梁敏烈，　謝良地，　李宏亮，　鄭蘇梨，　王華軍

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，福建省高血壓研究所，福建 福州 350005)

肺動(dòng)脈高壓(pulmonary arterial hypertension，PAH)是指臨床上以肺血管阻力進(jìn)行性升高，并最終導(dǎo)致右心室衰竭及死亡為特征的多種心肺疾病所共有的病理生理過(guò)程。近年來(lái)，國(guó)外的一些研究表明干細(xì)胞移植治療有助于改善肺血管的內(nèi)皮功能，降低肺動(dòng)脈壓力并且改善肺小動(dòng)脈的重構(gòu)[1-3]。脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(adipose-derived mesenchymal stem cells，ADMSCs)是從脂肪組織中分離出的多潛能干細(xì)胞，具有自體來(lái)源豐富、取材方便、避免免疫排斥、多向分化等特點(diǎn)[4-6]，成為種子細(xì)胞研究的新熱點(diǎn)。近期，我們研究表明，歸巢于PAH模型大鼠體內(nèi)的ADMSCs能誘導(dǎo)分化為內(nèi)皮樣細(xì)胞[7]；而且，研究發(fā)現(xiàn)ADMSCs移植于野百合堿(monocrotaline,MCT)誘導(dǎo)的PAH大鼠，可以減輕肺動(dòng)脈壓力，同時(shí)改善肺小動(dòng)脈的重構(gòu)[8]。但是，ADMSCs移植對(duì)MCT誘發(fā)的PAH大鼠肺小動(dòng)脈功能的影響目前尚未明確。因此，本研究采用ADMSCs早期移植于MCT誘導(dǎo)的PAH大鼠，觀察其肺小動(dòng)脈的內(nèi)皮依賴性舒張(endothelium-dependent relaxation,EDdR)、非內(nèi)皮依賴性舒張(endothelium-independent relaxation,EDiR)以及收縮功能(vasoconstrictive function,VCF)的變化，旨在進(jìn)一步探討ADMSCs在PAH治療中的作用。

材　料　和　方　法

1材料

1.1動(dòng)物清潔級(jí)Sprague-Dawley(SD)大鼠，雄性，5周齡，體質(zhì)量100～150 g，上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，許可證號(hào)為SCXK(滬)20070005。動(dòng)物飼養(yǎng)條件：每籠4只，恒溫(22±2)℃，恒濕(55±5)%，人工光照明暗各12 h/d，24 h自由攝食飲水。

1.2主要試劑牛血清白蛋白(Bovogen)；Ⅰ型膠原酶、DMEM-F12培養(yǎng)基、胎牛血清和胰蛋白酶(Gib-ico)；小鼠抗大鼠CD31單克隆抗體(Abcam)；兔抗大鼠CD34單克隆抗體(Santa Cruz)；FITC標(biāo)記山羊抗小鼠IgGⅡ抗和FITC標(biāo)記山羊抗兔IgGⅡ抗(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)；FITC anti-rat CD45、FITC anti-rat CD29和PE anti-rat CD90(Biolegend)；重組腺病毒載體Ad5-EGFP(北京正陽(yáng)基因有限公司)；MCT、乙酰膽堿(acetylcholine, ACh)和內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)阻斷劑左旋硝基精氨酸甲酯(NG-nitro-L-arginine methyl ester, L-NAME) (Sigma)；硝普鈉(sodium nitroprusside, SNP)(北京雙鶴藥業(yè))；去甲腎上腺素(norepinephrine, NE)(中國(guó)遠(yuǎn)大醫(yī)藥有限公司)；氯化鈉(NaCl)、氯化鉀(KCl)、硫酸鎂(MgSO4)、氯化鈣(CaCl2)、磷酸二氫鉀(KH2PO4)、碳酸氫鈉(NaHCO3)、葡萄糖(glucose)和氫氧化鈉(NaOH)均為國(guó)產(chǎn)分析純。

