劉 靜 楊 燕 于 玲 吳喜梅 許觀照 李欣迎 宋 燕 胥玉梅 陶國振孫 林 高愛萍 張 艷 王魯沂

山東省計劃生育科研所，山東省優(yōu)生技術(shù)重點實驗室(濟南，250002)

喹喃克林又稱阿的平，是吖啶類誘導劑，能促使組織成纖維細胞增生，形成肉芽組織并纖維化。20世紀60年代末，Zipper［1］用喹喃克林懸液封堵大鼠輸卵管成功并相繼發(fā)明了喹喃克林藥丸放入子宮腔，融化后液體流入輸卵管，使輸卵管管口或管腔封堵的女性非手術(shù)絕育法(QS)。近些年來國際上已有10萬多婦女接受QS證明是安全與可靠的。10多年前美國食品與藥物管理局批準QS開展臨床試驗，Ⅰ期臨床研究表明女性肝功、腎功等實驗室檢查在正常范圍內(nèi)，宮頸細胞學涂片無有害的細胞變化，是安全有效的［2］。喹喃克林封堵輸卵管的作用已經(jīng)被公認，但絕育效果和成功率與手術(shù)方法、給藥方式和藥物載體等因素有著密切的關(guān)系。1997年陸為群等［3］曾開展過喹喃克林和植物多糖混懸液注入大鼠子宮的病理學研究。本所從1986年至今先后進行過多種藥物和不同方法的輸卵管絕育術(shù)臨床研究和應用。通過觀察對比認為，宮腔鏡直視下導管插管注藥手術(shù)方法安全簡便、效果可靠。本研究旨在觀察單獨一次性使用喹喃克林幾丁糖凝膠堵塞大鼠子宮腔的效果，以及喹喃克林幾丁糖凝膠注入大鼠子宮后，藥物附著部位黏膜組織的變化，子宮腔內(nèi)組織纖維化和管腔梗阻狀況，藥物對局部和臨近組織器官的影響，為宮腔鏡下輸卵管絕育術(shù)推注劑的研究提供動物觀察依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與材料

1.1.1 試劑與儀器 10%、20%、35%的喹喃克林幾丁糖凝膠試劑由上海其勝生物有限公司提供復方苯酚糊(上海信誼藥廠生產(chǎn)，山東省計劃生育科學技術(shù)研究所提供);RM2135切片機、DM/LS顯微鏡(德國徠卡儀器有限公司生產(chǎn));YB-6LF生物組織石蠟包埋機(湖北省孝感市亞光醫(yī)用電子技術(shù)有限公司生產(chǎn))。

1.1.2 實驗動物及分組 80只SPF級Wistar雌性大鼠購自山東省魯抗醫(yī)藥股份有限公司動物中心。體重0.18～0.22kg。大鼠按體重隨機分為5個試驗組:喹喃克林幾丁糖凝膠35%組19只，20%組15只，10%組15只;陽性對照復方苯酚糊劑組15只，假手術(shù)組16只。

1.2 造模與給藥

0.6 %戊巴比妥(0.03g/kg體重)腹腔注射麻醉。剪去下腹正中被毛，常規(guī)消毒，于下腹正中切口3cm打開腹腔，暴露兩側(cè)子宮和輸卵管。用4號針頭在一側(cè)子宮靠近陰道端朝向輸卵管方向進針并推注生理鹽水，確定該側(cè)子宮及輸卵管充盈并通暢后，將藥劑注滿該側(cè)子宮腔，每側(cè)約0.4ml，同法注入對側(cè)子宮［4］。假手術(shù)組下腹部正中切口僅暴露子宮，不做處理，即關(guān)閉腹腔。術(shù)后注射青霉素40 000U/kg體重，每日1次，連續(xù)3 d預防感染。手術(shù)成功后實際動物數(shù)為71只:其中喹喃克林幾丁糖凝膠35%組16只，20%組14只，10%組13只，對照組13只，假手術(shù)組15只。

