肖建京，豐洪平，豐衛(wèi)忠，姚仙嶺，管圣浩

（1 .淳安縣繭絲綢總公司，杭州 311700；2 .淳安縣汾口林場，杭州 311719）

淳安縣新型桑葉病害及防控技術(shù)研究初報(bào)

肖建京1，豐洪平1，豐衛(wèi)忠2，姚仙嶺1，管圣浩1

（1 .淳安縣繭絲綢總公司，杭州 311700；2 .淳安縣汾口林場，杭州 311719）

2011年秋季首次在淳安縣桑園內(nèi)大面積發(fā)生一種罕見的桑葉真菌病害，2012年全縣87.4%的桑園面積均有發(fā)生。據(jù)16個(gè)病害監(jiān)測樣方調(diào)查，平均株發(fā)病率為87.9%，葉發(fā)病率為48.6%，晚秋葉損失率為21.2%。對(duì)其田間發(fā)生規(guī)律、病原真菌種類和防控技術(shù)等作了研究與示范。

新型桑葉病害；病原真菌；防控技術(shù)

淳安縣是國家現(xiàn)代蠶桑產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)示范縣之一。蠶桑是占全縣農(nóng)業(yè)總產(chǎn)值近10%的傳統(tǒng)優(yōu)勢產(chǎn)業(yè)，2011年秋季首次在淳安縣桑樹上發(fā)生一種罕見的、葉上病斑特別大的新型桑葉真菌病害，唐村、浪川等蠶桑示范園區(qū)大面積發(fā)生，而且危害嚴(yán)重。2012年該新型桑葉病害發(fā)生呈現(xiàn)危害面積持續(xù)擴(kuò)大，病原累積迅速增加，危害程度不斷加重，是淳安蠶業(yè)史上發(fā)生面最廣、危害損失最為嚴(yán)重的一種病害。兩年來，在中國蠶研所和浙江省農(nóng)科院的大力支持下，對(duì)發(fā)生的桑葉病害進(jìn)行了發(fā)生情況監(jiān)測和病原種類、生物學(xué)特性、田間發(fā)生規(guī)律及防控技術(shù)等系統(tǒng)研究與示范，現(xiàn)將兩年來的病害調(diào)查研究情況報(bào)告如下。

1 病害發(fā)生情況

1.1 病害分布

截止2012年10月上旬，全縣所有蠶桑重點(diǎn)鄉(xiāng)鎮(zhèn)和9個(gè)蠶桑示范園區(qū)，連片2 hm2以上的桑園均發(fā)生這種新型桑葉病害，全縣病害發(fā)生面積約4685 hm2，占全縣總面積的87.4%，比11年增加18.6%。據(jù)16個(gè)病害監(jiān)測樣方10月上旬調(diào)查，平均株發(fā)病率為87.9%，葉發(fā)病率為48.6%，晚秋葉損失率為21.2%（見表1、2）。其中危害嚴(yán)重的唐村、郭村、浪川示范園區(qū)等333 hm2，余畝桑園葉發(fā)病率達(dá)70%，晚秋葉損失率為38%。

1.2 病害癥狀

病葉主要發(fā)生在桑樹中下部成熟葉，頂梢桑葉較少。病菌侵染桑葉初期，葉面褪綠呈褐色水漬狀病斑（圖1-a），病斑少而小，進(jìn)而形成灰褐色病斑，色澤變土黃色后葉肉組織失水死亡；隨著病情發(fā)展，病斑以同心圓狀向外延伸，葉面病斑顏色由里到外逐漸變深呈現(xiàn)輪紋狀（圖1-b）。病斑可見于葉面、葉背。葉背呈現(xiàn)灰色圓形病斑，外觀可見多個(gè)同心圓形絨毛狀菌絲體和分生孢子（圖1-c）。病斑大小不等，最大病斑直徑可達(dá)121 mm。發(fā)病嚴(yán)重時(shí)葉片病斑較多，多個(gè)病斑常相互連接，形成大病斑（圖1-d）。遇陰雨天氣，病斑吸水膨脹，腐敗破裂；遇干燥天氣，病斑中部常開裂。1.3危害程度

