王 昕，靳怡然，王川平，杜英峰

（1.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院藥劑科，河北石家莊 050000；2.河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥物分析學(xué)教研室，河北石家莊 050017）

·論 著·

液質(zhì)聯(lián)用法同時測定兒寶顆粒中8種化學(xué)成分的含量

王 昕1，靳怡然1，王川平1，杜英峰2*

（1.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院藥劑科，河北石家莊 050000；2.河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥物分析學(xué)教研室，河北石家莊 050017）

目的建立一種液質(zhì)聯(lián)用法同時測定兒寶顆粒中8種化學(xué)成分的含量。方法色譜柱為Dikma Diamonsil C18（150mm×4.6mm，5μm）；流動相為甲醇-水（0.1‰甲酸），梯度洗脫；正負(fù)離子同時監(jiān)測，源噴射電壓分別為5 500V和-4 500 V，離子源溫度為650℃。8種被測成分的監(jiān)測離子對分別為525.3/449.1（芍藥苷）、479.1/121.1（芍藥內(nèi)酯苷）、193.1/133.1（東莨菪內(nèi)酯）、217.1/202.0（花椒毒素）、247.1/217.2（異茴芹內(nèi)酯）、217.1/174.0（佛手柑內(nèi)酯）、187.2/131.1（補(bǔ)骨脂素）和271.2/203.1（歐前胡素）。采用多反應(yīng)離子監(jiān)測模式進(jìn)行定量。結(jié)果兒寶顆粒中待測8個化學(xué)成分在9min內(nèi)完全分離，方法的線性關(guān)系、線性范圍、精密度及穩(wěn)定性較好，回收率分別為101.3％、98.5％、99.4％、100.3％、100.4％、100.1％、98.1％和99.4％。結(jié)論該方法簡便、快速、準(zhǔn)確、專屬性高，可用于兒寶顆粒的質(zhì)量控制。

色譜法，液相；串聯(lián)質(zhì)譜法；兒寶顆粒

兒寶顆粒是由北沙參、炒白芍、太子參、陳皮、茯苓及山藥等十一味中藥加工而成的一種中藥復(fù)方制劑，收載于2010年版《中國藥典》一部［1］，本品具有健脾益氣、生津開胃的功效，主要用于治療小兒脾氣虛弱、胃陰不足所致的納呆厭食、口干燥渴、大便久瀉、面黃體弱、精神不振、盜汗等癥，為臨床常用藥物［2］。北沙參和白芍均為方中主要藥味，白芍中的芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷為其主要活性成分［3-5］，北沙參的主要活性成分為多種香豆素化合物［6］，因此有必要對上述活性成分進(jìn)行同時測定。目前有關(guān)兒寶顆粒的質(zhì)量控制方法僅限于采用高效液相色譜法來測定白芍中的芍藥苷［1］、陳皮中的橙皮苷［7］。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)相比以往的檢測器（例如紫外檢測器等）具有更加靈敏和專屬的特點(diǎn)，已成為中藥質(zhì)量控制和分析的常用技術(shù)手段［8-9］。為了更好地控制兒寶顆粒的質(zhì)量，并參考已有文獻(xiàn)［10-11］，本研究利用高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用法技術(shù)，同一周期正負(fù)離子同時監(jiān)測，并使用多反應(yīng)離子監(jiān)測（multiple-reaction monitoring，MRM）為定量方法，同時測定該制劑中白芍的2種苷類有效成分即芍藥苷（paeoniforin，1）和芍藥內(nèi)酯苷（albiflorin，2）；北沙參中6個香豆素類成分即東莨菪內(nèi)酯（scopoletin，3）、花椒毒素（xanthotoxin，4）、異茴芹內(nèi)酯（isoimpinellin，5）、佛手柑內(nèi)酯（bergapten，6）、補(bǔ)骨脂素（psoralen，7）和歐前胡素（imperatorin，8）。結(jié)果表明該法快速、準(zhǔn)確、可靠，可為兒寶顆粒的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器：Agilent-1200高效液相色譜儀（美國安捷倫公司），3200QTRAPTM質(zhì)譜儀（美國Applied Biosystems SCIEX公司），配有電噴霧離子源（eletrospray ionization，ESI）以及儀器操作軟件versions1.4.2。超聲波清洗器（上海聲譜超聲波設(shè)備廠）。BP211D型電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

1.2 試藥：對照品1（批號110736-200629），3（批號110768-200504），7（批號110739-200613）和8（批號110826-200511）均購自中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用；4、5和6均購自上海同田生物技術(shù)有限公司；2購自南京澤郎醫(yī)藥科技有限公司。上述對照品經(jīng)HPLC采用峰面積歸一化法檢測含量均＞98％。兒寶顆粒（批號2 0110201，20110406，20110805），規(guī)格為10g/包，均購于江西藥都樟樹制藥有限公司。甲醇（色譜純，美國Tedia公司）；水為重蒸水。

