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        莧籽ACE抑制肽的大孔樹脂分離純化

        2013-03-13 03:29:52陳飛平周家華曾凡坤
        食品工業(yè)科技 2013年11期

        陳飛平,周家華,曾凡坤,常 虹

        (1.北京市農(nóng)林科學(xué)院農(nóng)業(yè)綜合發(fā)展研究所,北京100097; 2.西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院,重慶400715)

        大孔樹脂是一類非離子型高分子吸附劑,主要是通過物理作用力有選擇地吸附有機(jī)物,同時由于樹脂顆粒具有一定的孔徑,使得它們對通過孔徑的化合物根據(jù)其相對分子量的不同而具有一定的選擇性,從而達(dá)到分離純化的目的。在實際應(yīng)用中大孔樹脂對一些與其骨架結(jié)構(gòu)相近的分子如芳香族苯環(huán)化合物尤具很強(qiáng)的吸附能力[1]。由于其操作方便、設(shè)備簡單、成本低、可重復(fù)利用等優(yōu)點,近年來大孔樹脂在分離純化領(lǐng)域中的應(yīng)用越來越廣泛,常被用于黃酮[2-4]、多糖[5]、皂苷[6-8]、生物堿[9]、活性肽[10-11]等物質(zhì)的分離純化中。籽粒莧是一種糧、菜、飼兼具的多用型作物,在我國已有2000多年的栽培歷史,其籽實營養(yǎng)價值高,必需氨基酸含量高于一般谷物。目前國內(nèi)對莧籽蛋白的研究鮮見報道,而國外對其研究稍多。研究結(jié)果表明莧籽蛋白中含有降壓[12-13]、抗癌[14]、抗氧化[15]、抗菌[16]等肽片段。為了保持體系pH的恒定,在酶解制備莧籽ACE抑制肽的過程中需要加入氫氧化鈉溶液,致使莧籽ACE抑制肽粗提物中存在一定量的鹽分(主要為氯化鈉),這些鹽分的存在不僅會影響產(chǎn)品的風(fēng)味,還會對人體健康產(chǎn)生不利影響,如加重腎臟負(fù)擔(dān)、導(dǎo)致高血壓等,因此需要對酶解產(chǎn)物進(jìn)行脫鹽處理。同時粗提物中還含有大分子的蛋白以及其他雜質(zhì),需要進(jìn)行分離純化。有研究發(fā)現(xiàn),大孔樹脂在純化ACE抑制肽方面的效果較好[17-20],因此本實驗采用大孔樹脂對莧籽ACE抑制肽進(jìn)行分離純化研究,以期為ACE抑制肽的工業(yè)化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。

        1 材料與方法

        1.1 材料與儀器

        籽粒莧莧籽(雜交K112) 北京市密云縣太師屯鎮(zhèn)流河溝村;DA201-C、DA201-E 江蘇蘇青水處理集團(tuán)有限公司;D101、HPD600、HPD826 滄州寶恩化工有限公司;NKA-9 南開大學(xué)化工廠;血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)、馬尿酰-組氨酰-亮氨酸(HHL) Sigma公司;乙腈 色譜純;堿性蛋白酶(Alcalase 2.4L FG) 諾維信公司;其他試劑 均為分析純。

        表1 大孔樹脂的物理結(jié)構(gòu)參數(shù)Table 1 Physical configuration parameters of the macroporous absorbed resins

        高效液相色譜儀 沃特世(Waters)科技有限公司;H2050R臺式高速冷凍離心機(jī) 湘儀離心機(jī)儀器有限公司;PHS-3C酸度計 上海理達(dá)儀器廠; FD-80真空冷凍干燥機(jī) 北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司;CP225D電子天平 德國賽多利斯股份公司。