表1 2012年新型桑葉病害發(fā)病率調(diào)查Table 1 The eincidence rate of the new mulberry disease in 2012

表2 2012年新型桑葉病害危害損失調(diào)查Table 2 The leaf loss caused by the new mulberry disease in 2012

圖1 病葉特征Figure 1 the symptoms of affected leaves

根據(jù)不同立地條件、不同栽培管理形式確定具有代表當(dāng)?shù)夭『Πl(fā)生實(shí)情的標(biāo)準(zhǔn)地桑園，連片栽培2 hm2畝以上的桑園至少調(diào)查一個(gè)樣方（sample）［1］；在調(diào)查樣方內(nèi)隨機(jī)抽查30株桑樹，調(diào)查株發(fā)病率；在調(diào)查樣方桑樹上每株隨機(jī)抽取1根枝條，調(diào)查枝上著葉總數(shù)和病葉數(shù)，計(jì)算葉發(fā)病率；并從中抽取5根枝條上的所有病葉，調(diào)查每片桑葉上的病斑數(shù)量和病斑直徑，用4級(jí)分類法統(tǒng)計(jì)發(fā)病指數(shù)，表示危害程度。

發(fā)病指數(shù)［2］=｛Σ（各級(jí)病葉數(shù)×各級(jí)代表值）/（調(diào)查病葉總數(shù)×最高級(jí)別的代表值）｝×100%。其中危害程度分0～4級(jí)標(biāo)準(zhǔn)［3］如下：1級(jí)為葉上病斑小，病斑1～5個(gè)，占全葉面積的1%以下，代表分值為5；2級(jí)為葉上病斑小，病斑6～10個(gè)，占全葉面積的1%～10%，代表分值為20；3級(jí)為葉上病斑擴(kuò)大，病斑10～20個(gè)，占全葉面積的11%～50%，代表分值為50；4級(jí)為葉上病斑多于20個(gè)，面積約占全葉的51%以上，代表分值為90；0級(jí)為健康葉片，代表分值為0。

2012年8月24 ～28 日開展了全縣范圍的新型桑葉病害普查工作，調(diào)查了62個(gè)樣方的1860株桑樹，其平均株發(fā)病率為11.1%，葉發(fā)病率為10.9%。10月上旬16個(gè)定點(diǎn)病害監(jiān)測樣方調(diào)查，平均株發(fā)病率為87.9%，葉發(fā)病率為48.6%，晚秋葉損失率為21.2%。其中危害嚴(yán)重的唐村、郭村、浪川示范園區(qū)等333 hm2桑園葉發(fā)病率為70%，晚秋葉損失率為38%。

1.4 田間發(fā)生規(guī)律

2011年秋季病害發(fā)生后，全縣確立了16個(gè)有代表性的病害監(jiān)測點(diǎn)。采用大面積普查和監(jiān)測點(diǎn)系統(tǒng)觀察相結(jié)合的方法，以盡快掌握新型桑葉病害的田間發(fā)生規(guī)律，為病害的有效防控提供科學(xué)依據(jù)。

1.4.1病害發(fā)生與氣象條件的關(guān)系

新型桑葉病害的發(fā)生與當(dāng)?shù)氐臍夂驐l件關(guān)系十分密切。據(jù)監(jiān)測，2012年6月上旬最早在春蠶余葉養(yǎng)桑發(fā)現(xiàn)新型桑葉病害，7月底在春蠶余葉養(yǎng)桑旁邊的夏伐桑樹基部桑葉上發(fā)現(xiàn)有少數(shù)桑葉發(fā)生病害，進(jìn)入8月份隨著枝條增長，著葉數(shù)快速增加，病害開始蔓延擴(kuò)大，自9月至10月中旬止，氣溫、空氣濕度適宜，桑園小環(huán)境非常有利于這種病原的繁衍和傳播，桑葉發(fā)病達(dá)到高峰期。據(jù)氣象資料記載，9月份平均氣溫為22～26℃，10月份為18～20℃（見表3）。9月～10月份的降雨量為114.7 mm，光照時(shí)數(shù)低于歷年平均值。分析認(rèn)為，在這樣的溫度和相對(duì)較低的陰濕氣象環(huán)境條件下，極有利于新型桑葉病害的發(fā)生流行。