2 結(jié) 果

2.1 色譜和質(zhì)譜條件：色譜條件，色譜柱為DikmaDiamonsil C18（150mm×4.6mm，5μm）；流動相為甲醇（A）-0.1‰甲酸水（B），采用0～4 min，40％～95％A；4～7min，保持95％A不變；7～10min，95％～40％A程序進(jìn)行梯度洗脫；流速1.0mL/min；進(jìn)樣量10μL。質(zhì)譜條件，離子源，正負(fù)離子同時檢測；噴霧電壓，-4 500 V/5 500 V；離子源溫度650℃。霧化氣，60psi，輔助氣，65psi，氣簾氣，25psi。多反應(yīng)離子監(jiān)測模式定量；化合物1和2采用負(fù)離子監(jiān)測模式，化合物3～8采用正離子監(jiān)測模式；監(jiān)測離子對，解簇電壓及碰撞能量見表1，二級質(zhì)譜圖見圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備：分別取化合物1～8對照品適量，精密稱定，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，即得對照品儲備液。取各對照品儲備液適量，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，混勻，即制成適當(dāng)濃度的混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備：取兒寶顆粒10包，混勻，研細(xì)，稱取粉末2.0g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入80％甲醇10mL，稱定質(zhì)量，超聲（功率500W，頻率50kHz）處理30min，放冷，再稱定質(zhì)量，用80％甲醇補(bǔ)足所減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。

表1 8個化合物的質(zhì)譜數(shù)據(jù)

圖1 8種化合物的二級離子掃描質(zhì)譜圖

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性范圍、檢測限和定量限：取“2.2.1”項(xiàng)下的混合對照品溶液，分別精密量取1.0、2.0、4.0、6.0、8.0mL置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按已確定的色譜和質(zhì)譜條件進(jìn)行測定并記錄峰面積，8個有效成分回歸方程，線性范圍及相關(guān)系數(shù)見表2。以峰面積（Y）對濃度（X，mg/L）進(jìn)行線性回歸，將混合對照品溶液逐步稀釋，分別以信噪比S/N=10和S/N=3時對照品的濃度作為定量限和檢測限，結(jié)果見表2。供試品溶液和對照品溶液的色譜圖見圖2。

圖2 液體的提取離子色譜圖A.對照品；B.兒寶顆粒

表2 8種有效成分的回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍

2.3.2 精密度試驗(yàn)：精密吸取批號為20110406的同一供試品溶液，按上述色譜和質(zhì)譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜峰的峰面積。結(jié)果化合物1～8的相對標(biāo)準(zhǔn)差值分別為0.8％、1.2％、2.9％、1.9％、1.9％、2.1％、1.8％和2.6％，表明精密度良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取批號為20110406的同一供試品溶液，按上述色譜與質(zhì)譜條件分別于0、4、8、12、18和24h進(jìn)樣分析，記錄峰面積。結(jié)果表明供試品溶液在室溫條件下放置24h穩(wěn)定。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取批號為20110406兒寶顆粒粉末6份，按“2.3.2”項(xiàng)方法分別制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，計算含量。結(jié)果化合物1～8含量的相對標(biāo)準(zhǔn)差值分別為1.1％、1.3％、1.9％、1.6％、2.7％、1.6％、2.8％和1.9％，表明本方法重復(fù)性良好。

2.3.5 回收率試驗(yàn)：精密稱取批號為20110406兒寶顆粒1.0g，共6份，分別精密加入1～8對照品儲備液適量，按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜和質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析。計算得待測化合物1～8的平均回收率分別為101.3％、98.5％、99.4％、100.3％、100.4％、100.1％、98.1％和99.4％，相對標(biāo)準(zhǔn)差分別為2.5％、1.8％、2.8％、3.1％、2.7％、1.3％、3.7％和1.9％。

2.3.6 樣品測定：取各批號的兒寶顆粒供試品，按已經(jīng)建立的方法分別測定化合物1～8的含量。結(jié)果見表3。

3 討 論

3.1 流動相系統(tǒng)的選擇：本實(shí)驗(yàn)過程中曾比較了甲醇-水和乙腈-水流動相系統(tǒng)，2種系統(tǒng)對待測化合物分離的影響不大，但考慮到乙腈毒性較大，且經(jīng)濟(jì)成本較高，故最后選擇甲醇-水流動相系統(tǒng)。另外，還考察了添加甲酸和乙酸銨濃度對待測化合物響應(yīng)值的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)加入甲酸后響應(yīng)值和峰形優(yōu)于乙酸銨，并進(jìn)一步考察了甲酸的比例，發(fā)現(xiàn)0.1‰甲酸能夠改善8種待測化合物的分離效果，峰型得到明顯改善，故確定以甲醇和0.1‰甲酸水為流動相。

3.2 提取溶劑的選擇與確定：本實(shí)驗(yàn)為了提高待測物的提取效率，減少干擾，在制備供試品溶液時，分別考察了30％、50％、80％甲醇作為提取溶劑，結(jié)果表明采用80％甲醇為提取溶劑時，測定的干擾最少，待測物的提取效率最高，故最終選用80％甲醇作為最終提取溶劑。

3.3 檢測條件的選擇：本實(shí)驗(yàn)為獲得較高的靈敏度和準(zhǔn)確度，對檢測條件進(jìn)行了優(yōu)化。首先對所檢待測化合物對照品利用針泵進(jìn)樣方式進(jìn)行全質(zhì)譜掃描，結(jié)果顯示化合物1和2易在負(fù)離子模式下產(chǎn)生［M-H］-，而化合物3～8易在正離子模式下產(chǎn)生準(zhǔn)分子離子峰［M+H］+。另外，采用同一周期正負(fù)離子同時監(jiān)測模式，可以同時保證方法具有較高的靈敏度，又能節(jié)省分析時間［12］。

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（本文編輯：劉斯靜）

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B

1007-3205（2013）02-0227-04

2012-05-15；

2012-06-27

河北省中醫(yī)藥管理局科研計劃項(xiàng)目（2009130）

王昕（1973-），女，河北石家莊人，河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院主管藥師，理學(xué)學(xué)士，從事中藥質(zhì)量控制研究。

*通訊作者。E-mail：yingfengdu@163.com

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.02.039