王文立，閆香庭，張 偉，莫中福，毛麗梅，姜 博

（1.河北省石家莊市第六醫(yī)院婦科，河北石家莊 050081；2.河北省石家莊市第一醫(yī)院神經(jīng)外科，河北石家莊 050011；3.河北省石家莊市第一醫(yī)院麻醉科，河北，石家莊 050011）

·論 著·

p-AKT在卵巢漿液性腫瘤中的表達(dá)及其與增殖和凋亡的相關(guān)性

王文立1，閆香庭1，張 偉2，莫中福1，毛麗梅1，姜 博3

（1.河北省石家莊市第六醫(yī)院婦科，河北石家莊 050081；2.河北省石家莊市第一醫(yī)院神經(jīng)外科，河北石家莊 050011；3.河北省石家莊市第一醫(yī)院麻醉科，河北，石家莊 050011）

目的探討磷酸化AKT蛋白（phosphorylation protein kinase B，p-AKT）在卵巢漿液性腫瘤中的表達(dá)及其與增殖和凋亡的相關(guān)性。方法選擇存檔蠟塊類型，卵巢漿液性囊腺瘤（ovarian serous cystadenoma，OSA）12例，卵巢漿液性交界性腫瘤（ovarian serous borderline tumors，OS-BT）18例，卵巢漿液性囊腺癌（ovary serous cystadenocarcinoma，OSC）46例；另取正常卵巢組織（normal ovarian tissue，NOT）蠟塊10例作為對照。采用免疫組織化學(xué)S-P法測定p-AKT和細(xì)胞周期蛋白cyclin D1的表達(dá)。結(jié)果與NOT組和OSA組比較，OS-BT和OSC組p-AKT、cyclin D1陽性表達(dá)率升高（P＜0.05或P＜0.01）。OSC組p-AKT陽性表達(dá)率隨腫瘤的分化程度的降低而升高（P＜0.01），而cyclin D1陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。p-AKT、cyclin D1的陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（r=0.334、0.371，P＜0.05），p-AKT與cyclin D1蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.606，P＜0.01）。結(jié)論磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B（phosphoinositide 3 kinase/protein kinase B，PI3K/AKT）信號通路可能通過對卵巢漿液性腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)信號傳導(dǎo)通路的調(diào)控，一方面促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖活性，進(jìn)一步增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移的能力。另一方面，通過對腫瘤細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的影響，促進(jìn)內(nèi)源性凋亡抑制物的激活和（或）抑制凋亡相關(guān)蛋白激酶的表達(dá)和活化，抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡。

卵巢腫瘤；1-磷脂酰肌醇4-激酶；蛋白激酶B

磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B（phosphoinositide 3 kinase/protein kinase B，PI3K/AKT）［1-2］信號通路是多種信號傳導(dǎo)通路的相互交叉的重要樞紐點(diǎn)，調(diào)節(jié)多種細(xì)胞外因子的信號傳遞，在細(xì)胞物質(zhì)代謝、細(xì)胞周期的調(diào)控以及血管生成等方面發(fā)揮重要作用。研究［3］表明，在多種腫瘤細(xì)胞系中均可檢測到PI3K/AkT信號通路相關(guān)抑制基因的缺失或失活、PI3K基因的突變或擴(kuò)增、相關(guān)受體或通路下游樞紐分子的激活或活化，然而該信號通路在卵巢漿液性腫瘤中的表達(dá)及其與增殖和凋亡的相關(guān)性所知甚少。細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（cyclin depemdent kinases，CDKs）對細(xì)胞分裂周期起關(guān)鍵作用［4］，細(xì)胞周期由CDKs和CDK抑制蛋白（cyclin-dependent kinase inhibitors，CDKIs）共同調(diào)節(jié)，細(xì)胞周期蛋白cyclin D1的水平對細(xì)胞周期G1/S的轉(zhuǎn)換至關(guān)重要。但它與AKT的關(guān)系目前尚未闡明。本研究擬探討p-AKT在卵巢漿液性腫瘤中的表達(dá)及其與增殖和凋亡的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 存檔蠟塊類型：卵巢漿液性囊腺瘤（ovarian serous cystadenoma，OSA）12例；卵巢漿液性交界性腫瘤（ovarian serous borderline tumors，OS-BT）18例；卵巢漿液性囊腺癌（ovary serous cystadenocarcinoma，OSC）46例，其中包括高分化16例，中分化20例，低分化10例，淋巴轉(zhuǎn)移者22例，無轉(zhuǎn)移24例。另取正常卵巢組織（normal ovarian tissue，NOT）蠟塊10例作為對照。年齡35～64歲，術(shù)前未行放、化療或服用激素類藥物。

