蔡旭清，黃道連

(1、中山市火炬開(kāi)發(fā)區(qū)醫(yī)院檢驗(yàn)科,廣東中山528437；2、南方醫(yī)科大學(xué)附屬博愛(ài)醫(yī)院檢驗(yàn)科,廣東中山528400)

59例小兒特發(fā)性血小板減少性紫癜檢驗(yàn)結(jié)果分析

蔡旭清1，黃道連2

(1、中山市火炬開(kāi)發(fā)區(qū)醫(yī)院檢驗(yàn)科,廣東中山528437；2、南方醫(yī)科大學(xué)附屬博愛(ài)醫(yī)院檢驗(yàn)科,廣東中山528400)

目的分析特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)小兒患者骨髓巨核細(xì)胞及血小板形態(tài)學(xué)改變和過(guò)敏指標(biāo)的結(jié)果變化。方法對(duì)59例ITP小兒患者進(jìn)行骨髓巨核細(xì)胞形態(tài)、血小板形態(tài)觀察及嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)和過(guò)敏原三項(xiàng)檢測(cè)，并對(duì)21例骨髓形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)大致正常的對(duì)照組，進(jìn)行同樣實(shí)驗(yàn)。結(jié)果91.5%ITP患兒骨髓巨核細(xì)胞漿上可見(jiàn)空泡、50.8%可見(jiàn)幼稚巨核細(xì)胞產(chǎn)板現(xiàn)象、88.1%出現(xiàn)血小板形態(tài)異常、83.1%骨髓嗜酸性粒細(xì)胞增多、72.9%血清lgE升高，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論巨核細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變對(duì)確診ITP有重要意義,骨髓嗜酸性粒細(xì)胞增多及血清IgE水平增高，有助于ITP鑒別診斷和治療。

特發(fā)性血小板減少性紫癜；巨核細(xì)胞；嗜酸性粒細(xì)胞；形態(tài)學(xué)過(guò)敏原IgE。

特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)又稱免疫性血小板減少癥[1]，一般認(rèn)為ITP發(fā)生是自身抗體致敏的血小板被單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)過(guò)度破壞所致[2]。近年來(lái),對(duì)ITP發(fā)病機(jī)制的研究取得了一系列重要進(jìn)展，特別在體液免疫機(jī)制方面,對(duì)自身抗體產(chǎn)生的研究有了明顯進(jìn)展,并提出了由自身抗體介導(dǎo)引起的巨核細(xì)胞數(shù)量和質(zhì)量異常.我們觀察了59例ITP患兒的骨髓巨核細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，并作了嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)及過(guò)敏原三項(xiàng)(血清總IgE、吸入性過(guò)敏原、食物過(guò)敏原)檢測(cè)，現(xiàn)將檢測(cè)結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象來(lái)自2010年2月至2012年9月在中山市火炬開(kāi)發(fā)區(qū)醫(yī)院和中山市博愛(ài)醫(yī)院住院治療的患兒，59例確診為ITP，符合《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》[3]，年齡5d～10歲，中位年齡3歲，其中男32例，女27例?；純河胁煌潭鹊某鲅Y狀，主要以下肢皮膚出現(xiàn)淤點(diǎn)和淤斑為主。PLT為(10～70)×109/L，其中(10～20)×109/L者40例，(20～60)× 109/L者15例，PLT在(60～70)×109/L者4例。另外，選取骨髓形態(tài)學(xué)檢查符合大致正常骨髓象的21例小兒作為對(duì)照組，年齡3月～7歲，中位年齡4歲,血小板計(jì)數(shù)(135～320)×109/L。

1.2 儀器Olympus-CX21顯微鏡，過(guò)敏原檢測(cè)儀-Unicap 100。

1.2 方法

1.2.1 常規(guī)采集ITP患兒和對(duì)照組小兒的骨髓(胸骨或脛骨或髂骨)，進(jìn)行涂片、瑞-姬氏染色后，油鏡下分類計(jì)數(shù)200個(gè)骨髓有核細(xì)胞及觀察巨核細(xì)胞形態(tài)和血小板形態(tài)[4]。

1.2.2 采集ITP患兒靜脈血，分離血清在過(guò)敏原檢測(cè)儀-Unicap 100機(jī)上檢測(cè)總IgE、吸入性過(guò)敏原和食物過(guò)敏原。使用原裝配套試劑和質(zhì)控品，嚴(yán)格按儀器操作規(guī)程和試劑說(shuō)明書操作。

