黃衛(wèi)紅　孫棣

【摘 要】建立快速簡便的牛奶中氟甲喹的測定方法；以乙腈為提取劑，正己烷除脂后LC-MS/MS測定；氟甲喹線性范圍為0.2～50ng/mL，檢出限為0.2μg/kg，加標(biāo)平均回收率為84.3～101.0%，RSD小于10%。該方法定量準(zhǔn)確可靠，可用于牛奶中氟甲喹的測定。

【關(guān)鍵詞】牛奶；氟甲喹；LC-MS/MS

氟甲喹（flumequine）為第二代氟喹諾酮類抗菌藥，其抗菌譜廣，殺菌力強(qiáng)，對治療革蘭氏陰性菌感染，特別是對大腸桿菌、支原體、嗜水氣單胞菌引起的畜、禽及水生動物疾病有較好療效[1-2]。由于其具有高安全性和滲透性，在無公害養(yǎng)殖、出口畜產(chǎn)品和水產(chǎn)品中得到廣泛應(yīng)用，但其產(chǎn)生的毒副作用仍會對人體產(chǎn)生直接的危害，在食品中才殘留問題已經(jīng)引起人們的關(guān)注。有關(guān)生物樣品中氟甲喹的測定已有報(bào)道，主要是高效液相色譜法[3-4]，前處理過程也較為復(fù)雜繁瑣，本文建立了牛奶中氟甲喹的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定法，選擇乙腈提取樣品后正己烷除脂，結(jié)果表明，該法簡單快速，靈敏度高，適用于牛奶中氟甲喹的快速測定。

1.實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器設(shè)備

TSQ Quantum Ultra三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀，ThermoFisher公司；氮?dú)獍l(fā)生器，PEAK公司；Mnltireax振蕩混勻器，Heielolph公司；milli-QAcademic超純水系統(tǒng)，密理博中國有限公司；TufboVap自動氮吹儀，BIOTAGE公司。

1.2標(biāo)準(zhǔn)品及試劑

氟甲喹購自于Dr.Ehrensforfer GmbH Germany。甲酸、乙酸、乙腈、正己烷：色譜純，Merck公司；超純水。

1.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

儲備溶液（1mg/mL）準(zhǔn)確稱取10mg氟甲喹標(biāo)準(zhǔn)品，分別用乙腈定容至10mL，配制成1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液-20℃冰箱保存；中間溶液（10μg/mL）分別準(zhǔn)確量取標(biāo)準(zhǔn)儲備液1.00mL置于100mL容量瓶中，用乙腈定容后-20℃冰箱保存；標(biāo)準(zhǔn)工作使用液配制，將中間溶液用初始流動相逐級稀釋配制成氟甲喹分別為0.2ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL，-20℃冰箱保存。

1.4樣品處理

取樣品2g，加入1%乙酸乙腈6mL振蕩提取后4000轉(zhuǎn)離心，取上清液于離心管中，重復(fù)提取一次，合并上清液，加入6mL正己烷渦旋提取后離心取下層于離心管中。45℃下氮?dú)饬鞔蹈桑?mL初始流動相復(fù)溶后加入2mL正己烷渦旋離心后取下層過膜進(jìn)樣。

1.5液相色譜及質(zhì)譜條件

液相色譜條件：色譜柱為Thermo-Hypersil GOLD柱（3μm×2.1mm×100mm）；柱溫40℃；流速0.5mL/min；進(jìn)樣量10μL；梯度條件見表1。

質(zhì)譜條件：離子源ESI（+）參數(shù)：噴霧電壓3000V；鞘氣40arb、輔助氣5arb、離子傳輸毛細(xì)管溫度為350℃。MRM優(yōu)化參數(shù)見表2。

2.結(jié)果及討論

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

配制氟甲喹標(biāo)準(zhǔn)工作液為0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0 ng/mL，線性方程見表3。

2.2加標(biāo)回收率和精密度

以三組陰性樣品為測試樣品，氟甲喹，高、中、低分別為0.5、2.0、10.0ng，每一水平在相同實(shí)驗(yàn)條件下做6個平行樣，計(jì)算回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表4。

表4 加標(biāo)回收率及精密度（n=6）

2.3 LC-MS/MS分析

通過對流動相梯度洗脫和離子源參數(shù)的優(yōu)化，使氟甲喹在色譜柱上有合適的保留并獲得較好的檢測靈敏度，通過對準(zhǔn)分子離子二級質(zhì)譜掃描，發(fā)現(xiàn)主要碎片離子為262.0/244.0、262.0/202.0、，三組子離子中262.0/244.0的豐度最強(qiáng)，但其信噪比卻最低，可能是因?yàn)樵撟与x子的產(chǎn)生是由于母離子脫水形成，基線噪音比較高，故最終確定定量離子為262.0/202.0、定性離子為262.0/126.0，三個離子對的相對豐度圖和色譜圖見圖1。

本文在參照現(xiàn)行的國內(nèi)氟甲喹檢測方法的基礎(chǔ)上對樣品前處理和檢測方法進(jìn)行改進(jìn)，方法簡單易行，有利于批量樣品的測定。

3.結(jié)論

采用1%乙酸乙腈作為提取劑，正己烷脫脂后，用LC-MS/MS方法測定牛奶中氟甲喹的含量，結(jié)果表明方法前處理簡單快速，回收率好，檢出限低，滿足牛奶中進(jìn)出口的檢測要求，目前將該方法擴(kuò)展到動物組織中氟甲喹的檢測中也獲得滿意的方法學(xué)。

【參考文獻(xiàn)】

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