表3 桑葉病害發(fā)生期平均氣溫（℃）Table 3 The average temperatures during the exploding of the new mulberry disease

1.4.2 病害發(fā)生與栽培管理方式的關(guān)系

一般通風(fēng)透光差、低洼高濕、樹勢弱、樹齡長、上一年發(fā)病的桑園危害嚴(yán)重。發(fā)病嚴(yán)重的桑園多數(shù)為大田連片的成林桑園，種植密度為1.5萬～1.8萬株/hm2，低干樹型養(yǎng)成，桑園通風(fēng)透光能力較差。加之千島湖特有的氣候效應(yīng)，致使桑園相對(duì)濕度較高，尤其是夏秋季余葉較多的桑園更是有利于新型桑葉病害病原菌的繁衍。栽培條件構(gòu)成的小氣候環(huán)境利于病原真菌的傳播，是造成病害發(fā)生流行的主要原因之一。

1.4.3 病害發(fā)生與桑品種的關(guān)系

淳安縣桑園栽培的桑品種有湖桑32號(hào)、強(qiáng)桑1號(hào)、農(nóng)桑14、農(nóng)桑12、豐田系列、育71-1等，調(diào)查發(fā)現(xiàn)所有栽培桑品種和草桑均發(fā)生這種新型桑葉病害。從大面積調(diào)查的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)中可見強(qiáng)桑1號(hào)品種危害程度相對(duì)較輕。

1.4.4 病害程度與病原積累相關(guān)

病原菌的積累也是引起該病嚴(yán)重發(fā)生的首要因素。這種桑葉病害最早在6月上旬的春蠶余葉桑上發(fā)現(xiàn)，說明桑葉菌核病菌核可能在土壤內(nèi)越冬的。在自然條件下，凡上年危害的桑園，病原積累較多的桑園，次年病害發(fā)生往往病斑多危害嚴(yán)重，符合真菌病害流行規(guī)律。

2 病原鑒定

2.1 病癥鑒定

對(duì)發(fā)病癥狀鑒定，查閱國內(nèi)外文獻(xiàn)資料，得到同一癥狀有2種病名與病原菌。一種稱為桑葉菌核病，病原為富克爾灰葡萄孢（Botryotinia fuckeliana）［4-6］；另一種稱為桑輪紋病，病原為桑椎枝孢（Spondylocladium mori）［7］。

2.2 病原菌的分離與接種

2011年經(jīng)過多次分離工作，得到1個(gè)菌種，為桑葉菌核病，病原為富克爾灰葡萄孢。2012年夏、秋季對(duì)富克爾灰葡萄孢病原菌分別進(jìn)行2次室內(nèi)和1次室外致病性回接試驗(yàn)，但沒有接種成功。2012年秋季再次對(duì)桑葉病斑周圍的病原菌進(jìn)行反復(fù)的分離和純化，得到了另一種為輪紋病的病原真菌，病原為貝氏葡萄座腔菌（B.berengeriana）（不同于桑椎枝孢）。因后期氣溫較低，活體桑樹不能正常生長開葉，未能完成病原菌的致病性接種工作。

2.3 病原種類研究

圖2 病原菌PDA平板形態(tài)特征Figure 2 The morphological characteristics of the pathogenic

2012年，中國蠶研所從浙江淳安采集的桑樹病葉，其病征為桑葉表面出現(xiàn)褐色水漬狀同心輪紋斑點(diǎn)，較大的病斑中心出現(xiàn)空洞，與報(bào)道的桑輪紋病及典型癥狀非常接近。對(duì)病斑周圍的菌進(jìn)行反復(fù)的分離和純化，得到了一株病原真菌。該分離的病原菌在PDA上28℃培養(yǎng)4 d菌落長滿培養(yǎng)皿，氣生菌絲呈棉絮狀、白灰色，菌落背面產(chǎn)生暗綠色素（見圖2、圖3）。經(jīng)培養(yǎng)后，提取真菌DNA，經(jīng)PCR純化，連接轉(zhuǎn)化目的基因，藍(lán)白斑挑選陽性克隆進(jìn)行ITS序列測定，結(jié)果顯示，該菌為子囊菌綱，假球殼目，葡萄座科，葡萄座腔菌（B.berengeriana）（見圖4）。