1.2.3 在油鏡下常規(guī)有核細(xì)胞分類及觀察巨核細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)及產(chǎn)板情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 13.0軟件對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行配對(duì)資料的卡方檢驗(yàn)，P＜0.01為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 91.5%ITP患兒骨髓中可見(jiàn)到胞漿上有空泡的巨核細(xì)胞，該類巨核細(xì)胞邊緣包裹了一層淺藍(lán)色的物質(zhì)，形成內(nèi)漿有淺紅色顆粒，外漿無(wú)顆粒呈現(xiàn)“向日葵花樣”形態(tài)(圖1)。50.8%(30/59)患兒骨髓中可見(jiàn)到幼稚巨核細(xì)胞產(chǎn)小血小板現(xiàn)象(圖2)，88.1% (52/59)患兒骨髓或外周涂片中可見(jiàn)形態(tài)異常的血小板(體積巨大、條帶狀、毛毛蟲(chóng)狀，葫蘆狀等形態(tài))，見(jiàn)表1。

2.2 83.1%ITP患兒骨髓嗜酸性粒細(xì)胞比例增高(≥2.5%)，外周血嗜酸性粒細(xì)胞基本正常，見(jiàn)表2。

2.3 72.9%ITP患兒過(guò)敏原檢測(cè)中血清IgE增高，吸入性過(guò)敏原和食物性過(guò)敏原基本正常見(jiàn)表3。

表1 ITP患者與對(duì)照組骨髓巨核細(xì)胞系形態(tài)比較

表3 ITP患兒與對(duì)照組血清過(guò)敏原三項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果比較

圖1 "葵花樣"巨核細(xì)胞

圖2 幼稚巨核細(xì)胞產(chǎn)板現(xiàn)象

3 討論

目前公認(rèn)ITP是一種獲得性器官特異性自身免疫性疾病,是由于人體內(nèi)產(chǎn)生抗血小板自身抗體導(dǎo)致單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)破壞血小板過(guò)多而造成的血小板減少,人體外來(lái)抗原與宿主細(xì)胞或細(xì)胞外成份有相似的抗原表位,那么兩者即呈分子擬態(tài)。人體針對(duì)外來(lái)抗原產(chǎn)生的抗體既可作用于外來(lái)抗原,也可作用于與外來(lái)抗原表位分子結(jié)構(gòu)相似的自身抗原,即交叉反應(yīng)。人體感染的某些病毒抗原可能與血小板成份有相似的抗原表位,則人體針對(duì)該病毒產(chǎn)生的抗體,既可作用于該病毒,也可作用于與該病毒抗原表位分子結(jié)構(gòu)相似的血小板抗原,從而破壞血小板,導(dǎo)致血小板減少。

本研究59例患者除了進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)、血小板功能試驗(yàn)、凝血功能檢查、嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)和過(guò)敏原檢測(cè)等相關(guān)檢查外，均行骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查，并排除了某些以血小板減少為首發(fā)表現(xiàn)的血液系統(tǒng)疾病，并發(fā)現(xiàn)絕大多數(shù)患者巨核細(xì)胞數(shù)正?；蛟龆嗖槌墒煺系K以及產(chǎn)板不良，血小板形態(tài)異常,可見(jiàn)巨大血小板，ITP組的成熟產(chǎn)板型巨核細(xì)胞數(shù)明顯低于對(duì)照組，與國(guó)外報(bào)道相近[5]。

本研究結(jié)果顯示有83.1%(49/59)ITP患者骨髓中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)明顯增高，相關(guān)機(jī)制尚不明確，也未見(jiàn)有關(guān)報(bào)道，可能某些病毒感染剌激機(jī)體產(chǎn)生相關(guān)抗體或患者體內(nèi)某些過(guò)敏原升高，剌激機(jī)體加速產(chǎn)生嗜酸性粒細(xì)胞，產(chǎn)生速發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，從而使血小板急劇下降，我們認(rèn)為骨髓嗜酸性粒細(xì)胞增高可作為ITP的診斷指標(biāo)之一。