1.2 方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P法對NOT、OSA、OS-BT、OSC標(biāo)本中的表達(dá)情況進(jìn)行檢測，光鏡雙盲法下觀察切片，每個標(biāo)本切片取10個高倍視野。

1.3 判定方法：①選染色均勻的陽性表達(dá)區(qū)域，以著色細(xì)胞占視野細(xì)胞總數(shù)的多少分級。0，無陽性細(xì)胞；1，陽性細(xì)胞數(shù)≤25％；2，陽性細(xì)胞數(shù)26％～50％；3，陽性細(xì)胞數(shù)＞50％。②按著色細(xì)胞染色強(qiáng)弱分級。0，陰性；1，弱，淡黃色；2，中等，棕黃色；3，強(qiáng)，棕褐色。按①、②的數(shù)值相加判斷結(jié)果，0～2為陰性（-），3～4為弱陽性（+），5～6為強(qiáng)陽性（++），弱陽性（+）和強(qiáng)陽性（++）均按陽性統(tǒng)計(jì)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性采用直線相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 p-AKT蛋白在卵巢腫瘤中的表達(dá)：p-AKT主要位于細(xì)胞核和細(xì)胞漿，表現(xiàn)為細(xì)胞核和細(xì)胞漿內(nèi)，免疫組織化學(xué)染色表現(xiàn)為棕黃色顆粒。NOT、OSA、OS-BT和OSC 4組p-AKT蛋白陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與NOT、OSA組比較，OSBT、OSC組p-AKT蛋白陽性表達(dá)率明顯升高（P＜0.01）。見表1。

OSC組高分化、中分化、低分化標(biāo)本中p-AKT蛋白陽性表達(dá)率分別為44％、65％和100％，其陽性表達(dá)率有隨腫瘤分化程度降低而升高的趨勢（P＜0.01）。

2.2 cyclin D1蛋白在卵巢腫瘤中的表達(dá)：cyclin D1主要定位于細(xì)胞核和細(xì)胞漿，免疫組織化學(xué)染色表現(xiàn)為細(xì)胞核黃染和細(xì)胞漿內(nèi)有棕黃色顆粒。NOT、OSA、OS-BT和OSC 4組cyclin D1蛋白陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與NOT、OSA組比較，OS-BT、OSC組cyclin D1蛋白陽性表達(dá)率明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）。見表1。

OSC組高分化、中分化和低分化標(biāo)本中cyclin D1蛋白陽性表達(dá)率分別為69％、70％和90％，其陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 4組p-AKT、cyclin D1蛋白陽性表達(dá)比較

2.3 相關(guān)性分析：p-AKT、cyclin D1蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)浸潤轉(zhuǎn)移均呈正相關(guān)（r=0.334、0.371，P＜0.05），p-AKT與cyclin D1蛋白表達(dá)呈相關(guān)（r= 0.606，P＜0.01）。

3 討 論

由于AKT催化區(qū)308位點(diǎn)的蘇氨酸（Thr-308）和碳末端疏水區(qū)絲氨酸473位點(diǎn)（Ser-473）磷酸化是AKT激活的必要條件，磷酸化的AKT即活化的AKT轉(zhuǎn)位到胞質(zhì)中或胞核內(nèi)，通過對一系列底物的磷酸化，激活或抑制其下游靶蛋白Bad（Bcl-2家族成員）、核轉(zhuǎn)錄因子κB、糖原合酶激酶3、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白等，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化、凋亡［5］。所以，p-AKT能很好地反映PI3K/AKT信號傳導(dǎo)通路的激活水平，我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測p-AKT蛋白在標(biāo)本中的表達(dá)間接反映PI3K/AKT的激活水平。