2方法

2.1大鼠ADMSCs分離、培養(yǎng)、鑒定及熒光標(biāo)記取清潔級(jí)5周齡雄性SD大鼠4只，頸椎脫臼處死，無(wú)菌條件下取雙側(cè)腹股溝區(qū)皮下脂肪，參照文獻(xiàn)[9-10]報(bào)道的方法進(jìn)行大鼠ADMSCs的分離和培養(yǎng)。采用流式細(xì)胞儀(FACSCalibur型，BD)測(cè)定細(xì)胞表面抗原CD29、CD31、CD34、CD45和CD90表達(dá)的方法對(duì)傳代培養(yǎng)的ADMSCs進(jìn)行鑒定。取生長(zhǎng)良好的第3代ADMSCs，培養(yǎng)至細(xì)胞達(dá)50%融合時(shí)，加入感染復(fù)數(shù)(multiplicity of infection, MOI)為100的Ad5-EGFP重組腺病毒感染ADMSCs，24 h后更換新的培養(yǎng)基，72 h后熒光顯微鏡(PUSIX-70型，Olympus)觀察細(xì)胞中綠色熒光蛋白的表達(dá)情況，并收集細(xì)胞備用。

2.2動(dòng)物分組及動(dòng)物模型的制備90只清潔級(jí)5周齡雄性SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)2周(標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由飲水)后按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為正常對(duì)照組(control組,n=30)、MCT誘導(dǎo)組(PAH組,n=30)和MCT誘導(dǎo)+ ADMSCs早期干預(yù)組(ADMSCs-EI組,n=30)。實(shí)驗(yàn)第1天，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物根據(jù)本小組已建立的方法[11]，給大鼠腹腔一次性注射MCT 40 mg/kg復(fù)制PAH模型，對(duì)照組腹腔注射等量生理鹽水代替MCT；腹腔注射MCT后1周，ADMSCs-EI組大鼠經(jīng)左頸外靜脈一次性注射綠色熒光蛋白標(biāo)記的1 mL ADMSCs (1×106)，對(duì)照組和PAH組經(jīng)左頸外靜脈一次性注射相同體積的生理鹽水。分別于ADMSCs移植后1、2、3周檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。

2.3動(dòng)物生存質(zhì)量觀察觀察實(shí)驗(yàn)各組大鼠的活動(dòng)、毛發(fā)、呼吸、食欲、體質(zhì)量等變化，隨訪動(dòng)物的存活情況。

2.4肺動(dòng)脈平均壓(mean pulmonary artery pressure, MPAP)測(cè)定參考孫波等[12]報(bào)道的方法，建立右心導(dǎo)管法測(cè)量大鼠MPAP[11]。大鼠以10%水合氯醛(3 mL/kg)腹腔內(nèi)注射麻醉后，從右頸外靜脈插管至肺動(dòng)脈干，接壓力換能器和PowerLab生理信息采集與處理系統(tǒng)(ADInstruments)，待壓力波形穩(wěn)定后開(kāi)始實(shí)時(shí)記錄肺動(dòng)脈壓，取其平均值。

2.5離體肺小動(dòng)脈環(huán)功能測(cè)定

2.5.1大鼠離體肺小動(dòng)脈環(huán)的制備測(cè)壓后，迅速開(kāi)胸取出大鼠肺葉，立即置于預(yù)先備好的、95% O2和5% CO2混合氣體飽和的4 ℃ Krebs液(mmol/L：NaCl 118.3，KCl 4.7，MgSO41.2，CaCl22.52，KH2PO41.2，NaHCO324.2，葡萄糖 11.0，10% NaOH滴定至pH 7.4)中，在體視顯微鏡下分離肺葉內(nèi)肺小動(dòng)脈，取血管直徑介于100～200 μm的肺小動(dòng)脈，用顯微外科剪去除血管周?chē)闹炯敖Y(jié)締組織，將肺小動(dòng)脈剪成3 mm的血管環(huán)，操作過(guò)程中避免過(guò)度牽拉，以防損傷內(nèi)皮。隨后用顯微外科鑷將肺小動(dòng)脈血管環(huán)套于兩個(gè)直徑50 μm三角形鎢絲掛鉤上，其中一個(gè)連接張力換能器，連接記錄裝置(PowerLab生理信息采集與處理系統(tǒng))，另一個(gè)連接微調(diào)裝置以調(diào)節(jié)負(fù)荷張力。肺小動(dòng)脈環(huán)分別置于持續(xù)通入95% O2+5% CO2混合氣體充分飽和、37 ℃恒溫的、10 mL Krebs液的四腔離體組織灌流系統(tǒng)(ADInstruments)浴槽中。實(shí)驗(yàn)之前，肺小動(dòng)脈環(huán)張力負(fù)荷0.5 g，每隔15 min 換1次Krebs液，平衡90 min。以高鉀Krebs液(含K+60 mmol/L)檢驗(yàn)動(dòng)脈環(huán)收縮性，收縮穩(wěn)定后，2次收縮幅度相差<10%則開(kāi)始正式用于實(shí)驗(yàn)。