        1.2 實驗方法

        1.2.1 莧籽蛋白粉制備 稱取一定量的脫脂莧籽粉按料液比1∶35加入一定體積的0.018%質(zhì)量濃度的NaOH溶液,置于35℃恒溫震蕩培養(yǎng)箱中震蕩保溫提取30min,取出靜置10min,將上清液倒入離心管中,4℃、6000r/min離心20min,過濾得上清液。上清液用2mol/L HCl調(diào)節(jié)pH至4.6,在4℃下靜置6h,然后4℃、3000r/min離心15min,取沉淀用適量的水進(jìn)行溶解并調(diào)節(jié)pH至中性,進(jìn)行冷凍干燥得到莧籽蛋白粉。

        1.2.2 莧籽ACE抑制肽制備 稱取適量莧籽蛋白粉,用蒸餾水將其溶解為底物質(zhì)量濃度為4%的水解底物,在90℃恒溫水浴中預(yù)處理10min,取出冷卻至54.4℃,用1mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH8.78,加入質(zhì)量為底物質(zhì)量5%的堿性蛋白酶,在54.4℃恒溫水浴震蕩搖床中水解3h,水解過程中保持pH和溫度恒定,用1mol/L NaOH調(diào)節(jié)維持pH8.78±0.05之間。酶解結(jié)束后在沸水浴中加熱10min滅酶,迅速冷卻,4℃、10000r/min離心20min,取上清液冷凍干燥得莧籽ACE抑制肽。

        1.2.3 大孔樹脂的預(yù)處理 采用2倍體積無水乙醇浸泡24h,使其充分溶脹,用無水乙醇洗至洗脫液加適量蒸餾水無白色混濁出現(xiàn),隨后用蒸餾水洗至無乙醇味;接著用2倍體積的質(zhì)量濃度為5%鹽酸浸泡3h,再用蒸餾水洗至中性;最后用2倍體積的質(zhì)量濃度5%氫氧化鈉溶液浸泡3h,再用蒸餾水洗至中性,備用。

        1.2.4 大孔樹脂型號的篩選 為了富集莧籽蛋白酶解物中的多肽,脫去無機(jī)鹽,本實驗以吸附率和解吸率為指標(biāo),比較DA201-C、DA201-E、D101、HPD600、NKA-9和HPD826等6種大孔樹脂對莧籽ACE抑制肽的分離純化效果。

        稱取10g預(yù)處理樹脂置于150mL錐形瓶中,向其中加入質(zhì)量濃度10mg/mL的水解液30mL,在25℃,160r/min條件下震蕩12h,使樹脂與料液充分接觸,震蕩結(jié)束后取出抽濾,測定濾液的蛋白含量,大孔樹脂吸附能力的計算如公式(1)。再將過濾后的大孔樹脂置于150mL錐形瓶中,加入體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇30mL,在25℃,160r/min條件震蕩12h,取出抽濾,測定濾液中的蛋白含量。大孔樹脂解吸能力的計算如公式(2)。

        1.2.5 DA201-C大孔樹脂靜態(tài)吸附能力的測定 稱取10g預(yù)處理樹脂置于150mL錐形瓶中,向其中加入質(zhì)量濃度 10mg/mL的水解液 30mL,在 25℃,160r/min震蕩7h使樹脂與料液充分接觸,每0.5h取樣1次,測定其蛋白質(zhì)含量,計算吸附率,作DA201-C大孔樹脂靜態(tài)吸附曲線。

        1.2.6 DA201-C大孔樹脂靜態(tài)解吸能力的測定 稱取10g預(yù)處理樹脂置于150mL錐形瓶中,向其中加入質(zhì)量濃度 10mg/mL的水解液 30mL,在 25℃,160r/min震蕩6h,待其充分吸附后取出抽濾,再將吸附后的大孔樹脂重新置于150mL錐形瓶中,加入體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇30mL,每0.5h取樣1次,測定其蛋白質(zhì)含量,計算解吸率,作DA201-C大孔樹脂靜態(tài)解吸曲線。