本研究結(jié)果顯示，NOT、OSA、OS-BT和OSC 4組間的p-AKT蛋白陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。OSC組p-AKT蛋白陽性表達(dá)率有隨腫瘤分化程度降低而升高的趨勢（P＜0.01）；p-AKT蛋白陽性表達(dá)率與淋巴結(jié)浸潤轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（r= 0.334，P＜0.05）。

AKT信號傳導(dǎo)途徑在凋亡過程中發(fā)揮了重要的作用［6-7］，但其對凋亡的影響，目前尚缺乏明確的結(jié)論。甚至部分研究結(jié)果相互矛盾，部分研究表明，活化的AKT可直接磷酸化促凋亡蛋白［8］；或直接或間接磷酸化轉(zhuǎn)錄因子家族，負(fù)性調(diào)節(jié)某些促凋亡轉(zhuǎn)錄因子，抑制凋亡的發(fā)生，調(diào)控細(xì)胞存活［9］。

失控性增殖是惡性腫瘤的重要特征之一，癌細(xì)胞旺盛的增殖活性是腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的重要基礎(chǔ)和前提，腫瘤細(xì)胞的增殖受復(fù)雜信號傳導(dǎo)途徑的調(diào)控，細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制的紊亂在其中發(fā)揮著重要的作用，細(xì)胞周期由CDKs和CDKIs共同調(diào)節(jié)，細(xì)胞周期蛋白與CDKs的結(jié)合是CDKs激活的必要條件，cyclin D1在細(xì)胞周期G1/S的轉(zhuǎn)換中至關(guān)重要，決定細(xì)胞周期的啟動及有絲分裂的順利完成［10］。

PI3K/AKT基因突變在卵巢癌的發(fā)生中起重要作用［2］。West等［3］發(fā)現(xiàn)AKT在原發(fā)性卵巢癌中比正常卵巢組織中高表達(dá)，并且AKT的表達(dá)與淋巴結(jié)陽性率明顯相關(guān)；所有卵巢癌細(xì)胞株中都有AKT的陽性表達(dá)，性腺激素通過對PI3K/AKT信號傳導(dǎo)通路的活化提高上皮性卵巢癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。這與本研究結(jié)果相一致。

肖靜等［11］的研究發(fā)現(xiàn)cyclin D1在正常組、良性組、交界性組、惡性組中的陽性率呈逐漸增加趨勢，其中正常組和良性組與惡性組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；cyclin D1的表達(dá)與腫瘤的分化程度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移切相關(guān)。這與本研究結(jié)果相一致。

本研究結(jié)果還顯示p-AKT的表達(dá)與cyclin D1的表達(dá)呈明顯正相關(guān)（r=0.606，P＜0.01）。提示PI3K/AKT信號通路與腫瘤的增殖和凋亡密切相關(guān)。表明AKT信號通路的激活參與了對增殖和凋亡相關(guān)信號途徑的調(diào)控。這與國內(nèi)外相關(guān)的研究結(jié)果相一致。

綜上所述，PI3K/AKT信號通路可能通過對卵巢漿液性腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)信號傳導(dǎo)通路的調(diào)控，一方面促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖活性，進(jìn)一步增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移的能力；另一方面，通過對腫瘤細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的影響，促進(jìn)內(nèi)源性凋亡抑制物的激活和（或）抑制凋亡相關(guān)蛋白激酶的表達(dá)和活化，抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡。因此，PI3K/AKT信號通路可能是卵巢漿液性腫瘤發(fā)生發(fā)展的核心調(diào)控環(huán)節(jié)，從而也成為對其進(jìn)行基因治療的關(guān)鍵靶點(diǎn)。進(jìn)一步深入地研究具有重要的理論和臨床意義。

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（本文編輯：劉斯靜）

R711.59

B

1007-3205（2013）02-0202-03

2012-11-06；

2013-01-17

王文立（1967-），女，河北霸州人，河北省石家莊市第六醫(yī)院主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，從事婦科疾病診治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.02.028