韓麗華，蘇秋香，孫佩杰，楊曉霞

(沈陽醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院形態(tài)中心實驗室，遼寧 沈陽 110034)

近年來，我國前列腺癌的發(fā)病率呈逐年增高的趨勢，它已是泌尿系統(tǒng)常見及預(yù)后較差的惡性腫瘤之一，目前研究發(fā)現(xiàn)其發(fā)生及其生物性特征與多種抑癌基因及一些生長因子密切相關(guān)。缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α)是一種重要的細胞因子，它通過激活腫瘤組織中多種靶基因的轉(zhuǎn)錄活性，提高腫瘤細胞的生存率。HIF-1α與前列腺癌發(fā)生的關(guān)系在國內(nèi)鮮見報道。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測P53蛋白及HIF-1α在前列腺癌和前列腺增生(benign prostatic hyperplasia，BPH)組織中的表達情況，探討其在前列腺癌的發(fā)生和發(fā)展中的作用及意義。

1 材料與方法

1.1 材料 本實驗標(biāo)本為經(jīng)直腸前列腺穿刺活檢和手術(shù)切除后液氮保存標(biāo)本，其中前列腺癌40例(高分化腺癌即A期7例，中等分化腺癌即B期8例，低分化腺癌即C、D期共25例)；BPH 40例，正常前列腺10例。所有標(biāo)本均經(jīng)病理組織學(xué)確診。

1.2 方法 標(biāo)本經(jīng)福爾馬林溶液固定，常規(guī)脫水包埋，參照SP試劑盒說明書進行，PBS代替一抗作陰性對照。采用DAB顯色，根據(jù)染色反應(yīng)程度、范圍和分布特點進行綜合判斷。HIF-1α單抗、鼠抗人P53抗體工作液以及SP試劑盒為Zymed公司產(chǎn)品。

1.3 主要觀察指標(biāo) ①P53及HIF-1α在正常、BPH及癌性前列腺組織中的表達情況。②P53及HIF-1α的表達與腫瘤的病理分級間的聯(lián)系。

1.4 染色結(jié)果判定 光鏡下P53蛋白以棕黃色顆粒分布在細胞核內(nèi)為陽性。無陽性反應(yīng)為陰性。根據(jù)染色強度分為0～+++，++～+++為強陽性。HIF-1α蛋白以棕黃色顆粒分布在細胞核或胞漿中為陽性，根據(jù)染色強度分為0～+++，++～+++為強陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行處理，不同病理分級的P53蛋白及HIF-1α的陽性表達率比較采用χ2檢驗。

2 結(jié)果

HIF-1α在正常前列腺組織中無表達，在BPH組織中陽性表達率為40%(16/40)，癌性前列腺組織中陽性表達率為75%(30/40)，其在BPH組織中表達率高于正常前列腺組織(P<0.05)，前列腺癌組織中表達率高于BPH(P<0.05)。HIF-1α陽性表達率隨病理分期升高而明顯上升(P<0.01)。見表1、2。

P53在正常前列腺組織中無表達，BPH組織中表達率為10%(4/40)，癌性前列腺組織中陽性表達率為80%(32/40)，其在BPH組織中表達率高于正常前列腺組織(P<0.05)，腺癌組織中表達率高于增生的前列腺組織(P<0.05)。P53陽性表達率隨病理分期升高而明顯上升(P<0.01)。見表1、2。

前列腺癌組織中HIF-1α與P53表達呈正相關(guān)(r=0.648)。

3 討論

前列腺癌是我國常見惡性腫瘤，其發(fā)病率和病死率有逐年增加的趨勢。但其發(fā)病機制目前尚未完全明確。越來越多的資料顯示，缺氧是腫瘤發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的始動因素。HIF-1α是介導(dǎo)細胞對缺氧進行適應(yīng)性反應(yīng)的關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，影響腫瘤細胞增殖和能量代謝[1]。

表1 HIF-1α、P53在正常、BPH及癌性前列腺組織中的表達情況

表2 HIF-1α、P53表達與前列腺癌臨床分期的關(guān)系

HIF-1α是在缺氧條件下腫瘤細胞產(chǎn)生的一種核轉(zhuǎn)錄因子，它使細胞在低氧狀態(tài)下能夠完成其能量代謝和氧的運輸，是體內(nèi)維持細胞內(nèi)氧平衡的主要調(diào)控因子。本研究觀察了10例正常前列腺組織、40例BPH組織及40例不同分期前列腺癌組織中HIF-1α的表達。結(jié)果顯示，HIF-1α在正常前列腺組織中無表達，在BPH組織中表達率為40%(16/40)，在前列腺癌組織中表達率為75%(30/40)，三者之間表達率差異有顯著性。表明細胞缺氧出現(xiàn)在BPH的組織中并持續(xù)到腫瘤形成的全過程。其在BPH組織中表達率高于正常前列腺組織(P<0.05)，前列腺癌組織中表達率高于BPH組織(P<0.05)。本資料還觀察到，隨著腫瘤分化程度的降低，HIF-1α的表達率逐漸升高，HIF-1α高表達的前列腺癌組織具有較強的浸潤和轉(zhuǎn)移能力，這一定程度上表明了HIF-1α在前列腺癌的浸潤、轉(zhuǎn)移中起著重要的作用。可以認(rèn)為把HIF-1α作為臨床檢測前列腺癌進展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的一個有價值的指標(biāo)，前列腺癌組織中表達率高于BPH(P<0.05)。它在前列腺癌的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移過程中起著重要的作用[2-3]。

現(xiàn)在研究已經(jīng)證實P53蛋白在人類許多腫瘤，如乳腺癌、結(jié)腸癌、膀胱癌中都有高表達，這些腫瘤中P53蛋白的高表達的原因似乎是P53基因的缺失，并與等位基因的不斷突變有關(guān)，P53參與細胞周期的調(diào)控，DNA的修復(fù)和細胞凋亡[4-5]。研究表明，用免疫組織化學(xué)檢測的P53基因為突變型P53基因，具有致癌作用[6]。在本研究中P53多表達于癌細胞的細胞核，其在前列腺癌組織中表達率為80%(32/40)，明顯高于BPH(10%，4/40)，差異有顯著性(P<0.05)。且隨著腫瘤分化程度的降低，P53的表達率逐漸升高。且P53蛋白表達與前列腺癌的病理分期有關(guān)，與相關(guān)文獻報道相同。本研究結(jié)果提示：P53在BPH組織中表達率高于正常前列腺組織(P<0.05)，前列腺癌組織中表達率高于BPH組織(P<0.05)。P53的表達與前列腺癌的分化程度有密切關(guān)系。

腫瘤細胞的缺氧是腫瘤發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)移的啟動子，同時腫瘤組織微環(huán)境缺氧也是腫瘤治療效果差，易產(chǎn)生放、化療耐受性的原因[7]。本組實驗發(fā)現(xiàn)，前列腺癌組織中HIF-1α與P53表達呈正相關(guān)(r=0.648)，進一步證實在缺氧組織中HIF-1α的激活與P53的高表達有密切的關(guān)系。進一步研究HIF-1α及P53在腫瘤發(fā)病中的協(xié)同作用，對前列腺癌發(fā)病的研究起著重要的作用，可通過阻斷HIF-1α、P53在前列腺癌中的表達從而達到減低腫瘤浸潤性的目的，并為腫瘤的診斷和治療提供新的思路和途徑。

參考文獻：

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