        1.2.7 DA201-C大孔樹脂靜態(tài)純化莧籽ACE抑制肽工藝 稱取一定量的預(yù)處理樹脂于錐形瓶中,加入一定量的水解液,在25℃,160r/min震蕩6h,待其充分吸附后取出抽濾,測定其濾液的蛋白質(zhì)含量,計算吸附率,分別考察水解液質(zhì)量濃度6、8、10、12、14、16mg/mL和pH2、3、4、5、6、7、8、9對樹脂吸附性能的影響。

        稱取一定量水解液吸附后的大孔樹脂于錐形瓶中,加入一定量的洗脫劑,在25℃,160r/min條件震蕩2h,抽濾,測定濾液中的蛋白質(zhì)含量,計算解吸率。收集洗脫液并濃縮,冷凍干燥后分別用等體積的去離子水復(fù)溶,測定氯化物含量和ACE抑制效果,計算其脫氯率和ACE抑制率,考察不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液對樹脂解吸性能的影響。

        1.2.8 DA201-C大孔樹脂動態(tài)純化莧籽ACE抑制肽工藝 在層析柱(3.2cm×100cm)中裝入預(yù)處理好的樹脂,濕法上柱,讓其自然沉淀得高約87cm,床體積(BV)約700mL的樹脂固定床。將一定量的水解液流經(jīng)層析柱,吸附完成后用1BV的蒸餾水將未吸附的蛋白以及粘附在樹脂上的雜質(zhì)沖洗干凈,再將一定量的體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇溶液流經(jīng)層析柱進(jìn)行洗脫,以A280nm≤0.05時停止洗脫,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后冷凍干燥,得到莧籽ACE抑制肽。

        在靜態(tài)純化實驗確定的最適水解液質(zhì)量濃度和pH以及洗脫劑的基礎(chǔ)上,以吸附率或解吸率為指標(biāo),分別考察上樣流速 2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mL/min、上樣量0.2、0.4、1.0BV、洗脫流速1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL/min、和洗脫體積0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0BV對樹脂動態(tài)吸附-解吸的影響。

        1.2.9 成分分析 蛋白質(zhì)含量測定:Folin-酚法;短肽含量測定:三氯乙酸法[21];氯含量測定:鉻酸鉀指示劑法GB/T11896-89;ACE抑制率測定:高效液相色譜法[22]。

        1.2.10 數(shù)據(jù)處理 實驗數(shù)據(jù)均為3次平行實驗的平均值,用Sigma Plot和Excel軟件進(jìn)行圖表處理。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 分離純化莧籽ACE抑制肽最適大孔樹脂篩選結(jié)果

        從圖1中可知,6種樹脂對莧籽ACE抑制肽的吸附和解吸性能呈現(xiàn)一定的趨勢,即非極性樹脂對莧籽ACE抑制肽的吸附和解吸能力較強(qiáng),說明莧籽ACE抑制肽的疏水性較高。6種大孔樹脂的吸附率差異不是很大,相比之下,DA201-C的吸附效果稍高于其他型號,達(dá)到73.42%,可能是由于DA201-C樹脂是一種比表面積較大、非極性樹脂,其對疏水性多肽有較強(qiáng)的吸附性,同時其平均孔徑相對較小,對分子量較大的蛋白吸附力差,可以初步達(dá)到分離純化小分子莧籽ACE抑制肽的目的。在體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇為洗脫劑的條件下,DA201-E的解吸率最高,達(dá)71.77%,DA201-C次之。盡管DA201-E有較高的解吸率,但其在吸附的過程中會產(chǎn)生難聞的化學(xué)氣味,因此本實驗篩選DA201-C為分離純化莧籽ACE抑制肽的最適大孔樹脂。

        圖1 6種大孔樹脂對莧籽ACE抑制肽的吸附率和解吸率比較結(jié)果Fig.1 Comparison of adsorption rates and desorption rates of 6 types of macroporous resins

