高君石

（江蘇省常熟市海虞動(dòng)物防疫站，江蘇常熟 215500）

豬巴氏桿菌病的診斷和治療

高君石

（江蘇省常熟市海虞動(dòng)物防疫站，江蘇常熟 215500）

豬巴氏桿菌病也稱(chēng)豬肺疫，主要由多殺性巴氏桿菌引起，是一種急性、敗血性傳染病。病豬常表現(xiàn)為咽喉部急性腫脹或纖維素性胸膜肺炎癥狀，多因飼養(yǎng)管理不當(dāng)造成。通過(guò)發(fā)病情況、臨床癥狀、病料涂片染色、鏡檢、細(xì)菌分離培養(yǎng)、生化實(shí)驗(yàn)或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等結(jié)果而確診。本文通過(guò)江蘇省常熟市某豬場(chǎng)的實(shí)際案例，介紹了該病的具體診斷方法及相關(guān)治療手段。

豬巴氏桿菌；細(xì)菌培養(yǎng)；藥敏試驗(yàn)；治療

豬巴氏桿菌病主要由多殺性巴氏桿菌 （Pastenrella multocida） 而引起，是一種急性、敗血性傳染病，也稱(chēng)豬肺疫或豬出血性敗血癥。該病的主要特征為敗血癥，咽喉部急性腫脹或表現(xiàn)為纖維素性胸膜肺炎癥狀。豬巴氏桿菌病主要由B型菌株引起，呈散發(fā)性發(fā)生，多因飼養(yǎng)管理不當(dāng)，環(huán)境寄生蟲(chóng)和其他細(xì)菌誘因等引發(fā)復(fù)合感染而發(fā)病，我國(guó)將其列為二類(lèi)動(dòng)物疫病。

多殺性巴氏桿菌為細(xì)小球桿菌，寬0.25～0.4 μm，長(zhǎng)0.5～1.5 μm。單個(gè)存在，有時(shí)成雙排列。革蘭氏染色為陰性。本菌最適生長(zhǎng)溫度為37℃，pH 7.2～7.4。添加血液或血清時(shí)，則生長(zhǎng)良好。在血液瓊脂平板上培養(yǎng)，形成濕潤(rùn)、光滑、邊緣整齊的圓形露珠樣灰白色小菌落，有熒光，不溶血。在肉湯中培養(yǎng)呈均勻一致的中等度渾濁，有黏性沉淀物，培養(yǎng)久時(shí)，表面形成菌膜。在麥康凱和含有膽鹽的培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)。本菌可分解葡萄糖、果糖、蔗糖、甘露醇和半乳糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。對(duì)乳糖、鼠李糖、楊苷、菊糖、肌醇不發(fā)酵[1]。

一般情況下，不同畜禽間不容易相互感染多殺性巴氏桿菌。健康豬上呼吸道中常帶有此菌，但多半為弱毒或無(wú)毒的類(lèi)型。由于豬群擁擠、圈舍潮濕、衛(wèi)生條件差、通風(fēng)不良、寒冷、悶熱、陰雨連綿、氣候驟變、長(zhǎng)期營(yíng)養(yǎng)不良、處于半饑餓、寄生蟲(chóng)病、長(zhǎng)途運(yùn)輸?shù)炔涣家蛩?，降低了豬體的抵抗力，或發(fā)生某種傳染病時(shí)，病菌乘機(jī)侵入機(jī)體內(nèi)繁殖，而增強(qiáng)毒力，引起發(fā)病。這種以?xún)?nèi)源性感染為主的豬肺疫，成散發(fā)性發(fā)生。在自然條件下很少能傳染另外的健康豬。當(dāng)然，由于細(xì)菌通過(guò)發(fā)病豬體增強(qiáng)毒力后，仍可傳染另外的健康豬，因此，不能忽視健康豬在傳染來(lái)源上的作用。本病大多發(fā)生于中、小豬，成年豬患病較少。

江蘇省常熟市某豬場(chǎng)一棟育肥舍豬只精神沉郁，厭食，有高熱等現(xiàn)象，送檢2頭病重豬只至獸醫(yī)工作站實(shí)驗(yàn)室檢查，經(jīng)發(fā)病情況、臨床癥狀、病料的涂片染色、鏡檢、細(xì)菌的分離培養(yǎng)、生化實(shí)驗(yàn)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，診斷為豬巴氏桿菌病。通過(guò)藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，病菌對(duì)氟苯尼考、恩諾沙星、環(huán)丙沙星敏感，對(duì)多數(shù)藥物耐藥。選擇高敏藥物治療病豬，病情很快得到控制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料

