楊自副，朱曉燕

（楚雄州中醫(yī)院，云南楚雄675000）

楚雄州中醫(yī)院2011年細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)結(jié)果分析

楊自副，朱曉燕

（楚雄州中醫(yī)院，云南楚雄675000）

目的：了解2011年臨床分離菌株對(duì)常用抗生素的耐藥性。方法：采用API鑒定和ATB藥敏板條及紙片擴(kuò)散法對(duì)2011年臨床分離1 127株細(xì)菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。結(jié)果：1 127株細(xì)菌中革蘭陰性菌占76.8%，革蘭陽(yáng)性菌占23.2%。革蘭陰性菌中前3位為大腸埃希菌45.7%（395/865）、肺炎克雷伯菌10.6%（92/865）和銅綠假單胞菌9.0%（78/865）；革蘭陽(yáng)性菌中前3位為屎腸球菌27.1%（71/ 262）、金黃色葡萄球菌24.8%（65/262）和表皮葡萄球菌16.0%（42/262）。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示泛耐藥銅綠假單胞菌和不動(dòng)桿菌檢出率分別為19.2%（15/78）和32.8%（23/70）；MRSA和MRCNS分別占金黃色葡萄球菌和CNS的32.3%（21/65）和83.3%（40/48）。結(jié)論：定期進(jìn)行耐藥性監(jiān)測(cè)有助于了解細(xì)菌耐藥性的變遷，為臨床用藥提供依據(jù)。

細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)；抗生素；藥敏試驗(yàn)；耐藥率

細(xì)菌對(duì)抗生素耐藥已成為臨床治療細(xì)菌感染的難點(diǎn)。及時(shí)、準(zhǔn)確地掌握本地區(qū)細(xì)菌耐藥性動(dòng)態(tài)，了解細(xì)菌耐藥性的變遷，對(duì)于指導(dǎo)臨床合理用藥，并為新抗生素的研制提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)，具有非常重要的意義。為此，從2008年始我們逐年監(jiān)測(cè)臨床分離菌株耐藥性，了解臨床常見分離菌株對(duì)常用抗生素的耐藥性變遷，為臨床經(jīng)驗(yàn)用藥和感染流行提供參考資料?，F(xiàn)將對(duì)楚雄州中醫(yī)院2011年臨床送檢標(biāo)本分離菌的耐藥監(jiān)測(cè)結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來(lái)源2011年1月1日—2011年12月31日我院臨床送檢血液、痰液、尿液、分泌物等標(biāo)本分離的菌株。剔除同一患者相同部位的重復(fù)菌株，按統(tǒng)一的方案進(jìn)行抗生素敏感試驗(yàn)。

1.1.2 培養(yǎng)基及抗生素紙片ATB藥敏板條、MH瓊脂及亞胺培南/亞胺培南EDTA Etest試條和頭孢硝噻吩紙片均為法國(guó)生物梅里埃公司產(chǎn)品；氨曲南、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢哌酮/舒巴坦、頭孢替坦、頭孢唑肟、亞胺培南、美羅培南、厄他培南、利奈唑胺、多黏菌素B、米諾環(huán)素、紅霉素、克林霉素、呋喃妥因等抗生素紙片為英國(guó)OXOID公司產(chǎn)品；培養(yǎng)基制作按全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第三版〔1〕規(guī)定和MH瓊脂說明配制。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)細(xì)菌鑒定采用法國(guó)生物梅里埃API鑒定板條及ATB NEW鑒定軟件鑒定至種。藥敏試驗(yàn)以ATB藥敏板條為主，根據(jù)需要紙片擴(kuò)散法補(bǔ)充氨曲南、頭孢哌酮/舒巴坦、頭孢替坦、頭孢唑肟、利奈唑胺、多黏菌素B、米諾環(huán)素、紅霉素、克林霉素、呋喃妥因等。另外，因腸桿菌科ATB板條藥敏折點(diǎn)與抗菌藥物敏感性試驗(yàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)等21版（CLSI M100-S21）不相符〔2〕，故采用紙片擴(kuò)散法補(bǔ)充頭孢他啶、頭孢噻肟、亞胺培南、美羅培南藥敏。質(zhì)控菌株為金黃色葡萄球菌ATCC 25923和ATCC 29213；大腸埃希菌ATCC 25922和ATCC 35218；銅綠假單胞菌ATCC 27853；糞腸球菌ATCC 29212；肺炎鏈球菌ATCC 49619，流感嗜血桿菌ATCC 49247。

