馬志剛，安 燕

（1.河北省保定市第三醫(yī)院骨二科，河北保定 071000；2.河北大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北保定 071000）

ERK 2的表達(dá)與宮頸癌的生物學(xué)行為的關(guān)系

馬志剛1，安 燕2

（1.河北省保定市第三醫(yī)院骨二科，河北保定 071000；2.河北大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北保定 071000）

宮頸腫瘤；免疫組織化學(xué)；細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)MAP激酶類

細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（extracellular singnalregulated kinase，ERK）是絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）的一個(gè)主要亞族。該酶被激活后成為磷酸化的ERK（p-ERK），其持續(xù)激活是細(xì)胞通過G1期和G1/S轉(zhuǎn)化所必需的。p-ERK介導(dǎo)信號由胞漿傳遞到胞核，通過轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)激活多種癌基因，引起細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化［1］。p-ERK可能通過重組細(xì)胞支架、改變細(xì)胞形態(tài)［2］及促進(jìn)細(xì)胞質(zhì)中基質(zhì)金屬蛋白酶和尿激酶纖維蛋白酶原激活劑的表達(dá)［3］，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測ERK2在宮頸癌中的表達(dá)，并分析其與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取70例河北省保定市第三醫(yī)院2006年1月—2012年5月經(jīng)手術(shù)切除、術(shù)后病理證實(shí)為宮頸癌組織標(biāo)本，術(shù)前均未經(jīng)放化療?；颊吣挲g28～69歲，平均（46.5±9.3）歲，≤45歲21例，＞45歲49例。其中Ⅰa期6例，Ⅰb期44例，Ⅱa期20例；鱗癌56例，腺癌14例；高分化癌19例，中分化癌30例，低分化癌21例；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移13例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移57例。同時(shí)收集22例因子宮肌瘤行全子宮切除術(shù)，術(shù)后證實(shí)為慢性宮頸炎組織標(biāo)本作為對照，患者年齡35～53歲，平均（44.0±5.3）歲。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑：兔抗人ERK2多克隆抗體購于武漢博士德公司。二氨基聯(lián)苯胺顯色試劑盒和SP（光譜純試劑）免疫組織化學(xué)試劑盒均購于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.2.2 結(jié)果判定：免疫組織化學(xué)染色按SP試劑盒說明書進(jìn)行，PBS代替一抗作陰性對照，已知陽性片作陽性對照。將石蠟包埋的蠟塊制成4μm切片，ERK2的陽性表達(dá)為在細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒，采用半定量積分法，每片隨機(jī)選取具有代表性的10個(gè)高倍視野（×400）進(jìn)行計(jì)數(shù)，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)≤10％、＞10％～30％、＞30％～75％、＞75％分別記為0分、1分、2分、3分。根據(jù)著色程度無黃色記0分、淡黃色1分、黃色2分、棕黃色3分。綜合判定取著色程度和陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)分值之積，≤1分記為陰性，＞1～2分記為弱陽性＞2～4分記為陽性，＞4分記為強(qiáng)陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

ERK2在慢性宮頸炎組織中陽性表達(dá)率13.6％（3/22），在宮頸癌組織陽性表達(dá)率為74.3％（52/70），主要表達(dá)于胞質(zhì)中。ERK2在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于慢性宮頸炎組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

ERK2表達(dá)與患者宮頸癌臨床分期、組織分化程度及淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），而與患者年齡、病理類型無關(guān)（P＞0.05），見表1。

表1 ERK2陽性表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

在細(xì)胞的增殖、分化和腫瘤形成過程中，Ras/Raf/MEK/MAPK通路發(fā)揮了重要作用，而Ras/Raf/MEK/ERK是研究最多、最經(jīng)典的級聯(lián)。ERK家族由ERK1～7［4］等7位成員組成。ERK通過磷酸化為p-ERK而被活化。國外研究［5］發(fā)現(xiàn)，活化的ERK可調(diào)節(jié)多種癌基因和細(xì)胞周期基因的表達(dá)，阻止細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞增殖。ERK蛋白在除了腦組織以外的各種上皮組織來源的腫瘤中表達(dá)水平均高于正常組織［6］。ERK2蛋白在多種腫瘤組織中均有表達(dá)，如鼻咽癌、乳腺癌、胃癌及卵巢癌等，并與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，ERK2在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率為74.3％，明顯高于正常宮頸組織的13.6％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；隨宮頸癌分期的增加，其陽性表達(dá)率明顯增高（P＜0.05）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽性表達(dá)率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（P＜0.05）；隨宮頸癌組織分型的降低，ERK2的陽性表達(dá)率明顯增高（P＜0.05）。說明ERK2與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)ERK2的陽性表達(dá)率與年齡及病理分型無關(guān)，這與周建維等［7］在上皮性卵巢組織中的研究結(jié)果相似。

總之，腫瘤的發(fā)生是多種因素相互作用的結(jié)果，宮頸癌也不例外。ERK級聯(lián)通路涉及的基因較多，作用機(jī)制復(fù)雜，產(chǎn)生較多的生物學(xué)效應(yīng)，可能通過多種途徑、多步驟促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。隨著對ERK2的深入研究，ERK2有望成為判斷宮頸癌預(yù)后的腫瘤標(biāo)志物，并為宮頸癌治療的靶基因奠定基礎(chǔ)。

［1］DELMASC，MANENTI S，BOUDJELAL A，et al.The p42/p44 mitogen-antivated protein kinase activation triggers p27Kip1 degradtion independently of CDK2/cyclin E in NIH 3T3 cells［J］. JBiol Chem，2001，276（37）：34958-34965.

［2］SEGER R，KREBSEG.The MARK signaling cascacle［J］.FASEB J，1995，9（9）：726-735.

［3］SHIN EY，MA EK，KIM CK，etal.Src/ERK but not phospholipase D is involved in keratinocyte growth factor-stimulated secretion of matrixmetalloprotease-9 and urokinase-type plasminogen activator in SNU-16 human stomach cancer cell［J］.J Cancer Res Clin Oncol，2002，128（11）：596-602.

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［6］孫秀娣，牧人，周有尚，等.中國胃癌病死率20年變化情況分析及其發(fā)展趨勢預(yù)測［J］.中華腫瘤雜志，2004，26（1）：4-9.

［7］周建維，干寧悅，張偉江，等.上皮性卵巢腫瘤組織MKP-1及p-ERK1/2蛋白表達(dá)的研究［J］.分子生物學(xué)報(bào)，2009，6（3）：3-4.

（本文編輯：劉斯靜）

R711.74

B

1007-3205（2013）11-1460-02

2012-11-05；

2013-02-17

馬志剛（1975-），男，河北順平人，河北省保定市第三醫(yī)院主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事骨外科疾病診治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.11.040