2.5.2檢測(cè)大鼠離體肺小動(dòng)脈環(huán)對(duì)不同濃度ACh、SNP和NE的張力變化反應(yīng)(1)ACh誘導(dǎo)的EDdR：待肺小動(dòng)脈血管環(huán)張力平衡后，用NE(1×10-5mol/L)預(yù)收縮引起最大收縮張力后，按濃度累積法向浴槽Krebs液中依次加入(1×10-10～1×10-4) mol/L的ACh，描記張力變化曲線。(2) SNP誘導(dǎo)的EDiR：待張力恢復(fù)至初始值，浴槽中先用eNOS抑制劑L-NAME(1×10-4mol/L)孵育30 min后，用NE(1×10-5mol/L)預(yù)收縮引起最大收縮張力后，按濃度累積法向浴槽Krebs液中依次加入(1×10-10～1×10-4)mol/L的硝普鈉，描記張力變化曲線。(3) NE誘導(dǎo)的收縮：待張力恢復(fù)至初始值，按濃度累積法向浴槽Krebs液中依次加入(1×10-10～1×10-5)mol/L的NE，描記張力變化曲線。

以上各步間隔均用37 ℃ Krebs液洗脫30～45 min，每隔15 min 換液1次，待張力恢復(fù)至初始值才進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。以上溶液、試劑均于實(shí)驗(yàn)當(dāng)天配制。EDdR和EDiR反應(yīng)表示為血管舒張張力占NE(1×10-5mol/L)預(yù)收縮反應(yīng)的百分比；誘導(dǎo)動(dòng)脈環(huán)收縮反應(yīng)的程度表示為血管收縮張力占NE(1×10-5mol/L)最大收縮反應(yīng)的百分比，并計(jì)算濃度累積效應(yīng)曲線的半數(shù)效應(yīng)濃度(EC50)，收縮或舒張敏感性用 pD2值表示，即EC50以10為底的負(fù)對(duì)數(shù)值。

2.6熒光顯微鏡觀察分別于熒光標(biāo)記的ADMSCs早期移植于大鼠后1、2、3周隨機(jī)各取ADMSCs-EI組大鼠1只，脫臼法處死后取肺組織做冰凍切片，熒光顯微鏡觀察ADMSCs 遷移及定植情況。

3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13.0軟件分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。組間差異應(yīng)用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD法，量效關(guān)系數(shù)據(jù)采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)　　果

1大鼠ADMSCs培養(yǎng)、鑒定和熒光標(biāo)記情況

大鼠ADMSCs原代培養(yǎng)6 h，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁，呈小圓形，大小不等。2～4 d后細(xì)胞伸展，短梭形或小多角形，核呈橢圓形，較大，絕大部分細(xì)胞的生長(zhǎng)呈現(xiàn)明顯的聚集性。1周后集落迅速增多，達(dá)到70%～80%融合，予以傳代培養(yǎng)。傳至第3代，可見(jiàn)細(xì)胞形態(tài)均一，梭形為主，胞漿豐富，核大,見(jiàn)圖1A。流式細(xì)胞儀檢測(cè)第3代ADMSCs表面標(biāo)志，結(jié)果顯示細(xì)胞表達(dá)CD90和CD29陽(yáng)性率分別為97.9%和86.6%，而CD34、CD45和CD31陽(yáng)性率僅分別為37.9%、6.2%和0.9%。經(jīng)Ad5-EGFP重組腺病毒轉(zhuǎn)染ADMSCs，MOI為100時(shí)，第3天在熒光顯微鏡下可見(jiàn)所有ADMSCs均有綠色熒光信號(hào)，達(dá)到細(xì)胞移植標(biāo)記要求，見(jiàn)圖1B。

Figure 1. The morphological characteristics and fluorescent labeling of cultured rat ADMSCs (×100).A: phase-contrast microscopic images of log-phase ADMSCs;B: GFP-labeled ADMSCs observed under fluorescence microscope. The transfection efficiency at MOI 100 was >90%.

