魯 兵，余萬桂 （長江大學醫(yī)學院，湖北 荊州434023）

吳國棟 （荊州市第二人民醫(yī)院消化內(nèi)科，湖北 荊州434000）

潰瘍性結(jié)腸炎 （UC）在我國屬于高發(fā)常見疾病，其發(fā)病原因仍然未明確。潰瘍性結(jié)腸炎動物模型的建立對研究疾病的發(fā)展進程、預防治療具有重要意義。一直以來潰瘍性結(jié)腸炎動物模型根據(jù)不同的研究需要采取了不同的制備方法［1-3］，對此，我們將其研究進展進行如下綜述。

1 化學造模法

1．1 乙酸造模法

乙酸造模法是根據(jù)化學刺激腸壁黏膜屏障產(chǎn)生炎癥機制，利用花生四烯酸代謝異常環(huán)節(jié)介導此反應［4］，由于大鼠模型的炎癥反應與人類的相似［5］，并且材料來源豐富，制備簡單，成功率高，故而該模型運用廣泛。Cetinkaya［6］將乙酸注入大鼠結(jié)腸后用生理鹽水給予沖洗2次，大鼠隨即出現(xiàn)腹瀉血便等結(jié)腸炎癥表現(xiàn)，但是癥狀只持續(xù)1周。因此乙酸制備出的大鼠UC模型在研究中具有局限性，目前該模型主要用于研究UC的發(fā)病機制和炎癥的自愈機制。該模型的研究局限性與其制備方法、模型特點有很大的關(guān)系，首先乙酸的刺激部位主要是結(jié)腸末端腸粘膜及血管，與人類發(fā)病機制有一定的區(qū)別；其次乙酸的刺激性小，大鼠模型的臨床癥狀不能長期持續(xù)，導致藥物療效的觀測不穩(wěn)定，大鼠自身自愈性與藥物療效很容易混淆，因而無法對藥物療效做出長期的穩(wěn)定性評價。

1．2 角叉菜膠造模法

紅海藻提取的硫酸多精損傷結(jié)腸上皮細胞結(jié)構(gòu)，增加腸壁黏膜的通透性，該模型主要適用于急性期盲腸炎癥病變的防治藥物的觀察和篩選，大鼠飲用3%角叉菜膠溶液出現(xiàn)UC癥狀的時間為2周后，盲腸、結(jié)腸、直腸于3周后肉眼可見針尖大小的潰瘍和出血點，隱窩膿腫、變形，黏膜潰瘍形成，黏膜和黏膜下層炎性細胞滲出在組織學可發(fā)現(xiàn)。但是該模型的缺陷是不能持久保持UC模型的臨床特點，因此需要反復造模，成本較高［7］。

1．3 葡聚糖硫酸鈉 （DSS）造模法

DSS的制備與巨噬細胞功能失調(diào)、腸道菌群失調(diào)和DSS的負電荷影響結(jié)腸上皮DNA合成、抑制上皮細胞增生、破壞腸黏膜屏障有關(guān)［8］，BALB／c小鼠自由飲用5%DSS溶液5d就可以制備出遠端結(jié)腸潰瘍的急性炎癥模型，其產(chǎn)生的臨床癥狀、病理切片表現(xiàn)，以及疾病的預后轉(zhuǎn)歸與人UC相似，廣泛用于篩選對UC有治療潛力的藥物研究。

1．4 過氧化亞硝酸鈉 （NaOONO2）造模法

Daniel等［9］在1993年成功地應用過氧化亞硝酸鈉誘導大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型，該方法利用氮氧化機制原理反映潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機制，由于其制作簡單，重復性好，制作成本低廉，在觀察調(diào)控一氧化氮及中藥復方抗氧化作用方面一直到今天還在沿用。

1．5 三硝基苯磺酸 （TNBS）造模法

大鼠克隆氏病模型于1984年由Morris等［10］用TNBS成功地制造出。鄭禮［11］認為一次性注入直腸100～150mg／kg劑量下引起的UC組織呈慢性炎癥變化，病程較長，與人類UC相似的結(jié)論是通過對不同劑量的TNBs引起的大鼠UC模型觀察得出的，此方法具有操作簡單、經(jīng)濟實用、造型時日短等特點，適用于對防治藥物的篩選和探究。

1．6 二硝基氯苯 （DNCB）造模法

DNcB做為半抗原與組織蛋白結(jié)合成完全抗原，激發(fā)機體產(chǎn)生E細胞介導的細胞免疫反應［12］。該模型最先用豚鼠由Bick等建立，其后Rabin等［13］對其進行了改進。DNCB模型可以反映外源性抗原和機體自身抗原誘發(fā)的典型的胃腸道遲發(fā)過敏反應，主要用于揭示UC局部遲發(fā)過敏反應的免疫調(diào)控的發(fā)病機理，但DNCB具有自愈性強的缺點。

