尚 麗，李淑紅，杜琳娜，田 麗，郭占軍

（1.河北省衡水市第四醫(yī)院消化內(nèi)科，河北衡水053000；2.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院消化內(nèi)科，河北石家莊050011）

·論 著·

SIRT-3表達(dá)水平與食管癌患者預(yù)后關(guān)系

尚 麗1，李淑紅1，杜琳娜1，田 麗1，郭占軍2*

（1.河北省衡水市第四醫(yī)院消化內(nèi)科，河北衡水053000；2.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院消化內(nèi)科，河北石家莊050011）

目的探討去乙?；福╯irtuin-3，SIRT-3）在食管癌組織中的表達(dá)水平及與食管癌患者預(yù)后的關(guān)系。方法取80例食管癌腫瘤組織，采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)腫瘤組織SIRT-3蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果食管癌患者中SIRT-3高表達(dá)組生存率低，SIRT-3低表達(dá)組生存率高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論食管癌組織中SIRT-3表達(dá)水平與食管癌術(shù)后患者生存時(shí)間呈負(fù)相關(guān)，SIRT-3表達(dá)在食管癌患者的預(yù)后中具有重要作用。

食管腫瘤；SIRT-3；預(yù)后

食管癌是全球范圍內(nèi)常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率及病死率多年來居高不下［1］。我國是食管癌高發(fā)國家，且大多食管癌患者就診時(shí)為中晚期。食管癌治療手段以根治性手術(shù)切除、化學(xué)治療、放射治療綜合治療為主，雖然目前食管癌的臨床診療有了快速發(fā)展，但其易復(fù)發(fā)、預(yù)后差的情況未明顯改觀，并且其致病原因及發(fā)病機(jī)制尚未完全明確。目前認(rèn)為食管癌是一個(gè)多因素、多基因共同參與的復(fù)雜過程，其發(fā)病重要的危險(xiǎn)因素除了包括亞硝酸胺類化合物攝入、真菌、微量元素缺乏等因素外，氧化損傷、基因的單核苷酸多態(tài)性等因素與食管癌發(fā)病過程也存在密切關(guān)系［2］。本研究探討去乙?；福╯irtuin-3，SIRT-3）蛋白在食管癌組織中的表達(dá)水平與食管癌患者預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇2002年9月—2007年9月在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院胸外科住院的手術(shù)患者80例，經(jīng)胃鏡加組織病理確診為食管癌。術(shù)前未進(jìn)行放化療，行食管癌根治術(shù)，術(shù)后病理皆明確診斷為食管癌。80例患者中男性55例，女性25例，年齡33～77歲，平均（57.3±5.2）歲。詳細(xì)記錄患者腫瘤位置、大小、病理類型、臨床分期等臨床資料；術(shù)后每3個(gè)月電話隨訪1次，共隨訪5年。

1.2 研究方法：取手術(shù)切除的食管癌組織標(biāo)本放入10％甲醛中固定24h，常規(guī)石蠟包埋，切成4μm厚切片。用免疫組織化學(xué)SP法測(cè)定食管癌組織標(biāo)本中SIRT-3表達(dá)。依次經(jīng)脫蠟、梯度水化、3％H2O2溶液室溫下孵育5～10min、PBS振洗、微波抗原熱修復(fù)、山羊血清封閉、PBS振洗，滴入多克隆兔抗人SIRT-3抗體（香港Abcam公司）、濕盒內(nèi)4℃孵育過夜。再用PBS振洗、滴加親和素過氧化物酶復(fù)合物37℃濕育30min。最后用PBS振洗，DAB顯色、蘇木素復(fù)染、脫水、封片、顯微鏡下計(jì)數(shù)。用PBS代一抗做陰性對(duì)照。

1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷：光鏡下，SIRT-3蛋白表達(dá)主要定位在細(xì)胞線粒體，少量存在于細(xì)胞核中，陽性染色的線粒體中呈現(xiàn)出黃色細(xì)顆粒。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，單因素分析采用χ2檢驗(yàn)，多因素分析采用Cox回歸。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

患者性別、年齡、腫瘤長徑、腫瘤位置、病理分型均與食管癌患者生存時(shí)間無關(guān)（P＞0.05）；不同臨床分期的生存時(shí)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），臨床分期越高生存率越低；SIRT-3高表達(dá)組生存率明顯低于SIRT-3低表達(dá)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表1。

將單因素分析中組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素納入Cox回歸進(jìn)行多因素分析，SIRT-3高表達(dá)組與低表達(dá)組的生存時(shí)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P= 0.046），SIRT-3低表達(dá)組的死亡風(fēng)險(xiǎn)是高表達(dá)組的0.516倍，證實(shí)SIRT-3蛋白表達(dá)水平是食管癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素。同樣，臨床分期也可作為食管癌患者預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子（P=0.000，RR= 2.635，95％CI=1.565～4.438）。見表2。