將兩頭送檢病豬處死，剖檢，無(wú)菌采取血液、肺臟、肝臟等作為病原分離材料，根據(jù)需要剪取適當(dāng)大小的組織塊，盛于無(wú)菌容器內(nèi)，在4℃條件下暫時(shí)存放，備用。

1.1.2 培養(yǎng)基

改良馬丁氏瓊脂（牛肉湯500 mL，改良豬胃消化液500mL，氯化納2.5 g，瓊脂20 g，pH 7.4～7.6，滅菌30～40分鐘）。麥康凱瓊脂（蛋白胨17 g，豬膽鹽5 g，氯化鈉5 g，瓊脂17 g，乳糖10 g，蒸餾水100 mL，0.01%結(jié)晶紫水溶液10 mL，0.5%中性紅水溶液5 mL，pH 7.3～7.4），購(gòu)于杭州微生物試劑有限公司。馬丁氏肉湯（牛肉湯500 mL，豬胃消化液500 mL，氯化鈉2.5 g，pH 7.2～7.6）。鮮血瓊脂（每100 mL改良馬丁氏瓊脂加入家兔鮮血10 mL）。

1.1.3 革蘭氏染色液

草酸銨結(jié)晶紫染液，A液：結(jié)晶紫2 g，95%乙醇20 mL；B液：盧戈碘液（碘片1 g，碘化鉀2 g，蒸餾水300 mL，先將碘化鉀溶解于少量水中，再將碘片溶碎在碘化鉀溶液中，待碘全部溶解后，加足水份即成）；95%的乙醇溶液；番紅復(fù)染液（番紅2.5 g，乙醇100 mL，取上述配好的番紅乙醇液10 mL與80 mL蒸餾水混勻即成）[2]。

1.1.4 生化發(fā)酵管

包括葡萄糖、半乳糖、蔗糖、甘露醇等發(fā)酵用的小試管，購(gòu)于北京索萊寶科技有限公司。

1.1.5 藥敏紙片

包括阿莫西林、鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星等紙片，購(gòu)于哈爾濱華通醫(yī)療設(shè)備公司。

1.1.6 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

20～25 g健康小白鼠4只。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌的分離

先用燒灼滅菌的手術(shù)刀片燒烙組織表面，然后在燒烙處用剛才的手術(shù)刀片切開(kāi)組織，用滅菌的接種環(huán)在切開(kāi)組織內(nèi)挑取部分組織，分別劃線接種于改良馬丁氏瓊脂平皿、麥康凱瓊脂平皿、鮮血瓊脂平皿；組織制成懸液接種于馬丁氏肉湯小管培養(yǎng)基。采用連續(xù)劃線法：右手持接種環(huán)，通過(guò)火焰滅菌，冷卻后，在切開(kāi)的組織內(nèi)稍用力接觸，左手持起培養(yǎng)基平板，先將環(huán)上組織涂于瓊脂平板一角，然后用接種環(huán)自該部位開(kāi)始，向左向右并逐漸向下移動(dòng)，連續(xù)劃成若干條分散的平行線，劃線完畢后平皿倒置，36～37℃培養(yǎng)18～24小時(shí)。

1.2.2 細(xì)菌的純培養(yǎng)

取出上述接種的鮮血瓊脂平皿，選擇典型的灰白色菌落做純培養(yǎng)。用燒灼滅菌的接種環(huán)小心挑取單個(gè)菌落，移種于鮮血瓊脂平板；用接種環(huán)先將培養(yǎng)物涂布在平板第一區(qū)并作數(shù)次劃線，再在二、三、四區(qū)依次用接種環(huán)劃線；每劃一個(gè)區(qū)域，應(yīng)將接種環(huán)燒灼一次，待冷卻后再劃下一個(gè)區(qū)域，每一區(qū)域的劃線應(yīng)接觸上一區(qū)域的接種線2～3次，使菌量逐漸減少，以形成單個(gè)菌落；劃線完畢后倒置，37℃恒溫需氧培養(yǎng)18～24小時(shí)后，于4℃條件下存放。

1.2.3 革蘭氏染色鏡檢

用接種環(huán)挑取一環(huán)生理鹽水于潔凈玻片上，再用接種環(huán)挑取少量純培養(yǎng)的細(xì)菌于玻片上的生理鹽水混合，并均勻涂布于玻片上，自然干燥用火焰固定；在玻片上滴加草酸銨結(jié)晶紫染色液,作用1～3分鐘，水洗；加盧戈碘液于玻片上媒染，作用1分鐘，水洗；再加95%的酒精脫色，作用15～30秒，水洗；加番紅復(fù)染液復(fù)染1分鐘，水洗，自然干燥后鏡檢[2]。