2 免疫造模法

2．1 同種異體或異種異體結(jié)腸粘膜組織致敏法

將實驗大鼠的結(jié)腸粘膜組織制成勻漿并添加Frend佐劑，在其后1d和15d分別注射0．1～0．3ml到足墊內(nèi)，在23d后通過隨機抽樣，然后解剖實驗動物觀察結(jié)腸的病理改變，若不滿意需繼續(xù)注射1次，以便產(chǎn)生典型UC模型。該實驗的關(guān)鍵在于Frend佐劑的制造，特別是在研碎與乳化結(jié)核菌的方面。本實驗需要一定的技術(shù)及實驗設(shè)備，并且實驗周期長。但是實驗的結(jié)果接近臨床癥狀，且重復性好，是篩選抗?jié)冃越Y(jié)腸炎藥物的較好驗證實驗。

2．2 胎鼠結(jié)腸種植法

胎鼠結(jié)腸種植法［14-16］主要是借助細胞免疫反應制備出慢性炎癥的模型，在無菌的環(huán)境下獲取胎鼠結(jié)腸作為抗原，移植于同系成年鼠腎包膜下，引發(fā)宿主抗移植物反應。但是該法具有相當大的局限性，需要的周期長，技術(shù)要求高，得出的模型不一定能符合實驗要求。

2．3 大鼠結(jié)腸細菌菌株法

該法以反復刺激大鼠的免疫機制為主，制備出以大鼠正常菌群為抗原的腸混懸液進行結(jié)腸刺激，大鼠結(jié)腸壁表現(xiàn)出潰瘍或彌散性炎癥，同時出現(xiàn)細胞免疫功能降低和循環(huán)免疫復合物增多，該制備方法成功率高，產(chǎn)生的癥狀與臨床相似，但實驗周期長。

3 中醫(yī)證型造模法

3．1 精神刺激造模法

戴芳等［17］采取刺激大鼠打斗、禁食的方式，改變大鼠的情緒和行為，造模組大鼠情緒由穩(wěn)定變?yōu)橐着^而低落，行為狀態(tài)變?yōu)樯賱訁捠?，體質(zhì)量下降等肝郁脾虛表現(xiàn)。韓秋艷［18］則每天束綁大鼠的后肢以限制其活動，為期3周，用5%乙酸灌注大鼠結(jié)腸或用慢性夾尾激怒加高濃度大黃灌胃法。兩個實驗均成功制備了潰瘍性結(jié)腸炎肝郁脾虛證模型。

3．2 脾虛型動物模型

3．2．1 飲食不節(jié)復制的脾虛證動物模型 王曉明等［19］根據(jù)飲食不節(jié)、疲勞過度導致脾氣虛證的理論，給予實驗大鼠大量喂食豬油、甘藍，結(jié)合大鼠在滾帶式跑步機上快跑，觀察18d后，大鼠出現(xiàn)體質(zhì)量下降、倦怠懶動，大便不正常等脾虛證型。

3．2．2 藥物復制的脾虛模型 王曉潔等［20］選 Wistar大鼠，采用不禁水禁食的方法，灌服番瀉葉浸劑后35h，以0．5%肥皂水2ml／只灌腸沖洗，該法重復2d進行病理切片觀察，得到潰瘍模型。王玉良等［21］應用同樣的方法，灌腸之后20min后肛門注入5%冰乙酸0．11ml，3d后出現(xiàn)脾虛癥狀，主要表現(xiàn)為糞便溏爛、血便以及厭食等消化道癥狀，結(jié)腸切片顯示符合潰瘍性結(jié)腸炎的病理改變。

4 復合造模法

4．1 化學法及束縛法復合造模

谷松等［22］的實驗對象是雄性Wistar大白鼠，開始捆綁大白鼠的四肢使其1周內(nèi)不能活動，在實驗前24h只給大白鼠喂水而不給其喂食物。通過肛門將NBS／乙醇液注0．125ml射入大白鼠腸內(nèi)，實驗進行3周后處死實驗鼠。實驗過程各階段癥狀如下，UC造模成功后的第2天出現(xiàn)血便、黏液便、稀便的癥狀，并且有脫毛、消瘦、飲食減少及拖尾癥狀；第3天可在腸管黏膜觀察到糜爛面及壞死組織，并觀察到水腫和黏膜充血的情況；UC造模成功第3周時，觀察到大白鼠腸壁變厚、變狹小，并觀察到多處水腫、黏膜充血及潰爛。UC造模成功后第3天的病理學觀察可以看到，大量炎性細胞存在于黏膜下層，并可見水腫、潰瘍，第3周的病理學觀察可以見到大白鼠腸管出現(xiàn)慢性炎癥特征，結(jié)腸黏膜水腫現(xiàn)象嚴重并可觀察到大量炎性細胞。

