遲云峰，張明晶

磷酸西他列?。╯itagliptin phosphate）是用于治療2型糖尿病的二肽基肽酶-4（DPP-4）抑制劑[1]。二甲雙胍能抑制腸道對(duì)葡萄糖的吸收，抑制肝細(xì)胞的糖原異生，改善機(jī)體對(duì)胰島素的敏感性。兩類(lèi)藥物作用機(jī)制不同，具有協(xié)同作用，臨床上將磷酸西他列汀與二甲雙胍聯(lián)合應(yīng)用，增強(qiáng)降糖效果，改善對(duì)2型糖尿病患者血糖的控制，并減少不良反應(yīng)的發(fā)生。2007￣03美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)默克公司的復(fù)方西他列汀二甲雙胍緩釋片上市，商品名為“JANUMET XR”。臨床研究表明，西他列汀和二甲雙胍合用[2]，能明顯降低具有臨床意義的糖基化血紅蛋白（HbA1c）水平。國(guó)內(nèi)還沒(méi)有復(fù)方西他列汀二甲雙胍制劑上市。本文建立了反向高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方西他列汀二甲雙胍緩釋片中磷酸西他列汀的含量，用高效液相色譜法法測(cè)定鹽酸二甲雙胍的含量，兩種成分測(cè)定互不干擾，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，可有效控制產(chǎn)品質(zhì)量。

1 儀器和試劑

濕法混合制粒機(jī)；PP40型全自動(dòng)壓片機(jī)；ZES－8G型智能溶出試驗(yàn)儀；Waters 515高效液相色譜儀和紫外可見(jiàn)分光檢測(cè)器；電子分析天平；UV-254型可見(jiàn)分光光度計(jì)。磷酸西他列??；鹽酸二甲雙胍。

2 方法與結(jié)果

2.1 磷酸西他列汀的含量測(cè)定 采用反相高效液相色譜法測(cè)定。

2.1.1 溶液制備

2.1.1.1 對(duì)照溶液 精密稱(chēng)取磷酸西他列汀對(duì)照品50 mg，加流動(dòng)相溶解，并定容至50 ml量瓶中，制成濃度為1000 μg/ml的磷酸西他列汀對(duì)照品溶液。

2.1.1.2 供試品溶液 取本品10片，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量（約相當(dāng)于磷酸西他列汀50 mg），置于50 ml量瓶中，加流動(dòng)相充分溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。

2.1.2 色譜條件和系統(tǒng)適用性 色譜柱：Symmetry C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-0.1%高氯酸水溶液（32∶68），流速 1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng) 268 nm，柱溫 30℃。 取供試品溶液10 μl，注入液相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算磷酸西他列汀的含量。理論塔板數(shù)按磷酸西他列汀計(jì)算不低于6000。

2.1.3 線性關(guān)系考察 分別精密量取磷酸西他列汀對(duì)照品溶液適量，制得濃度分別為 1、2、5、10、20、50、100、200 μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。依法測(cè)定，結(jié)果磷酸西他列汀濃度在1～200 μg/ml，呈良好的線性關(guān)系（r=0.9999）。

2.1.4 回收率試驗(yàn) 稱(chēng)取磷酸西他列汀對(duì)照品溶液適量，加入處方量的空白輔料，分別配成80%、100%、120%3種不同濃度的供試品溶液各3份，依法測(cè)定，3種供試品的平均回收率分別為 99.3%、99.5%、99.1%；RSD值分別為 0.35%、0.30%、0.16%。

2.1.5 精密度試驗(yàn) 取磷酸西他列汀對(duì)照品溶液適量，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得其峰面積，結(jié)果RSD=0.33%。

2.1.6 重復(fù)性試驗(yàn) 重復(fù)取樣6份，精密稱(chēng)定，按“2.1.1.2”項(xiàng)下方法操作，結(jié)果RSD為1.1%（n=6），方法的重復(fù)性良好。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液分別在0、1、4、8、12、24 h進(jìn)樣，結(jié)果RSD為0.98%，表明供試品溶液在室溫下24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.8 樣品含量測(cè)定 取本品3批，批號(hào)110920、110921、110922，磷酸西他列汀含量分別為99.73、101.23、99.48%。