圖3 ITS目的基因瓊脂糖凝膠電泳圖Figure 3 The electrophoretogram of ITS target gene

經(jīng)測序，該測序該菌株的ITS基因序列全長為544 bp，進(jìn)一步將所得的序列在美國國家生物技術(shù)信息中心（National Center for Biotechnology Information，NCBI，http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）中進(jìn)行blast同源性比較，發(fā)現(xiàn)與已報(bào)道葡萄座腔菌（B.berengeriana）相似性高達(dá)99%。

01-40TTCCT CCGGT TATTG ATATG CTTAA GTTCA GCGGG TATCC

41-80CTACC TGATC GAGGT CAACC TTGAG AAAAG TTCAG AAGGT

81-120 TCGTC CGGCG GGCGA CGCCA ACCGC TCCAA AGCGA GGTGT

121-160 ATTCTACTACGCTTGAGGGC TGAAC AGCCA CCGCC GAGGT

161-200 CTTTG AGGCG CGTCC GCAGT GAGGA CGGTG CCCAA TTCCA

201-240 AGCAG AGCTT GAGGG TTGTA ATGAC GCTCG AACAG GCATG

241-280 CCCCC CGGAA TACCA AGGGG CGCAA TGTGC GTTCA AAGAT

281-320 TCGATGATTCACTGAATTCT GCAAT TCACA TTACT TATCG

321-360 CATTTCGCTGCGTTCTTCAT CGATG CCAGA ACCAA GAGAT

361-400 CCGTTGTTGAAAGTTTTAGT TTATT AACTT GTTTA TCAGA

401-440 CGTCTGCGTTTACTGACTGG AGTTT GAAG GTCCT TTGGC

441-480 GGCCG GAGCC GCCAA AGCAA CAGAG GTACG TTCAC AAAGG

481-520 GTGGG AGAGT CGAGC CGGAG CTCGA AAACT CGGTA ATGAT

521-544 CCTTCCGCAGGTTCACCTAC GGAA

圖4 ITS基因同源性BLAST比對(duì)分析結(jié)果Figure 4 The result of homology BLAST comparison of ITS gene

3 病害防控技術(shù)

針對(duì)病害的發(fā)生特點(diǎn)和真菌病害的流行規(guī)律，新型桑葉病的防控主要從病原累積控制、防治藥劑控制和環(huán)境條件控制三方面著手。

3.1 徹底清除病原

桑園冬季開展土壤深翻，上年發(fā)病嚴(yán)重的桑園，尤其要做好桑園清潔工作，清除銷毀桑園病葉，減少次年初次侵染來源。發(fā)病初期及時(shí)摘除病葉，并帶出桑園集中處理。

3.2 適時(shí)開展藥物防治

七月份是夏伐桑園新型桑葉病害初次侵染的高峰期，抓住夏蠶結(jié)束后的有利時(shí)機(jī)，選用70%甲基托布津1000倍液或多菌靈800倍液噴霧防治，一周后再噴一次，對(duì)無病桑樹起到預(yù)防作用，對(duì)發(fā)病桑樹防治效果可達(dá)90%以上。3.3改善桑園管理，減少病原誘發(fā)因素

根據(jù)不同品種特性，密度為0.9萬～1.2萬株/hm2，種植方式以寬行窄株方式為宜；減少間作，特別是早春容易造成交叉感染的蠶豆、油菜等作物；適時(shí)進(jìn)行開溝降漬，翻地除草，整枝剪梢，改善桑園通風(fēng)透光條件，減少病原的誘發(fā)因素，抑制病原孢子的產(chǎn)生；同時(shí)，要增施有機(jī)肥，以增強(qiáng)樹勢，提高桑樹耐病生長能力。

