蘇 旭，王家明

(1.天津市中心婦產(chǎn)科醫(yī)院，天津 300100； 2.工業(yè)發(fā)酵微生物教育部重點實驗室，天津科技大學(xué)生物工程學(xué)院，天津 300457)

阿齊沙坦酯(azilsartan medoxomil，TAK-491)，是由日本武田公司開發(fā)的新一代選擇性 AT1亞型血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑，為阿齊沙坦(azilsartan)的前藥，臨床前和臨床研究證實其有平穩(wěn)持久的抗高血壓作用。 2011年2月美國FDA批準(zhǔn)阿齊沙坦酯(商品名為Edarbi)用于治療成人高血壓。臨床前研究顯示，阿齊沙坦酯作為新一代雙重功能ARBs不僅拮抗血管緊張素Ⅱ的1型受體(AT1受體)，還可能通過多種機制降低心血管疾病及糖尿病的風(fēng)險[1]。在產(chǎn)品生產(chǎn)過程中，需要用到甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷和乙酸乙酯5種有機溶劑，這些溶劑會對人體健康造成危害，在生產(chǎn)過程中完全去除比較困難，但必須確保產(chǎn)品中的這些溶劑殘留量是人體可以接受的，《中國藥典》和ICH對各類溶劑殘留量有嚴(yán)格的規(guī)定[2, 3]。

本實驗首次建立了毛細(xì)管柱頂空氣相色譜法，測定阿齊沙坦酯工藝中用到的5種溶劑，并進(jìn)行了方法學(xué)研究。結(jié)果顯示，該方法準(zhǔn)確，靈敏度高，可用于阿齊沙坦酯原料藥中殘留溶劑的檢測。

1 儀器與試藥

HP 6890N 氣相色譜儀(Agilent公司)，7694E 頂空進(jìn)樣器(Agilent公司)，Agilent氣相工作站(Agilent公司)。甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯均購買于天津康科德試劑公司。阿齊沙坦酯原料藥(中央藥業(yè)提供，批號20121203、20121204、20121205)，水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性 DB-624毛細(xì)管柱(30.0 m×0.53 mm×3.00 μm)(6%氰丙基苯-94%二甲基硅氧烷共聚物)，50 ℃維持10 min，載氣N2，流速4.0 ml/min。7694E頂空瓶進(jìn)樣器，進(jìn)樣體積1 μl，進(jìn)樣口溫度為200 ℃，分流比為5∶1；頂空瓶溫度80 ℃，定量環(huán)溫度90 ℃，傳輸管線溫度100 ℃/瓶，加熱時間20 min，頂空瓶體積10 ml，加入被測液體1 ml，加蓋密封?；鹧骐x子化檢測器(FID)溫度250 ℃，氫氣流速 40 ml/min，空氣流速 400 ml/min，尾吹30 ml/min。

2.2溶液制備

2.2.1對照儲備溶液的配制 分別精密移取甲醇71 μl、乙醇119 μl、異丙醇119 μl、二氯甲烷9 μl和乙酸乙酯104 μl到裝有適量水的50 ml量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻。

2.2.2對照溶液的配制 吸取上述對照儲備溶液1 ml置25 ml量瓶中，用水稀釋到刻度，混勻。殘留限度見表1。

表1 溶劑殘留限度表

2.3空白溶劑試驗 取3 ml水置頂空瓶中，加蓋密封，頂空進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果表明：空白溶劑對甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷和乙酸乙酯的測定不干擾。色譜圖見圖1。

2.4專屬性試驗 精密量取上述對照溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，出樣順序：甲醇(RT=2.670)、乙醇(RT=3.381)、異丙醇(RT=4.020)、二氯甲烷(RT=4.489)、乙酸乙酯(RT=6.950)。5個成分之間分離度均大于3.0，且理論塔板數(shù)均大于10 000， 對稱性好，色譜圖見圖1。

1. 甲醇 2. 乙醇 3. 異丙醇 4. 二氯甲烷 5. 乙酸乙酯

2.5檢測限試驗 分別精密移取甲醇70 μl、乙醇20 μl、異丙醇20 μl、二氯甲烷3 μl和乙酸乙酯6.8 μl到裝有適量水的50 ml量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻；精密量取此液10 μl置25 ml量瓶中，用水稀釋到刻度。在本試驗條件下，各色譜峰響應(yīng)值約為基線噪音的3倍。甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷和乙酸乙酯的最低檢測濃度分別為0.4435、0.1264、0.1256、0.0318和0.048 96 μg/ml。

2.6線性關(guān)系測定 分別移取對照貯備液0.4、0.8、1.0、1.2和1.8 ml置25 ml量瓶中，用水稀釋到刻度，混勻，配成不同濃度的測試溶液；分別取各溶液3 ml置10 ml頂空瓶中，加蓋密封，依次進(jìn)樣測定。分別以色譜峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，以各自的濃度X(mg/ml)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見表2。

2.7精密度試驗 取對照溶液3 ml置10 ml頂空瓶中，加蓋密封。依次連續(xù)進(jìn)樣測定，以峰面積計算，對照溶液中甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷和乙酸乙酯峰面積的RSD分別為1.93%、2.83%、3.94%、8.05%和4.29%。

2.8穩(wěn)定性試驗 分別于0、2、6、8和24 h取標(biāo)準(zhǔn)溶液3 ml置10 ml頂空瓶中，加蓋密封，頂空進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。計算各溶劑峰面積的RSD。甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷和乙酸乙酯色譜峰積分面積的RSD分別為2.14%、3.76%、5.19%、18.89%和7.64%，表明甲醇、乙醇、異丙醇、乙酸乙酯對照溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定，二氯甲烷對照溶液在24 h內(nèi)不穩(wěn)定。

表2 線性關(guān)系試驗結(jié)果

2.9回收率試驗 分別移取對照貯備液0.8、1.0和1.2 ml到25 ml量瓶中，用水稀釋到刻度，搖勻，配成三種濃度的回收率溶液(80%、100%和120%)。取20121203批樣品45 mg共9份，精密稱定，分別加入上述溶液3 ml，密封后混勻，進(jìn)行測定。結(jié)果見表3。甲醇的平均回收率為103.96%，RSD為2.66%；乙醇的平均回收率為97.51%，RSD為3.71%；異丙醇的平均回收率為101.19%，RSD為4.75%；二氯甲烷的平均回收率為95.06%，RSD為6.99%；乙酸乙酯的平均回收率為97.50%，RSD為6.18%。

2.10樣品測定 分別取20121203、20121204和20121205批樣品，精密稱取45 mg到頂空瓶中，加水3 ml溶解，加蓋密封，按上述色譜條件以外標(biāo)法進(jìn)行測定。結(jié)果見表4。

表3 回收率試驗結(jié)果

表4 樣品測定結(jié)果

3 討論

本文首次采用頂空氣相色譜法對阿齊沙坦酯原料藥的5種殘留溶劑進(jìn)行檢測。方法驗證證明：該方法色譜條件分離良好，靈敏度高，在考查的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r>0.999)，回收率符合規(guī)定，符合《中國藥典》 2010版附錄Ⅷ P中有機溶劑殘留量測定的要求，可以作為阿齊沙坦酯原料藥中殘留溶劑的質(zhì)量控制方法。

1 張亞安.抗高血壓新藥選擇性AT1亞型血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑—阿齊沙坦酯[J]. 藥學(xué)與臨床研究，2011, 19(3):262

2 中國藥典[S]. 二部. 2010: 附錄61

3 周海鈞. 藥品注冊的國際技術(shù)要求(質(zhì)量部分)[M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2001: 82