表1 食管癌患者各單因素與術(shù)后生存期的關(guān)系Table 1 Correlation between factors and post-operative survival in esophageal carcinoma patients（n，％）

Tumor location Up-part Middle-part Under-part 10 55 15 30.0 30.9 53.3 1.605 0.317 Clinical stages 0+ⅠⅡⅢ6 48 26 83.3 43.8 7.7 10.018 0.000 Pathological classification Squamous carcinoma Adenocarcinoma Small cell carcinoma 72 4 4 36.1 25.0 25.0 1.221 0.998 The expression of SIRT-3 Overexpression Underexpression 53 27 24.5 55.6 8.382 0.004

表2 食管癌患者術(shù)后Cox回歸多因素分析Table 2 M ultivariate analysis of prognosis factorsw ithpost-operative survival in esophageal carcinoma patients w ith Cox proportional hazardsmodel

3 討 論

Sirtuins是一類高度保守的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸依賴的去乙酰化酶家族。在哺乳動(dòng)物中，Sirtuins共有7個(gè)同源蛋白，分別命名為SIRT-1～7，每種蛋白有不同的細(xì)胞靶標(biāo)和細(xì)胞定位。Sirtuins在細(xì)胞分化、能量代謝、細(xì)胞氧化狀況、有絲分裂調(diào)控、抗凋亡等方面發(fā)揮重要的作用，是調(diào)節(jié)細(xì)胞壽命的關(guān)鍵因素，與腫瘤、代謝性疾病、退行性疾病等疾病的發(fā)病、預(yù)后有明顯的聯(lián)系［3］。

SIRT-3是Sirtuins家族重要成員之一，對(duì)抗衰老和癌癥發(fā)生的作用較明顯。SIRT-3大部分存在于線粒體基質(zhì)中，少量存在于細(xì)胞核中［4］。SIRT-3定位于11號(hào)染色體（11p15.5），它通過調(diào)控錳超氧化物歧化酶（manganese superoxide dismutase，MnSOD）、超氧化物歧化酶2（superoxide dismutase 2，SOD2）、谷脫甘肽（glutathione，GSH）等多種線粒體蛋白的乙?；揎?，從而影響細(xì)胞內(nèi)的活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平和能量代謝水平［5］，而ROS的產(chǎn)生和清除失衡會(huì)造成線粒體腫脹，膜通透性增加，釋放出凋亡因子，啟動(dòng)細(xì)胞凋亡信號(hào)通路，ROS對(duì)生物大分子（特別是DNA）的氧化損傷被認(rèn)為是啟動(dòng)和促進(jìn)腫瘤發(fā)生的重要因素［6］。SIRT-3是調(diào)節(jié)能量平衡的關(guān)鍵，SIRT-3的缺乏會(huì)導(dǎo)致線粒體過度乙?；?，造成線粒體功能改變，進(jìn)而造成細(xì)胞能量代謝、有絲分裂等方面出現(xiàn)異常。SIRT-3在乳腺癌及其他多種腫瘤中較正常組織細(xì)胞中的表達(dá)水平均有不同程度的下降，所以SIRT-3可能作為線粒體內(nèi)的腫瘤抑制蛋白存在，它通過加強(qiáng)細(xì)胞抗氧化保護(hù)系統(tǒng)，抑制ROS及缺氧誘導(dǎo)因子達(dá)到抑制腫瘤生長的作用［7］。

目前SIRT-3在腫瘤細(xì)胞中的起抑制還是促進(jìn)作用尚存在爭議。SIRT-3可促進(jìn)細(xì)胞分裂速度，加快細(xì)胞增殖；SIRT-3的過量表達(dá)使腫瘤細(xì)胞間黏附性下降，易發(fā)生遷移；還可能通過對(duì)代謝產(chǎn)生的各種影響，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的存活。SIRT-1和SIRT-3在淋巴結(jié)陽性的乳腺癌中轉(zhuǎn)錄水平增高［8］。在膀胱癌細(xì)胞中，SIRT-3發(fā)揮去乙?；缸饔茫筽53失活，進(jìn)而阻止腫瘤細(xì)胞衰老。目前已發(fā)現(xiàn)SIRT3有多種底物［9］，可能存在于細(xì)胞不同階段的多種生物學(xué)過程，SIRT-3是否在腫瘤的發(fā)展過程中的不同階段分別起到抑制或促進(jìn)的作用，還有待進(jìn)一步確認(rèn)。

