李延雪，楊立志，蘇玉娟

（黑龍江省雞西市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，黑龍江 雞西 158100）

復(fù)方芩蘭口服液是由金銀花、黃芩、連翹、板藍(lán)根組方，經(jīng)適宜加工方法制成的中藥口服制劑，收載于《國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編·內(nèi)科肺系（一）分冊》[1]，具有辛涼解表、清熱解毒的功效，用于外感風(fēng)熱引起的發(fā)熱、咳嗽、咽痛。筆者采用高效液相色譜法測定了綠原酸的含量[2-10]，樣品處理方法簡單，分離效果好，快速準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可更好地控制該制劑的質(zhì)量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

島津 LC-2010A型高效液相色譜儀；AG285型電子分析天平；島津UV-2550型紫外分光光度計(jì)。綠原酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為110753-200413）；復(fù)方芩蘭口服液（批號分別為 20110907，20110908，20110909）；水為純化水，甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent Extend C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流動相：甲醇 -水 -冰醋酸（17 ∶83 ∶1）；流速：1．0 mL／min；柱溫：30 ℃ ；進(jìn)樣量：10 μL；檢測波長：324 nm。理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算不低于5 000。綠原酸與相鄰雜質(zhì)峰之間的分離度均大于1．5。

2．2 溶液制備

精密稱取經(jīng)減壓干燥12 h的綠原酸對照品適量，加水制成每1 mL中含綠原酸對照品0．036 4 mg的溶液，即得對照品溶液。精密量取樣品4 mL，置50 mL棕色容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0．45 μm）濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方量并以相同工藝制備不含金銀花的陰性對照品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：取 2．2項(xiàng)下3種溶液，按2．1項(xiàng)下色譜條件測定。結(jié)果陰性對照品溶液色譜圖中，在綠原酸色譜峰相應(yīng)位置上無干擾峰出現(xiàn)，表明陰性對照品的其他組分對綠原酸的測定無干擾（圖 1）。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密吸取綠原酸對照品溶液 2，5，10，15，20 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以對照品進(jìn)樣質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析，得回歸方程 Y=2．838 9 ×104X ＋8．732 3×103，r=0．999 9（n=5）。結(jié)果表明，綠原酸質(zhì)量濃度在 7．28～72．8 μg／mL 范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，以峰面積計(jì)算，結(jié)果的 RSD為0．92%（n=5），表明儀器精密度良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批樣品（批號為20110909），分別依法制備6份供試品溶液并測定含量。結(jié)果的 RSD為0．76%（n=6），表明方法重現(xiàn)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一批樣品（批號為20110909）的供試品溶液，分別于配制后 0，2，4，6，8，12，24 h 時依法測定。結(jié)果的 RSD為1．14%（n=7），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的同批樣品（批號為20110909，綠原酸含量為 0．398 mg／mL）6份，每份精密量取本品2 mL，以2份為 1組，共 3組，每組分別精密加入綠原酸 0．625 0，0．780 0，0．937 5 mg，按擬訂方法制備溶液及測定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表 1。

2．4 樣品含量測定

取3批樣品，按2．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測定峰面積，用外標(biāo)法計(jì)算峰面積。結(jié)果批號分別為20110907，20110908，20110909的樣品中綠原酸含量分別為0．382，0．419，0．398 g ／L。

表1 綠原酸加樣回收試驗(yàn)測定結(jié)果（n＝6）

3 討論

取綠原酸對照品適量，加水制成對照品溶液，進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果顯示綠原酸在324 nm波長處有最大吸收，故選擇324 nm作為測定波長。

因綠原酸見光見熱不穩(wěn)定，溫度太高會發(fā)生分解，故試驗(yàn)中對綠原酸對照品和樣品均采用棕色瓶盛放并盡量避免加熱。

為達(dá)到良好的分離效果，曾采用甲醇-0．4%磷酸溶液（10∶90）、甲醇 - 乙腈 -0．05% 磷酸溶液（5 ∶5 ∶90）、乙腈 -0．4% 磷酸溶液（15 ∶85）、甲醇 -水 -冰醋酸（17 ∶83 ∶1）作為流動相進(jìn)行分離，結(jié)果表明，采用甲醇 -水 -冰醋酸（17∶83∶1）作為流動相時，綠原酸峰與其他峰分離較好，基線較穩(wěn)，可得到較好的分離效果。

金銀花作為復(fù)方芩蘭口服液中的主要成分，測定綠原酸的含量具有重要意義。該方法簡便、快速、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，回收率好，可作為復(fù)方芩蘭口服液的質(zhì)量檢測方法，以便有效控制該制劑的質(zhì)量。

[1]WS-10749（ZD-0749） -2002，國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編[S]．

[2]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：611-612．

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