示以AFP為參照

2.3聯(lián)合檢測(cè)GP73+AFP診斷原發(fā)性肝癌的準(zhǔn)確性為68.7%，GP73+AFU為84.7%，AFP+AFU為80.3%，GP73+AFP+AFU為65.5%，以上指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)與AFP單項(xiàng)檢測(cè)診斷原發(fā)性肝癌的AUC比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見表3)。

圖1　GP73、AFU、AFP單項(xiàng)檢測(cè)診斷原發(fā)性肝癌的ROC曲線

Figure1ROC curve of GP73，AFU and AFP in single form detecting PHC

表3GP73、AFU和AFP聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值比較

Table3Comparison of diagnostic value of GP73，AFU and AFP in combining form detecting PHC

觀察指標(biāo)靈敏度(%)特異度(%)AUC(95%CI)Z值P值GP73+AFP90 058 60 880(0 836，0 925)0 220>0 05GP73+AFU92 581 00 812(0 756，0 868)0 036>0 05AFP+AFU87 576 90 840(0 785，0 895)0 105>0 05GP73+AFP+AFU96 350 90 885(0 842，0 929)0 237>0 05AFP66 388 70 797(0 731，0 862)--

注：“-”表示以AFP為參照

3　討論

在全球范圍內(nèi)，我國(guó)是原發(fā)性肝癌發(fā)病率及死亡率最高的國(guó)家，每年約有11萬人死于原發(fā)性肝癌，占全世界原發(fā)性肝癌死亡人數(shù)的45%。AFP診斷原發(fā)性肝癌的敏感度為40%～65%，為提高原發(fā)性肝癌早期診斷率，滿足臨床需求和節(jié)約醫(yī)療資源，尋找其他敏感度較高的腫瘤標(biāo)志物及多項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)成為近年研究的熱點(diǎn)。

GP73是一種高爾基體跨膜蛋白，2000年由Kladney等[4]首先描述，其在正常人體中主要由膽管上皮細(xì)胞中表達(dá)，而肝細(xì)胞中表達(dá)很少甚至不表達(dá)，后續(xù)的研究者提出肝病患者血清GP73水平明顯升高[5]，進(jìn)一步研究證實(shí) GP73 可以作為診斷原發(fā)性肝癌的可靠標(biāo)志物[5-8]。AFU 是一種溶酶體酸性水解酶，對(duì)原發(fā)性肝癌亦有一定的診斷價(jià)值[9]。

本研究結(jié)果顯示，肝癌組血清 GP73、AFP、AFU 水平均高于肝硬化組、肝炎組和對(duì)照組，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[6-8]。通過繪制ROC曲線發(fā)現(xiàn)，GP73和AFU單項(xiàng)檢測(cè)診斷原發(fā)性肝癌的AUC大于AFP，但無顯著性差異，提示GP73、AFU與AFP對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷效能相似。進(jìn)一步計(jì)算各指標(biāo)單項(xiàng)檢測(cè)的診斷準(zhǔn)確性發(fā)現(xiàn)，AFP為81.5%，AFU為76.3%，GP73為69.5%，與Ozkan等[10]研究結(jié)果相似，AFP單項(xiàng)檢測(cè)診斷原發(fā)性肝癌的準(zhǔn)確性最高。

通過比較各指標(biāo)的敏感度和特異度發(fā)現(xiàn)，GP73單項(xiàng)檢測(cè)診斷原發(fā)性肝癌的敏感度高于AFP，但AFP的特異度高于GP73和AFU，與賈保昌等[11]研究報(bào)道一致，提示在原發(fā)性肝癌的診斷中，GP73具有較好的敏感度，而AFP具有較好的特異度。因此，有必要進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)以提高原發(fā)性肝癌早期診斷率。本研究結(jié)果顯示，GP73+AFP診斷原發(fā)性肝癌的準(zhǔn)確性為68.7%，GP73+AFU為84.7%，AFP+AFU為80.3%，GP73+AFP+AFU為65.5%，但以上指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)與AFP單項(xiàng)檢測(cè)診斷原發(fā)性肝癌的AUC比較，均無明顯差異。2項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)中，GP73+AFU診斷原發(fā)性肝癌的敏感度為92.5%，3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)時(shí)，其敏感度升高至96.3%，提示GP73、AFU和AFP聯(lián)合檢測(cè)可提高診斷原發(fā)性肝癌的敏感度，有利于減少漏診。但本研究樣本量較小，納入的原發(fā)性肝癌患者病情不一，由于條件限制不能進(jìn)行準(zhǔn)確的篩選，有待在今后的研究中進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量并嚴(yán)格控制研究對(duì)象納入標(biāo)準(zhǔn)，以更好地反映出GP73、AFU、AFP單項(xiàng)檢測(cè)與聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值。

綜上所述，GP73對(duì)診斷原發(fā)性肝癌具有較好的敏感度，而AFP具有較好的特異度；GP73、AFU和AFP聯(lián)合檢測(cè)有利于提高原發(fā)性肝癌診斷率，減少漏診，值得臨床參考借鑒。

1何建偉，曹薇薇，李靜，等.甲胎蛋白異質(zhì)體3及其比值對(duì)原發(fā)性肝癌和肝硬化的鑒別診斷價(jià)值研究[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2012，15(8)：2640.

2中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲病學(xué)分會(huì)，肝病學(xué)分會(huì).病毒性肝炎防治方案[J].中華肝臟病雜志，2000，8(6)：324-329.

3中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)肝癌專業(yè)委員會(huì).原發(fā)性肝癌的臨床診斷與分期標(biāo)準(zhǔn)[J].中華肝臟病雜志，200l，9(6)：324.

4Kladney RD，Bulla GA，Guo L，et al.GP73，a novel Golgi-localized protein upregulated by viral infection [J].Gene，2000，249(1-2)：53-65.

5Kladney RD，Cui X，Bulla GA，et al.Expression of GP73，a resident Golgi membrane protein，in viral and non viral liver disease[J].Hepatology，2002，35(6)：1431-1440.

6Mao Y，Yang H，Xu H，et al.Golgi protein 73(GOLPH2)is a valuable serum marker for hepatocellular carcinoma[J].Gut，2010，59(12)：1687-1693.

7陶立玉.腫瘤標(biāo)記物聯(lián)合檢測(cè)診斷肝癌的臨床價(jià)值研究[J].實(shí)用心腦肺血管病雜志，2012，20(7)：1114.

8許文芳，費(fèi)迎明，周建康，等.血清GP73、AFP和AFP-L3聯(lián)合檢測(cè)在原發(fā)性肝癌診斷中的價(jià)值[J].中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志，2011，25(4)：286-288.

9Bertino G，Ardiri A，Malaguarnera M，et al.Hepatocelluar carcinoma serum markers[J].Semin Oncol，2012，39(4)：410-433.

10Ozkan H，Erdal H，Tutkak H，et al.Diagnostic and prognostic validity of Golgi protein 73 in hepatocellular carcinoma[J].Digestion，2011，83(1-2)：83-88.

11賈保昌，羅小玲，梁嶸，等.聯(lián)合檢測(cè)血清GP73和AFP對(duì)原發(fā)性肝癌診斷價(jià)值的探討[J].中華腫瘤防治雜志，2012，19(11)：832-835.