        2.2 DA201-C大孔樹脂對莧籽ACE抑制肽的靜態(tài)吸附曲線

        DA201-C是一種非極性樹脂,在吸附過程中,吸附質(zhì)分子的疏水性部分通過范德華力或氫鍵作用優(yōu)先被吸附在樹脂的疏水聚合物表面,由于樹脂表面的結(jié)合位點有限,樹脂的吸附會出現(xiàn)飽和現(xiàn)象。從圖2中可以看出,在前3h內(nèi)DA201-C大孔樹脂對莧籽ACE抑制肽的吸附率隨著時間的增加迅速增加,之后增加率變緩,6h后吸附率趨于穩(wěn)定,這與劉志東[23]報道的結(jié)果相符。因此選擇6h為后續(xù)靜態(tài)吸附的時間。

        圖2 DA201-C大孔樹脂靜態(tài)吸附曲線Fig.2 Static adsorption curves of DA201-C resin

        2.3 DA201-C大孔樹脂對莧籽ACE抑制肽的靜態(tài)解吸曲線

        有研究表明,大孔樹脂在吸附過程中,吸附質(zhì)通常并不進(jìn)入微球相(凝膠相),而是被吸附在微球相表面,因此洗脫過程一般較快[1]。如圖3所示,相對于吸附來說,解吸達(dá)到平衡所需的時間較短,屬于快速平衡型。體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇可以比較集中的在大約1h內(nèi)將大部分吸附的多肽洗脫下來。因此,DA201-C大孔樹脂對莧籽ACE抑制肽具有良好的吸附和解吸性能。

        圖3 DA201-C大孔樹脂靜態(tài)解吸曲線Fig.3 Static elution curves of DA201-C resin

        2.4 DA201-C大孔樹脂靜態(tài)純化莧籽ACE抑制肽工藝

        2.4.1 水解液質(zhì)量濃度對樹脂靜態(tài)吸附效果的影響如圖4所示,水解液質(zhì)量濃度較低時,隨著質(zhì)量濃度的增加,樹脂吸附率增加;水解液的質(zhì)量濃度達(dá)到10mg/mL時,樹脂的吸附率達(dá)到最大(64.84%);水解液質(zhì)量濃度大于10mg/mL時,樹脂的吸附率反而降低??赡苁怯捎跐舛冗^高,樣品中肽分子多,在擴(kuò)散過程中相互碰撞,阻礙了其向樹脂的擴(kuò)散速度,導(dǎo)致吸附率下降。因此,水解液的質(zhì)量濃度控制在10mg/mL左右為宜。

        2.4.2 水解液pH對樹脂靜態(tài)吸附效果的影響 從圖5中可見,pH偏酸性時樹脂的吸附效果較好,這可能是由于莧籽ACE抑制肽中疏水性氨基酸的含量較多,而疏水性氨基酸多為酸性氨基酸,因此在酸性環(huán)境下樹脂的吸附性能更佳。同時莧籽ACE抑制肽是一類兩性分子,pH可以影響其電離狀態(tài),從而改變其靜電引力和形成氫鍵的能力,致使樹脂的吸附率發(fā)生改變。當(dāng)pH為3~5時,大孔樹脂的吸附率達(dá)到最大,可能是因為pH3~5為莧籽ACE抑制肽的等電點,在這個條件下,ACE抑制肽以分子狀態(tài)存在,能與樹脂間通過氫鍵作用結(jié)合,樹脂對其吸附作用強(qiáng)[24],并且此時肽的溶解度最低,最容易被吸附[1]。由于酶解過程是在堿性條件下完成的,莧籽ACE抑制肽粗提物的pH偏堿性,為了減少調(diào)節(jié)pH而加入的鹽酸的用量,本實驗選擇 pH5為最適的酶解液pH。

        圖4 水解液質(zhì)量濃度對樹脂靜態(tài)吸附性能的影響Fig.4 Effect of sample concentration on static adsorption of DA201-C resin

        圖5 水解液pH對樹脂靜態(tài)吸附性能的影響Fig.5 Effect of sample pH on static adsorption of DA201-C resin