1.3 檢測指標

1.3.1 一般癥狀觀察 試驗期間每天觀察動物外觀體征、行為活動、腺體分泌、糞便性狀等一般情況，記錄異常反應和中毒癥狀。

1.3.2 顯微檢查 每組在術(shù)后第2、4周各處死4只，解剖后暴露動物子宮及周圍組織，肉眼觀察器官形態(tài)，有無充血、水腫、滲出、粘連或壞死后，6號平頭針頭從陰道向子宮注稀釋美蘭液，檢查管腔通暢情況。取出子宮，肉眼觀察管腔橫斷面管腔阻塞情況，送組織病理學檢查［5］。染色方法為蘇木素伊紅染色。余下動物繼續(xù)觀察至6周，觀察方法及指標同前。

2 結(jié)果

2.1 實驗動物情況

試驗期間動物一般狀態(tài)良好，活動自如，進食、飲水正常，未出現(xiàn)明顯不良反應。

2.2 解剖觀察

2.2.1 子宮盆腔觀察 假手術(shù)組手術(shù)后2、4、6周子宮及鄰近組織器官解剖學觀察均正常，子宮壁結(jié)構(gòu)完整，宮腔無堵塞，無膿性分泌物。對照組術(shù)后2周子宮與周圍組織、腸管和腹后壁粘連嚴重，宮體充血水腫嚴重;術(shù)后4周子宮僵硬無彈性，盆腔粘連嚴重;術(shù)后6周子宮萎縮僵硬與周圍組織、腸管和腹后壁粘連固定。喹喃克林幾丁糖凝膠組術(shù)后2、4、6周子宮表面光滑，血運正常，肌壁彈性正常，盆腔無滲出及粘連。

2.2.2 管腔阻塞情況 假手術(shù)組術(shù)后2、4、6周管腔無阻塞和縮小;對照組術(shù)后2周管腔完全阻塞。35%糖凝膠組術(shù)后2周宮腔基本消失，術(shù)后4周管腔完全阻塞;20%和10%糖凝膠組術(shù)后2、4、6周管腔明顯縮小并間斷梗阻，部分輸卵管局部積水。假手術(shù)組手術(shù)2、4、6周后通液順暢，其余各組各周均顯示不通。

2.3 病理切片

2.3.1 黏膜及管腔情況 術(shù)后2、4、6周假手術(shù)組子宮內(nèi)膜無粘連，內(nèi)膜上皮無變性壞死等病理改變(圖1-A);對照組宮腔完全被肉芽組織堵塞，肉芽組織毛細血管、成纖維細胞數(shù)量多，基質(zhì)疏松，子宮內(nèi)膜上皮消失(圖1-B)。35%糖凝膠組術(shù)后2周子宮壁結(jié)構(gòu)完整，宮腔基本消失無粘連;內(nèi)膜明顯增厚，內(nèi)膜上皮局部壞死、脫落;術(shù)后4周宮腔完全被空泡化的基質(zhì)細胞和成纖維細胞堵塞，內(nèi)膜明顯增厚，內(nèi)膜上皮消失(圖1-C);術(shù)后6周宮腔完全被肉芽組織堵塞。20%喹喃克林幾丁糖凝膠組術(shù)后2周宮腔縮小，內(nèi)膜增厚，內(nèi)膜上皮減少呈低柱狀。2.3.2固有層及肌層情況 術(shù)后2、4、6周假手術(shù)組固有層基質(zhì)細胞排列致密，腺體無擴張，腺腔內(nèi)無炎細胞積聚;對照組固有層腺體萎縮數(shù)量明顯減少。35%喹喃克林幾丁糖凝膠組術(shù)后2周固有層基質(zhì)疏松水腫，基質(zhì)細胞排列稀疏，腺體明顯減少，成纖維細胞增多;術(shù)后4周固有層基質(zhì)細胞及成纖維細胞彌漫性空泡化，腺體消失;術(shù)后6周固有層肉芽組織中見大量新生毛細血管和成纖維細胞，腺體消失。20%喹喃克林幾丁糖凝膠組術(shù)后2周，固有層基質(zhì)疏松，腺體減少;手術(shù)后4、6周與術(shù)后2周比較，固有層成纖維細胞增多。10% 喹喃克林幾丁糖凝膠組手術(shù)后2、4、6周組織學改變同20%喹喃克林幾丁糖凝膠組。各組肌層外膜均未見明顯異常。

2.4 子宮腔測量

對放大40倍病理切片宮腔最大直徑進行測量，35%喹喃克林凝膠組和對照組梗阻完全，而假手術(shù)組術(shù)后2、4、6周的直徑分別為1.18mm、1.24mm和1.26mm。