4．2 限食限動加醋酸結(jié)腸內(nèi)注射法

為制造出肝郁脾虛型的潰瘍結(jié)腸炎模型，顧立剛等［23］采取限制大鼠飲食、活動的辦法，持續(xù)3周內(nèi)每天束縛大鼠8h，結(jié)腸注入5%醋酸1ml，誘發(fā)結(jié)腸潰瘍。實驗顯示大鼠模型呈現(xiàn)體質(zhì)量減輕，大便變稀，抵抗力低下，結(jié)腸病理切片黏膜充血水腫潰爛，甚至出膿穿孔，所有表現(xiàn)均符合人類肝郁脾虛型結(jié)腸炎的特點。

4．3 免疫法加醋酸腸內(nèi)注射造模法

吳玉泓等［24］在總結(jié)了三硝基苯磺酸模型 （TNBS）、葡聚糖硫酸鈉模型 （DSS）、唑酮 （OXZ）制備的有關(guān)潰瘍性結(jié)腸炎 （UC）實驗模型的缺點后認為，借鑒徐淑云［25］的方法，改進結(jié)腸黏膜組織致敏法加乙酸局部刺激法，制備的潰瘍性結(jié)腸炎模型才有可能與人類自然發(fā)生的UC的病變特點相似，從而更好的評價藥物治療效果。他們選取30只Wistar大鼠隨機分為正常對照組、模型對照組、用藥組，用結(jié)腸黏膜組織致敏法加乙酸局部刺激法建立大鼠復合潰瘍性結(jié)腸炎模型，首先選用SPF級Wistar大鼠造模，取足跖內(nèi)注射抗原2mg，并且在造模的第1天、第2周再次給大鼠足跖內(nèi)注射抗原2mg，第3周以及第4周給大鼠足跖內(nèi)注射抗原2mg的同時在肛門內(nèi)注入5%醋酸1ml。2周后用生化法檢測大鼠結(jié)腸和血清中MDA、SOD、GSH-PX、NO、TNOS，iNOS值、IL-4、TNF-α含量以及IFN-γ含量，觀察大鼠結(jié)腸變化。大鼠黏膜層出現(xiàn)不同程度充血、糜爛、水腫及出血，淺小潰瘍形成，潰瘍面有滲出性壞死層，潰瘍的周圍腺體擴張，黏膜下固有層局部水腫、充血，腺上皮細胞輕度增生，在2周后可發(fā)現(xiàn)。上述變化顯示改進制備方法后建立的大鼠潰瘍性結(jié)腸炎 （UC）的實驗模型，可以較好的模擬人類UC病變的慢性活動性特點，完全可以運用于臨床藥物評價。

5 小 結(jié)

5．1 對建立潰瘍性結(jié)腸炎動物模型的方法進行對比

隨著實驗技術(shù)的發(fā)展，潰瘍性結(jié)腸炎的模型制備方法越來越多［26-27］，乙酸、三硝基苯磺酸（TNBS），葡聚糖硫酸鈉 （DSS）、唑酮 （OXZ）等都可用于模型的制備，但是從長遠的研究中我們逐漸發(fā)現(xiàn)，這些材料誘導的動物模型逐漸呈現(xiàn)出不足，如果在制備的過程中技術(shù)不穩(wěn)定，有可能制備出的是克羅恩病而不是潰瘍性結(jié)腸炎模型，即使UC模型制備是成功的，該模型也僅僅是局限于潰瘍性結(jié)腸炎的免疫學病理研究；DSS模型的整個模型制備過程需要不斷的給藥進行刺激，否則大鼠模型的癥狀會消失，無法對治療藥物的療效進行區(qū)別評價。OXZ模型與DSS模型相似，具有自我恢復的能力，而乙酸制備的急性炎癥模型，受外界誘導因素的影響大，乙酸誘導的癥狀不能長期持續(xù)，兩者都不適合進行藥物療效的觀測。而對于其他方法誘導制備的大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的模型仍然需要在使用和觀測中不斷總結(jié)探索，希望能在長期的實踐中區(qū)分出制備方法的優(yōu)劣，創(chuàng)建出的模型能夠與人類的潰瘍性結(jié)腸炎臨床癥狀、疾病特點接近，更好的為臨床藥物研究、疾病研究奠定基礎(chǔ)。

5．2 建立潰瘍性結(jié)腸炎動物模型的中醫(yī)觀點

中醫(yī)傳統(tǒng)醫(yī)學認為潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)生與情志相關(guān)、肝郁氣結(jié)有關(guān)，脾失健運是主要的病機，因此在利用大鼠造模時要注意利用情志因素作為疾病誘發(fā)的因素。

縱觀以上的多種造模方法，筆者認為免疫復合物加乙酸局部灌注、束縛刺激以及飲食失節(jié)法制備出的模型與人類發(fā)病機制機理、臨床癥狀特點較為接近，因此臨床觀察的藥物療效以及疾病發(fā)展趨勢也更為穩(wěn)定可信。

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