        2.4.3 乙醇體積分?jǐn)?shù)對脂靜態(tài)解吸效果的影響 大孔樹脂對有機(jī)物的吸附作用主要是基于有機(jī)物的疏水基團(tuán)與吸附劑之間的物理作用力,因此大孔樹脂對物質(zhì)的吸附力微弱,只要改變體系的親水與疏水平衡,就可以引起被吸附物質(zhì)的解吸。DA201-C是一種非極性樹脂,根據(jù)“相似相溶”原理,洗脫劑的極性越低,其對吸附質(zhì)的洗脫能力越強(qiáng)。如圖6所示,不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇對莧籽ACE抑制肽的解吸效果差異顯著,隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加,解吸率增加,體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇溶液的解吸率最高,當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)到100%時,解吸率較75%時有所下降,這可能是由于ACE抑制肽中疏水性氨基酸含量較高,其在蒸餾水中溶解性小,而部分相對分子質(zhì)量較大的多肽在無水乙醇中的溶解性不好。由于溶液呈電中性,而酶解液中的鹽分主要為氯化鈉,因此可以用脫氯率來大致反映酶解液的脫鹽效果。從圖6中可以看出5種乙醇溶液均有較高的脫氯率,其中體積分?jǐn)?shù)75%時脫氯率最高,說明DA201-C大孔樹脂具有降低莧籽ACE抑制肽中鹽分的作用。

        圖6 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇對樹脂靜態(tài)解吸率和脫氯率的影響Fig.6 Effect of ethanol concentration on the static desorption and dechlorination of DA201-C resin

        不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液的極性不同,它們與疏水性的肽段的親和力也不同,從而可以得到疏水性不同的肽段,而肽段的降壓活性與其疏水性密切相關(guān)[25-27]。如圖7所示,隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加,產(chǎn)物的ACE抑制率呈現(xiàn)先升高后降低的變化,在體積分?jǐn)?shù)為75%時達(dá)到最大,為53.59%,比未純化的酶解液的ACE抑制率提高了9.13%。因此選擇體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇溶液為最適的洗脫劑。

        圖7 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇對洗脫產(chǎn)物ACE抑制率的影響Fig.7 Effect of ethanol concentration on the ACE inhibition ratio of elute of DA201-C resin

        2.5 DA201-C大孔樹脂動態(tài)純化莧籽ACE抑制肽工藝

        2.5.1 上樣流速和上樣量對樹脂動態(tài)吸附效果的影響 上樣流速會影響溶質(zhì)向樹脂表面擴(kuò)散,從而影響樹脂固定床動態(tài)吸附效率,如圖8所示,隨著上樣流速的增加,樹脂吸附率下降,可能是由于流速過快,溶液在樹脂內(nèi)停留時間縮短,固定相和流動相沒有充分接觸,導(dǎo)致流動相中的肽分子還未與樹脂內(nèi)表面接觸就已提前穿透流出,致使吸附率降低。當(dāng)上樣量為0.2BV時,莧籽ACE抑制肽幾乎完全被吸附,吸附率達(dá)95%左右,隨著上樣量的增加,吸附率下降,但是考慮到充分利用樹脂、提高純化效率,本實驗選擇上樣量1BV,上樣流速6mL/min。

        2.5.2 洗脫流速對樹脂動態(tài)解吸效果的影響 不同的洗脫流速對解吸效果有一定的影響(見圖9),以5mL/min的流速進(jìn)行洗脫得到的解吸率最高,所以,本實驗采用5mL/min的洗脫流速。

        圖8 流速和上樣量對樹脂動態(tài)吸附性能的影響Fig.8 Effect of flow rate and hydrolysate quantity on the dynamic adsorption of DA201-C resin

        圖9 洗脫流速對樹脂動態(tài)解吸性能的影響Fig.9 Effect of elution flow rate on dynamic desorption of DA201-C resin

        2.5.3 洗脫體積對樹脂動態(tài)解吸效果的影響 從圖10可見,體積分?jǐn)?shù)75%乙醇的洗脫能力與其用量呈正相關(guān),用量越大,解吸率越大,在前2.5BV時,解吸率隨著洗脫體積的增加,迅速增加,4.5BV后解吸率的變化緩慢。從節(jié)約成本方面考慮,洗脫體積以4.5~5.0BV為宜。