本研究結(jié)果顯示，食管癌組織中SIRT-3低表達(dá)組較高表達(dá)組生存率高，即食管癌組織SIRT-3表達(dá)水平與食管癌患者術(shù)后生存時(shí)間呈負(fù)相關(guān)?？赡芘c細(xì)胞中大量ROS引起細(xì)胞大分子氧化損傷，使食管癌腫瘤細(xì)胞生長較快，引起SIRT-3反應(yīng)性的表達(dá)量增高有關(guān)；SIRT-3高表達(dá)可以促進(jìn)細(xì)胞分裂速度，加快腫瘤細(xì)胞的增殖，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，也可能是SIRT-3高表達(dá)組生存率較低的原因；SIRT-3過量表達(dá)還使腫瘤細(xì)胞黏附性下降，遷徙速度加快，使腫瘤較早發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，影響食管癌患者預(yù)后。

綜上所述，食管癌SIRT-3的表達(dá)水平影響食管癌術(shù)后患者的生存時(shí)間，是食管癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素。影響食管癌患者預(yù)后的因素十分復(fù)雜，臨床分期等臨床特征影響食管癌患者的生存期，同時(shí)SIRT-3對(duì)食管癌術(shù)后患者預(yù)后的影響不容忽視。本研究證實(shí)SIRT-3表達(dá)水平與食管癌的預(yù)后相關(guān)，雖然對(duì)SIRT-3在腫瘤預(yù)后中作用的研究仍處于初級(jí)階段，但結(jié)果令人鼓舞。這利于建立生存預(yù)測(cè)模型，為以SIRT-3為靶點(diǎn)的藥物研制提供新的方向，為未來食管癌治療提供了新思路，對(duì)于術(shù)后食管癌患者預(yù)后評(píng)估有很大的潛在價(jià)值。

［1］ PARKIN DM，BRAV F，F(xiàn)ERLAV J，et al.Global cancer statistics，2002［J］.CA Cancer JClin，2005，55（2）：74-108.

［2］ 孫國貴，王雅隸，李成林，等.錳超氧化物岐化酶過量表達(dá)對(duì)食管癌細(xì)胞增殖的影響［J］.中華腫瘤雜志，2011，33（8）：583-589.

［3］ PALLASM，CASADESUS G，SMITH MA，et al.Resveratrol and neurodegenerative diseases：activation of SIRT-1 as the potential pathway towards neuroprotection［J］.Curr Neurovasc Res，2009，6（1）：70-81.

［4］ SCHER MB，VAQUERO A，et al.Sirt3 is a nuclear NAD+ dependent histone deacetylase that translocates to themitochondria upon cellular stress［J］.Genes Dev，2007，21（8）：920-928.

［5］ QIU X，BROWN K，HIRSCHEY MD，et al.Calorie restriction reduces oxidative stress by SIRT3-mediated SOD2 activation［J］. Cell Metab，2010，12（6）：662-667.

［6］ DAYAL D，MARTIN SM，LIMOLI CL，et al.Hydrogen peroxide mediates the radiation-induced mutator phenotype in mammalian cells［J］.Biochem J，2008，413（1）：185-191.

［7］ ANDERSON KA，HIRSCHEY MD.Mitochondrial protein acetylation regulates etabolism［J］.Essays Biochem，2012，52：23-35.

［8］ ALHAZZAZITY，KAMARAJAN P，VERDIN E，et al.SIRT3 and cancer：tumor promoter or suppressor？［J］.Biochim Biophys Acta，2011，1816（1）：80-88.

［9］ ASHRAF N，ZINO S，MACINCYRE A，et al.Altered sirtuin expression is associated with node-positive breast cancer［J］.Br J Cancer，2006，95（8）：1056-1061.

（本文編輯：趙麗潔）

EXPRESSION OF SIRT-3 AND ASSOCIATION W ITH ESOPHAGEAL CARCINOMA PROGNOSIS

SHANG LI1，LIShuhong1，DU Linna1，TIAN Li1，GUO Zhanjun2*
（1.Department of Gastroenterology，the Fourth Hospital of Hengshui City，Hebei Province，Hengshui053000，China；
2.Department of Gastroenterology，the Fourth Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050011，China）

ObjectiveTo explore the expression of sirtuin-3（SIRT-3）in esophageal carcinoma and its association with the patients'prognosis.MethodsSIRT-3 in specimens resected from 80 esophageal carcinoma tissueswere derected by immunohistochemicalmethod.ResultsThe survival rate of SIRT-3 under expression group was low，conversely，the survival rate of SIRT-3 low expression group was high，the difference was statistically significant（P＜0.01）.ConclusionThere is negative correlation between the expression of SIRT-3 in esophageal carcinoma tissues and the survival time of patientswith esophageal carcinoma，and the expression of SIRT-3 may play a very important role in the prognosis of esophageal carcinoma patients.

esophageal neoplasms；sirtuin-3；prognosis

R735.1

A

1007-3205（2013）08-0899-03

2013-02-21；

2013-03-26

尚麗（1975-），女，河北衡水人，河北省衡水市第四醫(yī)院主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事消化內(nèi)科疾病診治研究。

*通訊作者

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.08.011