1.2.2 β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)用頭孢硝噻吩紙片檢測(cè)葡萄球菌、流感嗜血桿菌等細(xì)菌的β-內(nèi)酰胺酶；按CLSI M100-S21規(guī)定未常規(guī)對(duì)腸桿菌科細(xì)菌進(jìn)行ESBLs檢測(cè)。

1.2.3 結(jié)果的判斷和數(shù)據(jù)分析按CISI M100-S21折點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)斷判藥敏試驗(yàn)結(jié)果，采用Whonet5.6軟件統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果

2.1 臨床分離細(xì)菌菌種及分布1 127株菌中，革蘭陰性菌865株（76.8%），其中，前5位分別是大腸埃希菌45.7%（395/865）、肺炎克雷伯菌10.6%（92/ 865）、銅綠假單胞菌9.0%（78/865）、陰溝腸桿菌6.2%（54/865）和鮑曼不動(dòng)桿菌6.2%（54/865），其它尚有流感嗜血桿菌3.0%（26/865）、淋病奈瑟菌0.6（5/865）等；革蘭陽(yáng)性菌262株（23.2%），其中，前5位分別是屎腸球菌27.1%（71/262）、金黃色葡萄球菌24.8%（65/262）、表皮葡萄球菌16.0%（42/262）、糞腸球菌12.6%（33/262）、肺炎鏈球菌6.1%（16/262）。

上述菌株在門診患者和住院患者中分別占5.6%和94.4%。標(biāo)本分布為尿液標(biāo)本分離菌占34.3%、呼吸道標(biāo)本占28.9%，傷口分泌物占17.5%，血液等無(wú)菌體液占14.8%。尿液標(biāo)本分離菌中大腸埃希菌、屎腸球菌和糞腸球菌分別占47.2%、11.9%和6.0%；呼吸道標(biāo)本分離菌中克雷伯菌、不動(dòng)桿菌和銅綠假單胞菌分別占17.5%、11.7%和9.8%；傷口分泌物分離菌中大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和克雷伯菌分別占33.5%、15.2%和5.6%；血液等無(wú)菌體液分離菌中大腸埃希菌、屎腸球菌和克雷伯菌分別占41.9%、6.0%和4.8%。

2.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 苛養(yǎng)菌16株肺炎鏈球菌（均為非腦脊液分離菌株）中，經(jīng)最低抑菌濃度（MIC）檢測(cè)，5株為青霉素耐藥肺炎鏈球菌PRSP（31.2%），4株為青霉中介肺炎鏈球菌PISP（25.0%），16株肺炎鏈球菌對(duì)紅霉素和克林霉素全耐藥，對(duì)四環(huán)素耐藥率達(dá)93.8%，未檢出復(fù)方新諾明敏感菌株；6株β溶血性鏈球菌對(duì)青霉素均敏感，4株克林霉素和四環(huán)素耐藥，5株對(duì)紅霉素耐藥；26株流感嗜血桿菌中β-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性率為66.7%，對(duì)阿莫西林/克拉維酸、頭孢噻肟、氧氟沙星均敏感，對(duì)復(fù)方新諾明耐藥率達(dá)66.7%。另外，5株淋病奈瑟菌均為β-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性株且四環(huán)素全部耐藥，4株均對(duì)環(huán)丙沙星耐藥。見表1。

2.2.2 葡萄球菌屬62株金黃色葡萄球菌中MRSA檢出率為32.3%，48株凝固酶陰性葡萄球菌中MRCNS檢出率為83.9%。苯唑西林耐藥葡萄球菌對(duì)常用抗生素的耐藥率明顯高于苯唑西林敏感的葡萄球菌。MSSA產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性率為95.5%，未發(fā)現(xiàn)萬(wàn)古霉素、替考拉寧和利奈唑胺耐藥葡萄球菌。見表2。