        圖10 洗脫體積對樹脂動態(tài)解吸性能的影響Fig.10 Effect of the effluent volume on dynamic desorption of DA201-C resin

        2.6 DA201-C大孔樹脂對莧籽ACE抑制肽的分離效果

        由表2可以得出,經(jīng)過樹脂純化后,莧籽ACE抑制肽的蛋白純度為89.47%(含水量9.33%),脫鹽率為88.86%,短肽含量提高了20.96%,ACE抑制活性提高了27.91%。

        表2 DA201-C大孔樹脂分離效果(%)Table 2 The purified effect of DA201-C resin

        3 結(jié)論

        本實驗采用大孔樹脂對莧籽ACE抑制肽進(jìn)行吸附-解吸實驗,選出性能最佳的樹脂,并對其純化工藝進(jìn)行優(yōu)化。采用靜態(tài)吸附-解吸實驗,對6種不同極性的樹脂進(jìn)行篩選,確定DA201-C樹脂為純化莧籽ACE抑制肽的理想樹脂,并考慮水解液質(zhì)量濃度和pH對DA201-C樹脂靜態(tài)吸附性能的影響以及不同體積分?jǐn)?shù)乙醇對該樹脂解吸性能的影響,確定水解液質(zhì)量濃度10mg/mL,pH5時,樹脂的靜態(tài)吸附率最大,體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇對樹脂的解吸率最高,洗脫產(chǎn)物的脫氯率和ACE抑制率均為最大。在此基礎(chǔ)上,采用動態(tài)吸附-解吸實驗,考察上樣流速、上樣量、洗脫流速和洗脫體積對樹脂純化莧籽ACE抑制肽工藝的影響,確定最優(yōu)的條件為:上樣流速6mL/min,上樣量1BV,洗脫流速5mL/min,洗脫體積5BV,此時DA201-C樹脂的吸附率為83.69%,解吸率為98.69%。實驗結(jié)果表明,莧籽ACE抑制肽經(jīng)DA201-C大孔樹脂純化后,蛋白純度含量由85.5%提高到89.47%(含水量9.33%),脫鹽率為88.86%,短肽含量提高了20.96%,ACE抑制活性提高了27.91%,因此DA201-C大孔樹脂可以較好的脫除莧籽ACE抑制肽中無機(jī)鹽等雜質(zhì),提高其純度和生理活性。

        [1]張東方,信穎.中藥現(xiàn)代分離技術(shù)[M].沈陽:遼寧大學(xué)出版社,2006,62-64.

        [2]王慧彥,方蕓,王妍,等.AB-8大孔樹脂對槐花總黃酮吸附性能的研究[J].食品科學(xué),2009,30(20):146-150.

        [3]田徽,阮期平,賴恩陽,等.大孔樹脂純化馬蘭總黃酮樹脂吸附特性及工藝的研究[J].食品與發(fā)酵工藝,2012,38(1): 224-229.

        [4]WEI Han,RUAN Jinlan,LEI Yongfang,et al.Enrichment and purification of flavones from rhizomes of Abacopteris penangiana by macroporous resins[J].Chinese Journal of Natural Medicines,2012,10(2):119-124.

        [5]任海偉,陳海秀,唐學(xué)慧,等.大孔樹脂純化薏苡多糖的研究[J].食品工業(yè)科技,2012,33(3):249-254.

        [6]于林芳,王超,王玉明,等.大孔樹脂純化革皮氏海參總皂苷工藝[J].食品科學(xué),2011,32(12):1-4.

        [7]YIN Lianhong,XU Youwei,QI Yan,et al.A green and efficient protocol for industrial-scale preparation of dioscin from Dioscorea nipponica Makino by two-stepmacroporousresin column chromatography[J].Chemical Engineering Journal,2010,165 (1):281-289.

