王榮榮宋 寧劉曉秋

1.武警廣西總隊(duì)醫(yī)院藥劑科，廣西 南寧 530003；2.沈陽(yáng)藥科大學(xué)中藥學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110016

薺菜中黃酮類成分的積累變化研究

王榮榮1宋 寧2劉曉秋2

1.武警廣西總隊(duì)醫(yī)院藥劑科，廣西 南寧 530003；2.沈陽(yáng)藥科大學(xué)中藥學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110016

目的：測(cè)定薺菜不同生長(zhǎng)期及不同藥用部位中主要黃酮類成分2″－O－α－L－阿拉伯糖異葒草苷的含量，確定該成分在生長(zhǎng)過(guò)程中的變化規(guī)律及其在不同藥用部位中的分布規(guī)律。方法：采用HPLC法，以2″－O－α－L－阿拉伯糖異葒草苷為對(duì)照，在270 nm測(cè)定2″－O－α－L－阿拉伯糖異葒草苷的含量。色譜柱Diamonsil C18（5μm，200×4.6 mm），流動(dòng)相乙腈－0.05%磷酸溶液（20∶80）；流速（0.8mL·min－1）；結(jié)果：2″－O－α－L－阿拉伯糖異葒草苷在21.0～210.0μg·ml－1線性關(guān)系良好；平均回收率99.8%，RSD 2.0%（n＝9）。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)單、靈敏、準(zhǔn)確、可靠?？捎糜谒j菜中主要黃酮成分2″－O－α－L－阿拉伯糖異葒草苷的含量測(cè)定，為薺菜的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。

薺菜；黃酮；2″－O－α－L－阿拉伯糖異葒草苷；含量；分布規(guī)律

薺菜為十字花科（Cruciferae）植物薺菜Capsella bursapastoris（L.）Medic.的干燥全草，具有平肝明目、和胃消滯的功效。民間用于治療目赤腫痛、腎炎水腫、乳糜尿等多種疾病。國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)其進(jìn)行了化學(xué)成分及藥理作用研究，分離得到了黃酮類［1］、有機(jī)酸類［2－3］、生物堿類［4］、氨基酸類及糖類［5］等成分，藥理研究表明薺菜具有降壓［6］、舒張血管、止血、收縮子宮［7］等作用，薺菜中的黃酮類成分具有抗炎［8］、抗氧化［9］等作用。薺菜在江蘇、上海等地方標(biāo)準(zhǔn)及中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)藏藥版均有收載，蒙醫(yī)藥醫(yī)籍中也有收載，但這些標(biāo)準(zhǔn)中僅對(duì)其進(jìn)行性狀與顯微鑒別。近年來(lái)本研究組對(duì)薺菜中的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從中分離得到了近10個(gè)黃酮類化合物［10－11］，其中2″－O－α－L－阿拉伯糖異葒草苷在薺菜中的含量較高，推測(cè)其為主要活性成分。試驗(yàn)中收集了不同生長(zhǎng)期薺菜藥材，并建立了HPLC法，測(cè)定了不同生長(zhǎng)期薺菜藥材以及不同藥用部位中2″－O－α－L－阿拉伯糖異葒草苷的含量，為薺菜的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

Shimadzu HPLC色譜儀（LC－10 Atvp泵，DAD檢測(cè)器，Class－vp工作站，日本島津公司）；乙腈（色譜純，江蘇漢邦科技有限公司）；純凈水 （杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司），其余均為分析純。

2″－O－α－L－阿拉伯糖異葒草苷對(duì)照品由本實(shí)驗(yàn)室自制，結(jié)構(gòu)經(jīng)譜學(xué)分析鑒定［11］，HPLC歸一化法檢測(cè)其純度為99.3%。薺菜藥材采自沈陽(yáng)市萬(wàn)柳塘公園，經(jīng)沈陽(yáng)藥科大學(xué)袁久志副教授鑒定為十字花科植物薺菜Capsella bursa－pastoris（L.）Medic的全草，存放于沈陽(yáng)藥科大學(xué)中藥分析室。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（5μm，200×4.6 mm）；流動(dòng)相：乙腈－0.05%磷酸溶液（20∶80）；流速：0.8 ml·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm。在此條件下，樣品中2″－O－α－L－阿拉伯糖異草苷峰與其它色譜峰能達(dá)到基線分離，保留時(shí)間在29 min左右，對(duì)照品與供試品的色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備 精密稱取2″－O－α－L－阿拉伯糖異葒草苷對(duì)照品2.1mg，置10ml量瓶中，加甲醇超聲15min使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.3 供試品溶液的制備 稱取薺菜粉末2.0g，置具塞