2.2.3 腸球菌屬屎腸球菌對(duì)大部分抗生素的耐藥率明顯高于糞腸球菌，如糞腸球菌對(duì)青霉素和氨芐西林耐藥率分別為11.4%和8.6%，而屎腸球菌則高達(dá)85.9%和84.5%，對(duì)呋喃妥因耐藥率分別為2.9%，和42.3%；兩種腸球菌對(duì)紅霉素和利福平耐率均在85%以上。未檢出萬(wàn)古霉素、替考拉寧和利奈唑胺耐藥腸球菌。見表3。

2.2.4 腸桿菌科大腸埃希菌、克雷菌屬、腸桿菌屬和其它腸桿菌對(duì)常用抗生素的耐藥性率見表4，共檢

出對(duì)亞胺培南耐藥的肺炎克雷伯菌4株，陰溝腸桿菌2株，根據(jù)CLSIM100-S21規(guī)定，用厄他培南和美羅培南抗生素紙片進(jìn)行霍奇試驗(yàn)（Hodge）試驗(yàn)檢測(cè)均為陰性，用亞胺培南/亞胺培南EDTA Etest試條進(jìn)行金屬酶表型確認(rèn)試驗(yàn)陰性。另外，檢出沙門氏菌1株，對(duì)阿莫西林耐藥，環(huán)丙沙星和復(fù)方新諾明均敏感。

表1 肺炎鏈球菌、β溶血性鏈球菌和流感嗜血桿菌對(duì)常用抗生素的敏感率和耐藥率（n）

表2 葡萄球菌屬細(xì)菌對(duì)常用抗生素的敏感率和耐藥率/%

表3 腸球菌屬細(xì)菌對(duì)常用抗生素的敏感率和耐藥率/%

表4 腸桿菌科細(xì)菌對(duì)常用抗生素的敏感率和耐藥率/%

2.2.5 非發(fā)酵菌銅綠假單胞菌、不動(dòng)桿菌屬和嗜麥芽窄單胞菌對(duì)常用抗生素的耐藥率見表5，泛耐藥銅綠假單胞菌和不動(dòng)桿菌檢出率分別為19.2%（15/ 78）和32.8%（23/70）。

表5 非發(fā)酵菌對(duì)常用抗生素的敏感率和耐藥率/%

3 討論

2011 年我院臨床標(biāo)本共分離病原菌1 127株，與我院2009年及2010年分離的病原菌數(shù)相比分別增加24.4%和19.1%〔3-4〕，其中，革蘭陰性菌占76.8%，革蘭陽(yáng)性菌占23.2%，陰性菌所占比率較2010年的增加8.3%〔4〕。

苛養(yǎng)菌方面，與我院2010年監(jiān)測(cè)結(jié)果相比，檢出率明顯上升，特別是流感嗜血桿菌分離率，這可能與臨床重視及標(biāo)本采樣送檢及時(shí)有關(guān)。在肺炎鏈球菌中，PRSP也有檢出，且對(duì)紅霉素、克林霉素全部耐藥，未檢出復(fù)方新諾明敏感株；β溶血性鏈球菌對(duì)青霉素全部敏感，這與其它報(bào)道相當(dāng)〔3-12〕；流感嗜血桿菌β-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性率達(dá)66.7%，對(duì)復(fù)方新諾明耐藥率達(dá)66.7%，也較其它報(bào)道高〔5-12〕；5株淋病奈瑟菌均為β-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性株，且四環(huán)素全部耐藥，4株對(duì)環(huán)丙沙星耐藥；雖然這些菌株檢出率較低，但耐藥性卻很嚴(yán)重，應(yīng)引起臨床高度重視。

葡萄球菌中金黃色葡萄球菌分離率較低，MRSA檢出率為32.3%，是我院2010年的1倍〔4〕，但仍明顯低于其它報(bào)道〔5-12〕，MRSA對(duì)所有的β內(nèi)酰胺類抗生素耐藥，并可同時(shí)對(duì)氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)脂類、四環(huán)素類和克林霉素抗生素交叉耐藥，其耐藥率明顯高于MSSA。MRSA對(duì)復(fù)方新諾明的耐藥率為23.8%，較我院2009、2010年明顯降低〔3-4〕，和國(guó)內(nèi)其它學(xué)者報(bào)道相當(dāng)〔5-12〕；MRCNS檢出率為83.3%，明顯高出國(guó)內(nèi)其他學(xué)者報(bào)道〔5-12〕，與我院2009年～2010年相當(dāng)〔3-4〕。未發(fā)現(xiàn)萬(wàn)古霉素、替考拉寧和利奈唑胺耐藥葡萄球菌。