圖1大鼠ADMSCs細(xì)胞形態(tài)及熒光標(biāo)記

2GFP標(biāo)記的ADMSCs在大鼠肺組織中的定植

GFP標(biāo)記的ADMSCs經(jīng)頸外靜脈移植后遷移到肺循環(huán)中, 在早期移植后第1、2、3周，ADMSCs-EI組大鼠的肺組織經(jīng)冰凍切片熒光顯微鏡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，其血管壁均可見(jiàn)綠色熒光細(xì)胞分布，表明經(jīng)靜脈早期移植的ADMSCs均可以在大鼠肺組織中定植存活,見(jiàn)圖2。

Figure 2. GFP-labeled ADMSCs in lung tissue frozen sections observed under fluorescence microscope (×200). A1～3: fluorescence microscopic images of ADMSCs-EI group, 1, 2 and 3 weeks after early intervention of ADMSCs; B1～3: phase-contrast microscopic images of the same vision. Green fluorescent cells (white arrows) were located in lung vessels.

圖2GFP標(biāo)記的ADMSCs定植于肺組織的熒光顯微鏡觀察

3動(dòng)物生存質(zhì)量情況

腹腔注射野百合堿后1周，PAH組大鼠活動(dòng)逐漸減少，毛發(fā)晦澀無(wú)光澤，呼吸急促，消瘦，體質(zhì)量下降或不增；對(duì)照組大鼠無(wú)上述改變。而PAH組大鼠癥狀進(jìn)一步加重，其中2只實(shí)驗(yàn)結(jié)束前近24 h未進(jìn)食；ADMSCs-EI組大鼠食欲逐漸恢復(fù)，體重漸增加，呼吸平穩(wěn)，毛發(fā)有光澤，活動(dòng)良好。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中各組動(dòng)物均無(wú)死亡現(xiàn)象。

4ADMSCs早期移植對(duì)PAH模型大鼠MPAP的影響

與對(duì)照組相比，腹腔注射MCT后3、4周，PAH組大鼠MPAP呈時(shí)間依賴性升高(均P<0.05)；同時(shí)，與PAH組比較，ADMSCs早期移植后2、3周，ADMSCs-EI組大鼠MPAP顯著下降(均P<0.05)。在ADMSCs-EI組大鼠中，早期移植后3周與早期移植后1周比較，MPAP明顯增高(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1ADMSCs早期移植對(duì)大鼠肺動(dòng)脈平均壓的影響

Table 1. Changes of mean pulmonary arterial pressure (MPAP) of rats 1,2 and 3 weeks after early transplantation of ADMSCs (mmHg. Mean±SD.n=10)

　　Group1week2weeks3weeksControl14．12±0．8214．68±0．9615．03±0．87PAH16．87±2．3926．95±0．89?△32．53±0．91?△ADMSCs?EI14．42±1．1516．37±0．94#18．26±1．41#△

*P<0.05vscontrol group;#P<0.05vsPAH group at the same time points;△P<0.05vs1 week in the same group.

