1 引 言
隨著生命科學研究的深入,人們發(fā)現(xiàn)生物小分子不僅是基因和蛋白的底物和終端產(chǎn)物,同時也可作為指示和感受生物狀態(tài)變化的標記物,它們通過與細胞內(nèi)各種生物分子的相互作用調(diào)控著各種生理病理過程\[1~3\]。在眾多生物小分子中,氨基酸是重要的成員之一。氨基酸是構(gòu)成肽和蛋白質(zhì)的基本單位,同時也在一些疾病的發(fā)生和發(fā)展中扮演著至關重要的角色\[4,5\]。Jain等\[6\]發(fā)現(xiàn),最小的氨基酸(甘氨酸)是與腫瘤細胞增殖率相關的重要代謝產(chǎn)物。Asiago等\[7\]采用谷氨酸、組氨酸、脯氨酸、酪氨酸作為代謝標記物,成功地早期預測了乳腺癌的復發(fā)。因此,氨基酸的檢測能為生物學研究提供一定的前期基礎,并對一些疾病的風險評估具有重要的借鑒意義。
近年來,對氨基酸的測定方法有GCMS法\[8\]、LCMS法\[9,10\]、CE法等\[11~14\]。這些方法通常需要預處理,繁瑣而費時,難于實現(xiàn)對大量樣品的快速檢測。電噴霧萃取電離質(zhì)譜(EESIMS)是一種新型的常壓環(huán)境電離質(zhì)譜方法(Ambient mass spectrometry),它的最大優(yōu)點在于能在無需預處理條件下對復雜基體樣品直接進行質(zhì)譜檢測\[15~17\]。本研究首先改進了EESI電離源,采用半封閉長方體構(gòu)造,使之具有專門的管道排出實驗中的廢液和廢氣,提高實驗的穩(wěn)定性和安全性。不同極性氨基酸標準品被用來表征和優(yōu)化EESIMS檢測平臺,利用此平臺直接進行復雜基體樣品(尿液)中氨基酸檢測。結(jié)果表明,EESIMS檢測氨基酸時具有分析速度快、靈敏度高、基體影響小等特點,適宜用于大量樣品的快速檢測。