腸球菌中屎腸球菌檢出率明顯高于糞腸球菌，且對(duì)于大部分抗生素的耐藥率也明顯高于糞腸球菌，和其它學(xué)者報(bào)道的相當(dāng)〔5-7〕，對(duì)青霉素和氨芐西林耐藥率較我院2010年有所上升〔4〕，糞腸球菌和屎腸球菌對(duì)高單位慶大霉素耐藥率分別為14.3%和56.3%，對(duì)高單位鏈霉素耐藥率分別為22.9%和21.1%，與其他學(xué)者報(bào)道有較大差異〔5-7〕。屎腸球菌對(duì)呋喃妥因耐藥率已高達(dá)42.3%，也較我院2010年明顯上升〔4〕，已和2011年CHINET報(bào)道相當(dāng)〔5〕。值得注意的是兩種腸球菌對(duì)紅霉素和利福平的耐藥率都已達(dá)到或超過85%，與我院2010年相當(dāng)〔4〕，但明顯高于2011年CHINET報(bào)道〔5〕。未發(fā)現(xiàn)萬(wàn)古霉素、替考拉寧和利奈唑胺耐藥腸球菌。

腸桿菌科中，根據(jù)CLSI M100-S21規(guī)定未常規(guī)對(duì)腸桿菌科細(xì)菌進(jìn)檢ESBLs檢測(cè)，與我院2009年～2010年監(jiān)測(cè)結(jié)果相比，克雷伯菌屬檢出率有所上升，沙雷菌屬檢出率明顯下降〔3-4〕。2010年新增的頭孢唑肟和頭孢替坦，與同類的頭孢噻肟和頭孢西丁相比，耐藥率依然較低，臨床可考慮推廣這類藥物的應(yīng)用以緩解其它頭孢類抗生素的壓力。在對(duì)腸桿菌科的監(jiān)測(cè)中，共檢出對(duì)亞胺培南耐藥的肺炎克雷伯菌4株，陰溝腸桿菌2株，KPC酶和金屬酶檢測(cè)均為陰性，推測(cè)其耐藥機(jī)制可能為產(chǎn)生ESBLs和/或AmpC及同時(shí)合并外膜孔蛋白丟失有關(guān)。

非發(fā)酵糖菌中銅綠假單胞菌對(duì)臨床常用抗生素的耐藥率明顯低于其它地區(qū)的報(bào)道〔5-12〕，不動(dòng)桿菌屬中以鮑曼不動(dòng)桿菌為主，其耐藥率也明顯低于其它地區(qū)的報(bào)道〔5-12〕，但泛耐藥的銅綠假單胞菌和鮑曼屬不動(dòng)桿菌檢出率較我院2010年明顯上升。因使用高效廣譜抗生素后而出現(xiàn)的嗜麥芽窄食單胞菌也有檢出，且檢出2株復(fù)方新諾明耐藥株。與我院2010年監(jiān)測(cè)結(jié)果相比，非發(fā)酵糖菌的檢出率明顯上升〔4〕，應(yīng)引起臨床醫(yī)生重視。

細(xì)菌對(duì)抗生素的耐藥程度存在較大的地域差異〔3-10〕。全國(guó)大范圍或地區(qū)性的耐藥監(jiān)測(cè)固然重要，城市和醫(yī)院的小范圍細(xì)菌耐藥性也各有其特點(diǎn)。因此，加強(qiáng)本地及本院細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)本地區(qū)細(xì)菌耐藥性特征及發(fā)展趨勢(shì)，可為臨床經(jīng)驗(yàn)用藥提供更好的參考依據(jù)。

〔1〕葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜，等.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程〔M〕. 3版.南京：東南大學(xué)出版社，1996：890-920.

〔2〕Clinical and Laboratory Standards Institute.Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing；Twenty-First Informational Supplement〔S〕.2011.

〔3〕楊自副，楊艷蘭，蔣潔晗，等.云南省楚雄州中醫(yī)院2009年細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)結(jié)果〔J〕.中國(guó)感染與化療雜志，2011，11（1）：49-53.