5ADMSCs早期移植對(duì)PAH模型大鼠肺小動(dòng)脈EDdR、EDiR以及VCF的影響

與對(duì)照組比較，腹腔注射MCT后2周，PAH組大鼠肺小動(dòng)脈環(huán)對(duì)不同濃度ACh誘導(dǎo)的EDdR明顯減弱，其濃度-效應(yīng)曲線明顯右移，pD2值明顯降低(P<0.05)；同時(shí)，與PAH組相比，ADMSCs早期移植后1周，ADMSCs-EI組大鼠肺小動(dòng)脈環(huán)EDdR明顯改善(P<0.05)；但是，SNP誘導(dǎo)的EDiR和NE誘導(dǎo)的VCF在3組間無(wú)顯著差異(均P>0.05)。與對(duì)照組相比，腹腔注射MCT后3、4周，PAH組大鼠肺小動(dòng)脈環(huán)的EDdR和EDiR呈顯著降低，其濃度-效應(yīng)曲線顯著右移，pD2值顯著降低(均P<0.05)；同時(shí)，與PAH組相比，ADMSCs早期移植后2、3周，ADMSCs-EI組大鼠肺小動(dòng)脈環(huán)EDdR和EDiR明顯改善(均P<0.05)；但是，NE誘導(dǎo)的VCF在3組間無(wú)顯著差異(均P>0.05)。在ADMSCs-EI組大鼠中，早期移植后3周與早期移植后1周比較，肺小動(dòng)脈環(huán)的EDdR明顯減弱，其濃度-效應(yīng)曲線明顯右移，pD2值明顯降低(均P<0.05)，見(jiàn)圖3。

Figure 3. Effects of early transplantation of ADMSCs on pulmonary arteriolar EDdR, EDiR and VCF in MCT-treated rats. A～C: the pD2 values of EDdR, EDiR and VCF; D～F: the % relaxation of EDdR and EDiR, and the % contraction of VCF. Mean±SD.n=8.*P<0.05vscontrol group;#P<0.05vsPAH group;☆P<0.05vsPAH group at 1 week;△P<0.05vsADMSCs-EI group at 1 week.