1.2.4 生化實(shí)驗(yàn)

進(jìn)行糖（苷、醇）類(lèi)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果判定方法如下：無(wú)菌操作，用接種針取純培養(yǎng)的待檢菌接種于各糖類(lèi)微量發(fā)酵管，倒置37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)18～24小時(shí)后觀察結(jié)果。如細(xì)菌能分解此種糖類(lèi)產(chǎn)酸，則指示劑呈酸性變化，發(fā)酵管中顏色發(fā)生改變；不分解此種糖類(lèi)，則無(wú)顏色變化；產(chǎn)氣可使倒置的小管內(nèi)出現(xiàn)氣泡。

1.2.5 藥敏實(shí)驗(yàn)

將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種待菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸取瓊脂中的水分，溶解后不斷地向紙片周?chē)鷧^(qū)域擴(kuò)散，形成遞減的濃度梯度，在紙片周?chē)志鷿舛确秶鷥?nèi)細(xì)菌生長(zhǎng)被抑制，從而產(chǎn)生透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映檢測(cè)菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感程度[3]。

具體操作與結(jié)果判定方法如下：①于純培養(yǎng)平皿上，挑取單個(gè)菌落均勻涂布于鮮血瓊脂平板內(nèi)；②用無(wú)菌小鑷子夾取各種藥敏紙片，平貼于瓊脂表面，各距離要相等，每張紙片的間距不小于24 mm，紙片的中心距平板的邊緣不小于15 mm，然后倒置于37℃培養(yǎng)24小時(shí)；③平板取出后，仔細(xì)觀察藥敏紙片周?chē)袩o(wú)抑菌圈形成，根據(jù)抑菌圈直徑的大小可判定菌株的各藥敏紙片的敏感性。

1.2.6 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

將病料研磨成糊狀，加10倍滅菌生理鹽水稀釋成懸液，用此懸液皮下注射3只小白鼠，每只0.2 mL，并觀察結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌分離結(jié)果

培養(yǎng)18～24小時(shí)后，改良馬丁氏瓊脂平皿生長(zhǎng)純粹的培養(yǎng)物，有圓形、灰白色、濕潤(rùn)的露珠狀菌落。馬丁肉湯培養(yǎng)物生長(zhǎng)開(kāi)始輕度混濁，4～6小時(shí)后液體清亮，管底出現(xiàn)粘稠沉淀，震搖后不分散，表面形成菌環(huán)。鮮血瓊脂平皿上長(zhǎng)出單個(gè)菌落，菌落周?chē)蝗苎?，肉眼觀察為光滑圓整、半透明、灰白色。麥康凱瓊脂平皿上不生長(zhǎng)。

2.2 革蘭氏鏡檢結(jié)果

鏡檢看見(jiàn)兩端鈍圓濃染的革蘭氏陰性球桿狀菌，初步確定為巴氏桿菌。

2.3 糖 （苷、醇）類(lèi)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3個(gè)平行實(shí)驗(yàn)的結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4 藥敏結(jié)果

藥敏結(jié)果見(jiàn)表2。

2.5 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果

接種的3只小白鼠均在24～48小時(shí)內(nèi)死亡，對(duì)照小白鼠在2～3天內(nèi)無(wú)

表1 糖 （苷、醇）類(lèi)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 藥敏結(jié)果

明顯變化，剖檢取3只死亡小白鼠的肝組織分別做涂片，按上述方法進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢下發(fā)現(xiàn)大量?jī)啥蒜g圓革蘭氏陰性的細(xì)小球桿菌。

3 診斷

根據(jù)流行病學(xué)、臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室診斷等綜合分析，確診為豬巴氏桿菌病。

4 治療

隔離發(fā)病豬只，進(jìn)行專(zhuān)人飼養(yǎng)，全場(chǎng)用10%的石灰乳或3%的氫氧化鈉進(jìn)行消毒。

對(duì)發(fā)病豬采用高敏藥物，選用氟苯尼考注射液或恩諾沙星注射液進(jìn)行治療。部分病豬肌肉注射氟苯尼考注射液，按每公斤體重10～20 mg，隔48小時(shí)一次；另一部分肌肉注射恩諾沙星注射液，按每公斤體重2.5 mg，每日1～2次。對(duì)少數(shù)高熱病豬肌肉注射10%安乃近注射液，每次每頭5～10mL。