〔4〕楊自副，陸瓊慧，朱曉燕，等.云南省楚雄州中醫(yī)院2010年細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)結(jié)果〔J〕.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床雜志，2012，9（22）：2824-2829.

比利時(shí)核能研究中心(SCK-CEN)正在開發(fā)DosDiMEco方法(文獻(xiàn)中當(dāng)時(shí)的說法)。該方法包括一個(gè)軟件包(用MathCad 2001i professional編寫)，其中包含3個(gè)子程序。第一個(gè)子程序用于計(jì)算參考有機(jī)體由于γ射線產(chǎn)生的能量吸收。另外兩個(gè)子程序與此類似，分別計(jì)算α和β污染物。該模型從文獻(xiàn)中獲取適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量衰變數(shù)據(jù)。

〔5〕胡付品，朱德妹，汪復(fù)，等.2011年中國(guó)CHINET細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)〔J〕.中國(guó)感染與化療雜志，2012，12（5）：321-329.

〔6〕朱德妹，張嬰元，汪復(fù)，等.2010年上海地區(qū)細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)〔J〕.中國(guó)感染與化療雜志，2011，11（6）：436-445.

〔7〕艾效曼，陶鳳蓉，陳東科，等.2009年北京醫(yī)院細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)結(jié)果〔J〕.中國(guó)感染與化療雜志，2011，11（2）：141-146.

〔8〕汪復(fù)，朱德妹，胡付品，等.2008年中國(guó)CHINET細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)〔J〕.中國(guó)感染與化療雜志，2009，9（5）：321-329.

〔9〕朱德妹，張嬰元，汪復(fù).2008年上海地區(qū)細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)〔J〕.中國(guó)感染與化療雜志，2009，9（6）：401-411.

〔10〕時(shí)東彥，趙建宏.2008年河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院臨床分離菌分布及耐藥譜型監(jiān)測(cè)〔J〕.中國(guó)感染與化療雜志，2011，11（1）：57-60.

〔11〕李多，李光榮，向成玉.2008年臨床分離病原菌分布及耐藥性分析〔J〕.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2010，20（8）：1155-1158.

〔12〕饒紹琴，周忠華，喻華.Mohnarin2006-2007年度報(bào)告：西南地區(qū)細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)〔J〕.中國(guó)抗生素雜志，2008，33（10）：622-628.

（責(zé)任編輯 董杰）

Surveillance of Bacterial Resistance in the Chinese Medicine Hospital of Chuxiong Prefecture in 2011

YANG Zifu,ZHU Xiaoyan
（Chinese Medicine Hospital of Chuxiong Prefecture,Chuxiong,Yunnan 675000,China)

Objective:To investigate the resistance of clinical isolates in the Chinese Medicine Hospital of Chuxiong Prefecture in 2011.Methods:Antimicrobial susceptibility testing of 946 clinical isolates were carried out by Kirby-Bauer（K-B）method and microdilution method.Results:Among the 1 127 clinical isolates,gram-negative bacteria and gram-positive bacteria accounted for 76.8%and 23.2%,respectively.In 865 gram negative bacillis,E.coli,Klebsiella pneumoniae and Pseudomonas aeruginosa. accounted for 45.7%（395/865）,10.6%（92/865）and 9.0%（78/865）,respectively.In 262 gram positive cocci,E.faecium,S.aureus and Staphylococcus epidermidis.accounted for 27.1%（71/262）,24.8%（65/262）and 16.0%（42/262）.Susceptibility test results showed that Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter spp.were detected in 19.2%（15/78）and 32.8%（23/70）pan-resistant strains.The prevalence of emethicillin-resistant Staphylococcus was 83.3%（40/48）in S.aureus and 32.3%（21/65）incoagulasenegative Staphylococcus.Conclusion:Surveillance of bacterial resistance is most important and valuable for guidance of rational selection of antimicrobial agents.

bacterial resistance surveillance;antimicrobial agents;susceptibility testing;resistance rate

R378

B

1672-2345（2013）06-0054-06

10.3969/j.issn.1672-2345.2013.06.016

2012-10-22

2013-03-07

楊自副，副主任檢驗(yàn)技師，主要從事臨床檢驗(yàn)及病原微生物檢驗(yàn)研究.