3 討論

喹喃克林曾長期作為抗瘧疾藥物大量應用于臨床，也用于治療紅斑性狼瘡和控制胸、腹手術(shù)后的惡性滲出以及治療賈第蟲病、絳蟲病等，而用于輸卵管絕育術(shù)也已經(jīng)有半個世紀的歷史。劉光華等［6］曾對喹喃克林絕育術(shù)進行隨訪研究，結(jié)果該法避孕效果明顯，避孕失敗的主要原因是手術(shù)對象術(shù)后未按照要求保持臀高體位、復查并獲得絕育成功結(jié)果前沒有堅持避孕和第二次上藥。我國自1970年開始在女性非手術(shù)絕育術(shù)中使用復方苯酚糊劑(由苯酚、喹喃克林和膽影酸各1/3組成)做為粘堵劑，在被動物試驗和臨床觀察證明方法安全、有效、簡便的同時深受群眾歡迎。粘堵劑“復方苯酚糊”被列入藥物學手冊，獲得上海市藥物準字批號［7］。但由于20世紀90年代我國普遍使用輸卵管導管盲插技術(shù)，插管和注藥都不準確，加之該劑型中苯酚造成組織一過性化學性炎性刺激，使部分注藥量多的受術(shù)者術(shù)后出現(xiàn)不同程度的輸卵管周圍組織炎性反應，甚至盆腔粘連等副反應和并發(fā)癥。本研究也發(fā)現(xiàn)復方苯酚糊組子宮及鄰近組織器官炎性反應明顯，而喹喃克林幾丁糖凝膠各組子宮及鄰近組織器官無明顯炎性反應。本研究所用天然生物材料醫(yī)用幾丁糖凝膠具有良好的粘附、緩釋和載體性能，研究結(jié)果證明含35%的喹喃克林幾丁糖凝膠完全梗阻所需時間雖較復方苯酚糊略長，但阻塞效果相同，且子宮及盆腔組織器官無明顯化學性炎性反應，證明了大鼠宮腔內(nèi)單獨一次性使用喹喃克林阻塞效果是安全可靠的。單獨一次性注入同等量的35%喹喃克林幾丁糖凝膠(含喹喃克林10.5mg)即會使輸卵管腔局部完全梗阻，達到絕育目的。

當前國際上女性絕育術(shù)的研究和應用已經(jīng)進入可視微創(chuàng)歷史時期，宮腔鏡直視下通過導管向輸卵管注入粘堵劑的方法具有可視可控、一次注藥微量精確、成功率高、安全無創(chuàng)等優(yōu)點，能夠解決群眾畏懼開刀和剖宮產(chǎn)率居高帶來的腹部小切口絕育術(shù)風險問題，是最容易被廣大群眾接受也很適合在基層計劃生育服務機構(gòu)開展的絕育方法。喹喃克林幾丁糖凝膠粘堵劑的研究將會推動宮腔鏡下非手術(shù)絕育術(shù)的進展和應用。

1 齋泊，丘吉羅.25年來在智利開展喹喃克林絕育的實踐:2592例回顧［J］，國際婦產(chǎn)學科雜志，2003，83(增刊2):823-829.

2 李普斯.FDA(美國食品與藥品管理局)的QSI期臨床研究［J］，國際婦產(chǎn)科學雜志，2003，83(增刊2):845-849.

3 陸衛(wèi)群，潘欽瑞，朱江，等.大鼠子宮帶控釋法注入喹喃克林封堵輸卵管的研究［J］.遵義醫(yī)學院學報，1997，5(20):33-35.

4 孫麗珍，王聯(lián)歡.婦康栓對大鼠輸卵管炎性阻塞作用的實驗研究［J］.中國中醫(yī)藥科技，1999，6(2):102-103.

5 王靜，楊軍，劉超.盆腔炎顆粒對大鼠慢性子宮內(nèi)膜炎療效的研究［J］.中國實驗方劑學雜志，2006，1(12):56-58.

6 劉光華，駱程，王智慧，等.743例喹喃克林栓劑非手術(shù)女性絕育術(shù)(QS)可接受性、有效性和安全性的隨訪調(diào)查［J］，中國醫(yī)療前沿，2009，2(4):103.

7 陳新謙，金有豫，湯光，等.新編藥物學［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2003:607.