王 戈，趙培敬

（河南省南陽市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 南陽 473061）

中成藥制劑具有療效確切、毒副反應(yīng)小的優(yōu)點(diǎn)，適用于一些 慢性疾病的治療。目前市場上一些不法商家利用患者對傳統(tǒng)中醫(yī)藥的信任，以及急于獲得療效的心理，在部分產(chǎn)品中非法添加了醋酸潑尼松、茶堿等激素類成分，此類成分有抗炎、抗過敏等作用，見效快，但不宜長時(shí)間使用，以免對人體造成危害。止喘靈膠囊，標(biāo)識稱系全部采用中藥材加工而成，主要適用于咳嗽、哮喘、急慢性支氣管炎、肺氣腫、肺心病等癥。由于此類藥物成分比較復(fù)雜，尚未有有效方法檢測非法添加的激素類成分。在此建立的高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，可快速、準(zhǔn)確地對此類藥物中非法添加的醋酸潑尼松、茶堿作出判斷，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200-6310型液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，配有Agilent 1200型液相單元（在線脫氣機(jī)、四元梯度泵、自動進(jìn)樣器、柱溫箱、紫外檢測器）、電噴霧離子化源（ESI）。醋酸潑尼松對照品（批號為100012-200105）、茶堿對照品（批號為 100121-199903）由中國藥品生物制品檢定所提供；止喘靈膠囊（抽驗(yàn)樣品）；乙腈（色譜純，天津市彪仕奇科技發(fā)展有限公司）；冰醋酸（分析純，天津化學(xué)試劑有限公司）；乙酸銨（分析純，天津市化學(xué)試劑三廠）；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2．1色譜條件

色譜柱：Shimadzu shim-pack VP-ODS柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm）；流動相：0．02 mol／L 乙酸銨 -0．1% 冰醋酸水溶液 ∶乙腈（71∶29）；流速：1．0 mL ／min；檢測波長分段設(shè)置：0 ～9 min 為 240nm；9～15 min為 271 nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2．2 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源（ESI），霧化氣壓力：50 psi，干燥氣溫度：380℃，流速：9．5 mL ／min，掃描范圍：100 ～500 m ／z，毛細(xì)管電壓：3 500 V。檢測方式：0～9 min正模式一級、二級同時(shí)掃描；9～15 min負(fù)模式一級、二級同時(shí)掃描。

2．3 溶液配制

精密稱取醋酸潑尼松與茶堿對照品各5 mg，分別置50 mL容量瓶中，加流動相適量，使溶解并稀釋至刻度，作為儲備液；精密量取上述2種貯備液各5 mL，置50 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取本品10粒，取出內(nèi)容物，精密稱定，混合均勻后稱取相當(dāng)于1粒的質(zhì)量，置50 mL容量瓶中，加流動相適量，超聲處理15 min，放冷，加流動相至刻度，搖勻；精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。

2．4 檢測結(jié)果

按上述條件進(jìn)樣后，高效液相色譜（HPLC）紫外圖譜在保留時(shí)間7．08 min和10．49 min處出現(xiàn)色譜峰，見圖1 A，兩個(gè)峰的塔板數(shù)及分離度均符合《中國藥典》[1]要求；醋酸潑尼松一級、二級質(zhì)譜見圖2 A、圖2 B，茶堿的一級、二級質(zhì)譜見圖2 C、圖2 D。在相同的色譜及質(zhì)譜條件下對供試品溶液進(jìn)行分析，所得的HPLC紫外圖譜見圖 1 B，峰1的質(zhì)譜圖見圖 2 E、圖2 F，峰2的質(zhì)譜圖見圖2 G、圖2 H。供試品 HPLC圖譜在與醋酸潑尼松、茶堿對照品保留時(shí)間處有色譜峰，經(jīng)過與對照品溶液的質(zhì)譜圖相比較，供試品溶液中峰1的一級、二級質(zhì)譜與醋酸潑尼松對照品溶液一級、二級質(zhì)譜圖相吻合，峰2的一級、二級質(zhì)譜與茶堿對照品溶液一級、二級質(zhì)譜圖相吻合。由此可以確定，供試品溶液中添加了醋酸潑尼松、茶堿成分。

3 討論

圖2 質(zhì)譜圖

對照品溶液為醋酸潑尼松和茶堿的混合溶液，由于是液相質(zhì)譜聯(lián)用，故可根據(jù)離子質(zhì)量數(shù)很容易辨別出醋酸潑尼松和茶堿。

在試驗(yàn)中，質(zhì)譜的掃描采用正負(fù)模式交替掃描，經(jīng)比較，醋酸潑尼松在正模式、茶堿在負(fù)模式下檢測靈敏度高，二級質(zhì)譜響應(yīng)好，故最終選定文中的檢測條件[2-4]。

中成藥制劑中通常都含有多種組分，采用紫外檢測法或熒光檢測法對樣品提取液進(jìn)行檢測時(shí)，由于選擇性不強(qiáng)，在干擾組分多的情況下，目標(biāo)組分不易分離。采用LC-MS／MS技術(shù)，將高效液相色譜的高分離能力與質(zhì)譜分析的高選擇性相結(jié)合，對純中藥制劑中非法添加的化學(xué)成分進(jìn)行多級質(zhì)譜分析，增強(qiáng)了檢測結(jié)果的可信度。該法靈敏度高、選擇性強(qiáng)，可為打擊中成藥的非法添加提供有力依據(jù)。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（二部）[M]．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：60．

[2]劉 斐，陳長青，鄭 靜．LC-MS／MS方法鑒定中藥制劑中摻入的7種西藥成分 [J]．藥物分析雜志，2009，29（8）：1 378-1 381．

[3]胡 青，崔益冷．液質(zhì)聯(lián)用法測定解熱鎮(zhèn)痛類中藥及保健品中非法摻加化學(xué)藥品的研究[J]．中成藥，2009，31(10)：1 547-1 550．

[4]向智敏，張 驪．HPLC和LC-MS／MS鑒定鎖陽固精丸中非法添加的西地那非衍生物[J]．中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2010(2)：167-171．