錐形瓶中，加入體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇100m l，密塞，浸泡1h后，回流提取，加熱至微沸，并保持微沸1h，放冷，濾過(guò)，濾液60℃下減壓蒸干，用體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇定容至25m l量瓶中，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液，稀釋得到質(zhì)量濃度分別為21.0、42.0、84.0、126.0、168.0、210.0μg ·ml－1的對(duì)照品溶液，各進(jìn)樣10μl，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），濃度（X）為橫坐標(biāo)，得回歸方程Y＝4.2290×104X＋1.5043×102，r＝0.9998），表明在21.0～210.0μg· m l－1線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 取質(zhì)量濃度為42.0μg·ml－1的對(duì)照品溶液，按照2.1項(xiàng)下色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，RSD為1.3%，表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一樣品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件，于0、4、8、12、24h分別進(jìn)樣，峰面積RSD為1.7%。表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 稱取同批樣品6份，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，平均值為0.11%，RSD為1.6%，表明重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn) 稱取同批樣品9份，約1.0g（含量1.100mg），精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別加入一定量的對(duì)照品溶液，按2.3操作制備加樣回收供試品溶液，在2.1項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算平均回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 不同生長(zhǎng)期藥材及不同藥用部位中含量測(cè)定結(jié)果 稱取不同生長(zhǎng)期的薺菜全草粉末各2.0g，按2.2與2.3項(xiàng)下方法制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，并按2.1項(xiàng)下色譜條件操作，采用外標(biāo)法計(jì)算2″－O－α－L－阿拉伯糖異葒草苷的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。稱取果期薺菜的不同部位 （根、莖、葉、花、果實(shí)和全草）粉末各2.0g，測(cè)定2″－O－α－L－阿拉伯糖異葒草苷的含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 不同生長(zhǎng)期薺菜中2″－O－α－L－阿拉伯糖異葒草苷含量測(cè)定結(jié)果

表3 薺菜不同藥用部位中2″－O－α－L－阿拉伯糖異葒草苷含量測(cè)定結(jié)果

由表2可以看出，果期的薺菜中含量最高，初生期嫩葉中含量最低，說(shuō)明薺菜在生長(zhǎng)過(guò)程中黃酮類成分的含量呈逐漸增加的趨勢(shì)。表3結(jié)果顯示，薺菜的不同藥用部位中，果實(shí)中2″－O－α－L－阿拉伯糖異葒草苷的含量最高，其次為花，根中含量最低。

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)建立了HPLC法，測(cè)定了薺菜不同生長(zhǎng)期以及不同藥用部位中主要黃酮成分2″－O－α－L－阿拉伯糖異葒草苷的含量，試驗(yàn)結(jié)果表明該方法簡(jiǎn)便、快速、可靠，可作為薺菜藥材的質(zhì)量控制方法。

異葒草苷類黃酮具有抗心肌缺血的作用［12］，2″－O－α－L－阿拉伯糖異葒草苷是在異葒草苷上連接一個(gè)阿拉伯糖，推測(cè)其也具有抗心肌缺血的作用，并且其在薺菜中的含量較高，因此選擇2″－O－α－L－阿拉伯糖異葒草苷作為含量測(cè)定成分。

二極管陣列檢測(cè)器得到的2″－O－α－L－阿拉伯糖異葒草苷紫外光譜圖中在270nm和350nm處有最大吸收，在270nm處，供試品中其它色譜峰對(duì)2″－O－α－L－阿拉伯糖異葒草苷色譜峰的干擾較小，因此選擇270nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

不同藥用部位中，2″－O－α－L－阿拉伯糖異葒草苷在果實(shí)和花中的含量最高，但二者在全草中的生物量較小，其在全草中的含量?jī)H次于果實(shí)和花，因此今后對(duì)薺菜全草的開(kāi)發(fā)利用將具有更為廣闊的前景。

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R282.71

A

1007－8517（2013）09－0014－02

2013.03.12）

王榮榮 （1985.7－），女，碩士研究生，藥師，武警廣西總隊(duì)醫(yī)院藥劑科，主要從事中藥質(zhì)量控制方面的工作。E－Mail：zhizihuakai722＠163.com。

劉曉秋，女，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范化研究及中藥新藥的研究。