        [8]WAN Jianbo,ZHANG Qingwen,YEWencai,etal. Quantification and separation of protopanaxatriol and protopanaxadiol type saponins from Panax notoginseng with macroporous resins[J].Separation and Purification Technology,2008,60(2):198-205.

        [9]吳珍菊,林先哲,潘海亮,等.H103大孔樹脂吸附胡椒堿的性能研究[J].食品工業(yè)科技,2011,32(8):295-297.

        [10]陳季旺,孫勤,夏文水.魚降壓肽的大孔樹脂分離及其活性穩(wěn)定性[J].食品科學(xué),2009,30(18):25-28.

        [11]管驍,姚慧源.燕麥蛋白源ACE抑制肽脫鹽工藝研究[J].農(nóng)產(chǎn)品加工·學(xué)刊,2008(7):147-156.

        [12]Fritz Mariana,Vecchi Bruno,Rinaldi Gustavo,et al. Amaranth seed protein hydrolysates have in vivo and in vitro antihypertensive activity[J].Food Chemistry,2011,126: 878-884.

        [13]Tovar-pérez E.G,Guerrero-Legarreta I,F(xiàn)arrés-González A,et al.Angiotensin I-converting enzyme-inhibitory peptide fractions from albumin 1 and globulin as obtained of amaranth grain[J].Food Chemistry,2009,116:437-444.

        [14]Silva-Sánchez C.,Barba de la Rosa A.P.,Leòn-GalvánF de Lumen B O,et al.Bioactive peptides in amaranth(Amaranthus hypochondriacus)seed storage proteins[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,2008,56:1233-1240.

        [15]Tironi Valeria A,Anon María C.Amaranth proteins as a source of antioxidant peptides:Effect of proteolysis[J].Food Research International,2010,43:315-322.

        [16] Lipkin Aleksey,Anisimova Veronika,Nikonorova Aleksandra,et al.An antimicrobial peptide Ar-AMP from amarant (Amaranthus retroflexus L.)seeds.[J].Phytochemistry,2005,66: 2426-2431.

        [17]Zhang Fengxiang,Wang Zhang,Xu Shiying.Macroporous resin purification of grass carp fish(Ctenopharyngodon idella) scale peptides with in vitro angiotensin-I converting enzyme (ACE)inhibitory ability[J].Food Chemistry,2009,117(3): 387-392.

        [18]王雙,王昌濤,韓揚.燕麥ACE抑制肽的分離純化及其活性研究[J].食品科學(xué),2010,31(24):222-229.

        [19]潘道明,林璐.DA201-C大孔樹脂靜態(tài)吸附ACE抑制肽的研究[J].食品科學(xué),2009,30(5):20-23.

        [20]CHEN Jiwang,WANG Yimei,ZHONG Qixin,et al. Purification and characterization ofa vovelangiotensin-I converting enzyme(ACE)inhibitory peptide derived from enzymatic hydrolysate of grass carp protein[J].Peptides,2012,33 (1):52-58.

        [21]魯偉,任國譜,宋俊梅.蛋白水解液中多肽含量的測定方法[J].食品科學(xué),2005,26(7):169-171.

        [22]姜瞻梅,田波,吳剛,等.高效液相色譜法快速測定降血壓肽的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制活性[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2007,33(8):122-126.

        [23]劉志東.乳抗氧化肽的分離、純化及生物活性研究[D].上海:上海海洋大學(xué),2008:47-48.

        [24]周存山,馬海樂,余筱潔,等.麥胚蛋白降壓肽的大孔樹脂脫鹽研究[J].食品科學(xué),2006,27(3):142-146.

        [25]張貴川.食源三肽ACE抑制活性構(gòu)效關(guān)系研究[D].重慶:西南大學(xué),2009:13-14.

        [27]?,|.定向酶解大豆蛋白及其ACE抑制肽研究[D].江蘇無錫:江南大學(xué),2008:8-10.

        [27]張曉梅.降壓肽和降膽固醇大豆肽的分離純化[D].無錫:江南大學(xué),2006:13-14.

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