在未發(fā)病豬群的飼料中添加環(huán)丙沙星（每50 kg水中添加30 g，每日兩次）、氟苯尼考（每1 000 kg飼料中添加200～300 g，每日兩次）等藥物混飲、混飼。

加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，連續(xù)用藥，對(duì)環(huán)境差的育肥豬舍進(jìn)行整頓，注意保溫與通風(fēng)，增強(qiáng)豬體抵抗力。

三周后育肥豬舍病情已基本穩(wěn)定，沒(méi)有新的病例發(fā)生，大部分豬的精神與進(jìn)食恢復(fù)正常，少數(shù)病豬仍有慢性呼吸道感染癥狀。隨后進(jìn)行全群免疫，皮下注射豬肺疫氫氧化鋁菌苗（5 mL/頭）。直至所有育肥豬成熟上市，該場(chǎng)未發(fā)生相同病例。

5 分析

由于巴氏桿菌為條件性致病菌，所以豬群擁擠、衛(wèi)生條件差、通風(fēng)不良、寒冷、氣溫驟變等因素都可導(dǎo)致豬群機(jī)體抵抗力下降，病原菌侵入機(jī)體幾率加大。此次發(fā)病可能是一棟育肥豬舍環(huán)境簡(jiǎn)陋，導(dǎo)致豬群抵抗力下降而傳染給另外的豬群。

對(duì)于此病豬場(chǎng)應(yīng)及早發(fā)現(xiàn)，及早治療，以免引起繼發(fā)感染，引發(fā)其他呼吸道疾病，造成較大的經(jīng)濟(jì)損失[4]。

治療豬肺疫的藥物常?；ㄙM(fèi)很高，且效果不佳。因而預(yù)防本病尤為重要，應(yīng)從加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，改善飼養(yǎng)環(huán)境和減少細(xì)菌傳播等方面入手。主要有以下幾點(diǎn)：做好早期斷奶和隔離；做好圈舍消毒和清潔衛(wèi)生工作，可選用燒堿、生石灰、百毒殺等消毒藥物，消除降低豬抵抗力的因素，防止疾病發(fā)生；加強(qiáng)場(chǎng)內(nèi)人員管理，各個(gè)舍的飼養(yǎng)員不準(zhǔn)互串崗位，獸醫(yī)人員分崗位管理；盡量減少混群和分群及豬群的密度；病死后豬的尸體消毒后妥善處理；豬場(chǎng)不應(yīng)從外地盲目引進(jìn)生豬，對(duì)引進(jìn)的生豬應(yīng)進(jìn)行7～15天的隔離觀察，待穩(wěn)定后要及時(shí)進(jìn)行豬肺疫單苗的免疫。

每年春秋兩季定期用豬肺疫疫苗進(jìn)行免疫接種。方法有三：一是用豬肺疫氫氧化鋁疫苗5 mL/頭進(jìn)行皮下注射，14天后產(chǎn)生免疫力，免疫期為6個(gè)月，半月內(nèi)禁用抗生素；二是口服豬肺疫弱毒凍干菌苗，7天后產(chǎn)生免疫力，免疫期為6個(gè)月，1周內(nèi)禁用抗生素；三是注射豬肺疫免疫血清，使用預(yù)防注射量，即仔豬20mL/頭，中豬30 mL/頭，大豬40 mL/頭[4]。

本次試驗(yàn)中藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，巴氏桿菌對(duì)阿莫西林、青霉素、復(fù)方新諾名、鏈霉素、卡那霉素、四環(huán)素低度敏感，對(duì)恩諾沙星、環(huán)丙沙星、氟苯尼考高度敏感。通過(guò)藥物試驗(yàn)篩選經(jīng)濟(jì)、療效好、高敏的藥物進(jìn)行治療，既可以取得良好的治療效果，又可為該病的治療提供參考依據(jù)。

[1]趙占民.動(dòng)物傳染病學(xué).北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)科技出版社，1996:193-196

[2]孫彬,徐益斌,徐連均.雛雞沙門(mén)氏菌的分離、鑒定以及藥敏試驗(yàn).北京農(nóng)業(yè),2008, 30:32-34.

[3]李沂軒.陰道加德納菌與細(xì)菌性陰道病相關(guān)性研究:[碩士論文].天津:天津醫(yī)科大學(xué),2006.

[4]陶春中,霍文明.豬肺疫的診斷與治療.動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué),2005,22(1): 52-53.

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2013-01-23