3.4 合理布局，提高桑葉利用率

根據(jù)我縣的氣候特點(diǎn)和大田栽培新品種桑的生產(chǎn)規(guī)律，原有的全年五期布局更有利于提高桑葉利用效率，減少春季余葉和秋季桑葉老化，是抑制病原的繁衍、減少病原積累和減輕桑葉危害損失的最經(jīng)濟(jì)適用的防治措施。2012年新型桑葉病害防控示范桑園，不僅葉發(fā)病率控制在4.8%，比同一園區(qū)內(nèi)葉發(fā)病率減少15.8%，而且667 m2桑荷種量增加了0.19張，為全縣新型桑葉病的防控起到很好的示范輻射作用。

3.5 地膜覆蓋

地膜覆蓋是有效隔斷從土壤越冬的病原擴(kuò)散到桑葉的最有效措施，同時(shí)對(duì)抵制雜草生長、土壤保溫保濕和促進(jìn)桑樹生長作用明顯。通過地膜覆蓋，達(dá)到提高地溫、保持土壤水分，促進(jìn)作物生長發(fā)育和提高作物抗病蟲害的目的。

4 討論

4.1 病原鑒定有待進(jìn)一步證實(shí)

由于病原菌存在有性世代和無性世代復(fù)雜性以及接種困難性問題，致使對(duì)富克爾灰葡萄孢菌的2次室內(nèi)回接試驗(yàn)和1次室外回接試驗(yàn)都沒能獲得成功。對(duì)葡萄座腔菌雖然進(jìn)行了PCR、ITS序列測定，明確了病原及其分類學(xué)上的種屬地位，但未能完成病原菌的致病性回接試驗(yàn)，還無法證實(shí)病原鑒定的準(zhǔn)確性和科學(xué)性，因此關(guān)于致病病原的研究鑒定有待進(jìn)一步證實(shí)。

4.2 存在大量的傳染源

在發(fā)病嚴(yán)重的桑園套種的玉米、蔬菜和周邊栽培的桂花樹上也發(fā)現(xiàn)有較多類似癥狀的病害，說明此病不僅危害桑樹，病原菌還能侵染蔓延到果、蔬、花卉等經(jīng)濟(jì)作物，大量的傳染源有可能導(dǎo)致更多、更大的經(jīng)濟(jì)損失。

［1］吳福安.桑樹病蟲害防控體系的構(gòu)建［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006：附錄B11.

［2］國家蠶桑產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系，桑樹病蟲害及防治藥劑普查方案（討論稿）.

［3］肖建京，蒯元璋，張帆，等.浙江省淳安縣發(fā)生桑葉菌核病的病原與發(fā)病規(guī)律調(diào)查［J］蠶業(yè)科學(xué)，2012，38（4）610～616.

［4］木村勝太郎.原色日本桑樹病害圖說［M］東京：東京建帛社，1979，96～97.

［5］遠(yuǎn)藤保太郎.桑樹病理學(xué)［M］.東京：東京明文堂，1929，109～111.

［6］Qi et al.，Botryotinia fuckeliana（de Bary）Whetzel。［J］. Mycologia，1945，37：679.

［7］匡英秋，葉武光，盧衛(wèi)芳等.桑輪紋病的化學(xué)防治初報(bào)［J］中國蠶業(yè)，32（4）17～19.

A new Mulberry Disease Report in Chun'an and its Prevention Control Research

XIAO Jian-jin1,FENG Hong-ping1,FENG Wei-zhong2,YAO Xian-ling1,GUAN Sheng-hao1
(1.Cocoon and Silk Corporation of Chun'an County,Hangzhou 311700，China; 2.Fenkou Forest Farm of Chun'an County,Hangzhou 311719，China)

A kind of rare fungi disease on mulberry exploded in Chun'an in the fall of 2011，and it was found in 87.4% mulberry field area in 2012.Accoding to the investigation of 16 effected quadrats,the average plant incidence and leaf incidence were 87.9%and 48.6%,and the leaf loss rate in late autumn reached to 21.2%.This article mainly researched the occurring pattern in field,pathogenic fungi species and prevention and control methods of this kind of disease.

new mulberry disease;pathogenic fungi;prevention and control methods

S888.71

A

0258-4069[2013]01-