圖3ADMSCs早期移植對(duì)MCT模型大鼠肺小動(dòng)脈EDdR、EDiR、VCF的影響

討　　論

本研究中我們觀察到MCT腹腔注射后2周, PAH組大鼠肺小動(dòng)脈環(huán)的EDdR明顯減弱，而MPAP和肺小動(dòng)脈環(huán)的EDiR、VCF沒(méi)有明顯變化，提示肺小動(dòng)脈環(huán)的EDdR受損先于肺動(dòng)脈壓力的增高。正常的肺血管舒縮功能依賴于肺血管內(nèi)皮的完整性，分子水平研究提示肺血管內(nèi)皮功能受損為肺動(dòng)脈高壓關(guān)鍵始動(dòng)因素，肺血管內(nèi)皮受損和功能障礙是肺動(dòng)脈高壓發(fā)生發(fā)展的主要環(huán)節(jié)。許多研究[13-15]發(fā)現(xiàn)，MCT誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈高壓，大鼠肺動(dòng)脈對(duì)ACE的反應(yīng)性下降，提示著內(nèi)皮功能受損導(dǎo)致了一氧化氮(nitric oxide, NO)合成、分泌下降，內(nèi)皮依賴的舒血管能力下降。本研究還觀察到MCT腹腔注射后3、4周， PAH組大鼠MPAP呈時(shí)間依賴性升高，同時(shí)肺小動(dòng)脈環(huán)的EDdR和EDiR呈時(shí)間依賴性降低，但是VCF沒(méi)有明顯變化，提示MCT所致大鼠肺動(dòng)脈壓力升高不僅與肺小動(dòng)脈EDdR受損關(guān)系密切，同時(shí)還與EDiR密切相關(guān)。Muruyama等[16]研究發(fā)現(xiàn)，離體的肺小動(dòng)脈環(huán)同時(shí)對(duì)硝普鈉的舒張反應(yīng)下降，說(shuō)明MCT誘導(dǎo)PAH大鼠肺血管舒張功能的損傷不僅限于內(nèi)皮依賴的血管舒張，可能與NO血管舒張作用下游效應(yīng)有關(guān)，包括細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷的合成與分解，肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)異常等。本研究小組前期研究發(fā)現(xiàn)MCT誘導(dǎo)PAH大鼠的肺動(dòng)脈血管重構(gòu)時(shí)，肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞存在鈣離子通道的電壓門(mén)控鈣通道α1C亞單位、蘭尼定受體3、肌漿網(wǎng)/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+-Mg2+ATP酶泵2a 及三磷酸肌醇受體1 mRNA和蛋白表達(dá)異常[17]。另外，Khan等[18]采用MCT誘導(dǎo)的PAH模型大鼠，一次腹腔注射MCT 60 mg/kg，3周后檢測(cè)離體葉外型肺動(dòng)脈環(huán)收縮功能，結(jié)果顯示葉外型肺動(dòng)脈環(huán)對(duì)去甲腎上腺素誘導(dǎo)的收縮反應(yīng)減弱，并認(rèn)為與Rho激酶活化偶聯(lián)障礙有關(guān)。而本研究尚未發(fā)現(xiàn)這種現(xiàn)象，考慮主要可能與所研究的肺動(dòng)脈部位不同有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，GFP標(biāo)記的ADMSCs早期經(jīng)頸外靜脈移植后1、2、3周均可以在MCT誘導(dǎo)PAH模型大鼠的肺組織血管壁中定植存活。ADMSCs早期移植MCT誘導(dǎo)PAH模型大鼠后1周，其肺小動(dòng)脈環(huán)的EDdR較PAH組有明顯改善；ADMSCs早期移植后2、3周，其MPAP及肺小動(dòng)脈環(huán)的EDdR、EDiR均較PAH組有顯著改善。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物移植ADMSCs后，生存狀況明顯改善，食欲漸漸恢復(fù)，毛發(fā)有光澤，活動(dòng)良好。本課題組在前期的研究中發(fā)現(xiàn)，歸巢于PAH模型大鼠體內(nèi)的ADMSCs能誘導(dǎo)分化為內(nèi)皮樣細(xì)胞,并認(rèn)為ADMSCs對(duì)血管內(nèi)皮有修復(fù)功能[7]。脂肪干細(xì)胞具有很強(qiáng)的自我增殖能力。在特定的條件下，可以誘導(dǎo)分化為多種組織細(xì)胞[19-20]。同時(shí)，脂肪干細(xì)胞具有一定的旁分泌能力，可以分泌具有生物活性的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子等多種促血管生長(zhǎng)因子, 促進(jìn)新生血管形成，加速內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng),修復(fù)損傷的內(nèi)皮[21-22]。何志旭等[23]研究發(fā)現(xiàn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植后可通過(guò)形成新生血管建立側(cè)枝循環(huán)，有效減輕野百合堿誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈高壓和肺組織病變程度。Liu等[24]報(bào)道了ADMSCs治療利用動(dòng)靜脈分流的方法建立的肺高血流量誘導(dǎo)的PAH模型大鼠。分流術(shù)造模12周后，給予大鼠靜脈注射5×107ADMSCs，細(xì)胞移植2周后，結(jié)果顯示，細(xì)胞移植的PAH大鼠血流動(dòng)力學(xué)異常和右心室肥厚發(fā)生逆轉(zhuǎn)，肺小動(dòng)脈重塑改善；同時(shí)，HGF和eNOS表達(dá)增強(qiáng)，肺血管床數(shù)量增加，改善肺血管阻力。本課題組前期采用ADMSCs治療MCT誘導(dǎo)的PAH模型大鼠，一次腹腔注射MCT 40 mg/kg，2周后給予ADMSCs治療，結(jié)果顯示肺動(dòng)脈壓力明顯降低且肺小動(dòng)脈重塑明顯改善[8]。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)，ADMSCs降低肺動(dòng)脈壓力可能與鈣離子通道變化有關(guān)[25]。另外，本課題組研究發(fā)現(xiàn)脂肪組織基質(zhì)血管組分移植可明顯改善阿霉素誘導(dǎo)的心力衰竭大鼠心功能，部分機(jī)制可能與促進(jìn)心肌組織血管再生有關(guān)。因此，我們有理由認(rèn)為ADMSCs移植治療可以修復(fù)受損的內(nèi)皮，并改善內(nèi)皮依賴與非內(nèi)皮依賴的舒血管作用及分泌舒血管因子，調(diào)節(jié)血管張力和促進(jìn)血管新生。

另外，本研究還發(fā)現(xiàn)在ADMSCs-EI組大鼠中，早期移植后3周與早期移植后1周比較， MPAP仍是升高，肺小動(dòng)脈環(huán)的EDdR仍是減弱，因此，我們推測(cè)ADMSCs早期干預(yù)，僅是延緩MCT誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈高壓和肺小動(dòng)脈血管功能損害的進(jìn)展。因此，目前關(guān)于ADMSCs移植的最佳時(shí)機(jī)仍需要進(jìn)一步研究。

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