2.2 鹽酸二甲雙胍的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）流動(dòng)相為 0.01 mol/L磷酸二氫鉀緩沖液含0.015 mol/L 高氯酸（pH3.0）∶甲醇=9∶1；流速 1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為233 nm。 進(jìn)樣量 20 μl。

2.2.2 波長(zhǎng)的選擇 精密稱(chēng)取鹽酸二甲雙胍對(duì)照品50 mg，置100 ml量瓶中，用2%甲醇溶解稀釋至刻度，搖勻；精密量取上述溶液1 ml置100 ml量瓶中，用2%甲醇稀釋至刻度，搖勻，在200～800 nm范圍內(nèi)，結(jié)果在233 nm 波長(zhǎng)處有最大吸收。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密稱(chēng)取干燥至恒重鹽酸二甲雙胍對(duì)照品約50 mg，置于50 ml容量瓶中，加2%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，配成1.0 mg/ml的對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密吸取儲(chǔ)備液 0.5、1、2、4、8、16ml置于 50ml容量瓶中， 加 2%甲醇稀釋至刻度，充分搖勻，配成 10、20、40、80、160、320 μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。依法測(cè)定。結(jié)果在10～320 μg/ml鹽酸二甲雙胍呈良好的線性關(guān)系（r=0.9999）。

2.2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，分別在室溫放置2、4、6、8、10 h后測(cè)定其峰面積，結(jié)果供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為0.43%。

2.2.5 回收率試驗(yàn) 稱(chēng)取已知含量的鹽酸二甲雙胍供試品適量 （約相當(dāng)于鹽酸二甲雙胍50 mg)，置于50 ml容量瓶中，分別精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備液適量（相當(dāng)于鹽酸二甲雙胍40、50、60 mg），加 2%甲醇適量，超聲 20 min 使溶解，定容，離心3000 r/min，5 min過(guò)濾，取續(xù)濾液1 ml置于10 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，依法測(cè)定，結(jié)果平均加樣回收率為（99.6±0.6）%，RSD 為 0.85%。

2.2.6 樣品含量測(cè)定 取本品20片，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量（約相當(dāng)于鹽酸二甲雙胍500 mg），置50 ml量瓶中，加甲醇適量，超聲20 min使溶解，定容，離心3000 r/min離心5 min過(guò)濾，吸取續(xù)濾液1 ml置于50 ml容量瓶中，加水釋至刻度，吸取20 μl進(jìn)樣，計(jì)算鹽酸二甲雙胍的含量。結(jié)果3種批號(hào)的鹽酸二甲雙胍含量分別為99.54、98.45、100.45%。

3 結(jié) 論

本文建立了利用HPLC測(cè)定復(fù)方西他列汀二甲雙胍緩釋片中磷酸西他列汀和鹽酸二甲雙胍含量的方法，方法學(xué)研究結(jié)果表明利用該法測(cè)定磷酸西他列汀和鹽酸二甲雙胍保留時(shí)間穩(wěn)定，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，方法精密度高，重現(xiàn)性好，回收率符合要求，是一種可靠的含量測(cè)定方法。適用于復(fù)方西他列汀二甲雙胍緩釋片質(zhì)量控制的檢測(cè)方法。

[1]Green BD，F(xiàn)latt PR，Bailey CJ.Dipeptidyl peptidase IV(DPP IV)inhibitors:A newly emerging drug class for the treatment of type 2 diabetes[J].Diab Vasc Dis Res，2006，3(3):159.

[2]Raz I，Chen Y，Wu M，et al.Efficacy and safety of sitagliptin added to ongoing metformin in therapy in patients with type 2 diabetes[J].Curr Med Res Opin，2008，24(2):537.