1 引 言

甲硫氨酸（Methionine，Met）在腺苷轉移酶催化下與ATP反應生成S腺苷甲硫氨酸（SAdenosylmethionine， SAM），SAM是體內(nèi)最主要的甲基供體，在甲基轉移酶的催化下，參與乙酰膽堿、磷脂類、生物信息大分子DNA和RNA＼[1＼]的甲基代謝。SAM去甲基后形成S腺苷同型半胱氨酸（SAdenosylhomocysteine， SAH），SAH是所有轉甲基酶的強烈抑制劑，SAM與SAH濃度的比值（SAM/SAH）被認為是更能反映甲基化程度的指標＼[2＼]。SAH經(jīng)水解釋放出腺苷轉變?yōu)橥桶腚装彼幔℉omocysteine， Hcy）。Hcy以N5甲基四氫葉酸為甲基供體，重新合成甲硫氨酸＼[3，4＼]。

葉酸參與獲取及轉運一碳單位的生物代謝，為Hcy合成Met提供甲基。在懷孕前3個月內(nèi)缺乏葉酸，可引起胎兒神經(jīng)管發(fā)育畸形＼[5＼]。葉酸對人類生殖，尤其是對胚胎著床的影響尚不明確。葉酸缺乏與子宮內(nèi)膜受體相關基因的表達及甲基化作用機制尚不清楚。本研究構建了葉酸缺乏孕鼠模型，利用此模型研究葉酸缺乏對子宮內(nèi)膜受體基因及胚胎著床的影響，并以此了解孕鼠體內(nèi)甲基化水平。

目前，測定血漿中SAM和SAH的方法主要是高效液相色譜質(zhì)譜法（HPLCMS）＼[6，7＼]和高效液相色譜熒光檢測法（HPLCFD）＼[8，9＼]。其中HPLCMS特異性好，靈敏度高，但價格昂貴，不適合常規(guī)分析。HPLCFD法測定血漿中的SAM和SAH，需衍生化，操作繁瑣。在血漿中，SAM和SAH濃度低，高效液相色譜紫外（HPLCUV）檢測法靈敏度達不到檢測要求；而在組織或紅細胞（RBCs）中，SAM和SAH濃度高，可用HPLCUV檢測法＼[10，11＼]進行測定。由于RBCs中SAH含量低，目前已建立的同時測定SAM和SAH的HPLCUV檢測法，樣本用量大，不適合小鼠RBCs樣本測定。本研究建立了HPLCUV檢測法同時測定小鼠RBCs中SAM和SAH，此方法樣本用量少，操作簡單，快速，靈敏，特異，并成功運用于葉酸缺乏和健康小鼠RBCs樣本測定。