我們資料顯示72.9%(43/59)ITP患兒血清IgE增高，與黃凱等調(diào)查的南昌地區(qū)兒童變態(tài)反應(yīng)性疾病患兒75.8%IgE水平增高的結(jié)果相似[6]，說(shuō)明ITP發(fā)病與過(guò)敏反應(yīng)有關(guān)，但過(guò)敏原分布情況及特點(diǎn)不同，ITP患兒的吸入性過(guò)敏原和食物過(guò)敏原陽(yáng)性率與正常對(duì)照差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，說(shuō)明ITP發(fā)生與吸入性過(guò)敏原和食物過(guò)敏原無(wú)關(guān)，ITP發(fā)病的過(guò)敏反應(yīng)機(jī)制仍需進(jìn)一步研究，而黃凱等報(bào)道的南昌地區(qū)兒童過(guò)敏性紫癜、哮喘、過(guò)敏性鼻

炎和鼻竇炎等四種過(guò)敏性疾病與食物過(guò)敏原和吸入過(guò)敏原有關(guān)。可能與本區(qū)環(huán)境因素有關(guān)(化工廠，建筑工地，粉塵，花粉)個(gè)人衛(wèi)生和個(gè)體差異等有關(guān)。吸入性變態(tài)反應(yīng)原引起的過(guò)敏反應(yīng)又以屋塵螨，粉塵螨，屋塵為主，且好發(fā)于0~18歲[7]。

根據(jù)《診斷學(xué)》標(biāo)準(zhǔn)：巨核細(xì)胞數(shù)正常值為每4.5cm27~35個(gè)，以此判斷巨核細(xì)胞數(shù)正常、增加或減少。ITP患者典型骨髓象示：骨髓有核細(xì)胞增生活躍，巨核細(xì)胞增多伴成熟障礙。鑒于國(guó)內(nèi)的骨髓增生異常綜合征、白血病等疾病發(fā)病年齡較年輕，約為40歲[8],該類疾病可以與ITP有相似的臨床表現(xiàn)且外周血涂片不易確診，故2009年威海會(huì)議專家們提出新的ITP診斷建議：(1)多次化驗(yàn)血小板計(jì)數(shù)減少，血細(xì)胞形態(tài)無(wú)異常；(2)脾臟不增大；(3)骨髓檢查：巨核細(xì)胞數(shù)增多或正常、有成熟障礙；(4)須排除先天性血小板減少、假性血小板減少和其他繼發(fā)性血小板減少癥。

本研究發(fā)現(xiàn)91.5%(54/59)ITP患者骨髓各階段巨核細(xì)胞中部分巨核細(xì)胞胞漿出現(xiàn)空泡，細(xì)胞邊緣包裹一層淺藍(lán)色的物質(zhì)，呈現(xiàn)葵花樣，可能是ITP患者體內(nèi)產(chǎn)生的血小板抗體，與巨核細(xì)胞表面抗原結(jié)合形成抗原-抗體復(fù)合物，形成一層淺藍(lán)色的物質(zhì)包裹在細(xì)胞的外層，影響了胞膜結(jié)構(gòu)，從而影響了巨核細(xì)胞血小板的生成和釋放，50.8%(30/ 59)患兒骨髓中可見(jiàn)到幼稚巨核細(xì)胞產(chǎn)小血小板現(xiàn)象。我們認(rèn)為血小板減少患者血清中IgE增高、骨髓嗜酸性粒細(xì)胞比例增高、骨髓中見(jiàn)幼稚巨核細(xì)胞產(chǎn)小血小板和葵花樣巨核細(xì)胞等現(xiàn)象，可作為ITP鑒別診斷重要依據(jù)。

[1]Ruggeri M,Fortuna S,Rodeghiero F.Heterogeneity of terminology and clinical definitions in adult idiopathic thrombocytopenic purpura:a critical appraisal from a systematic review of the literature [J].Haematologica,2008,93(1):98-103.

[2]張琳琳,賈永前,黃文芳,等.原發(fā)性血小板減少性紫癜兩種血小板相關(guān)抗體檢測(cè)方法的比較[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2006,27(7):592．

[3]張之南.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)[M].第3版.北京:北京科技出版社,1998:281-282.

[4]葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].第3版.南京:東南大學(xué)出版社,2006:145-154.

[5]Romero-Guzmán LT,López-Karpovitch X,Paredes R,et al.Detection of platelet-associated immunoglobulins by flow cytometry for the diagnosis of immune thrombocytopenia:a prospective study and critical review[J].Haematologica,2000,85(6):627-631.

[6]黃凱,柯江維,王曄.南昌地區(qū)兒童過(guò)敏原IgE抗體體外檢測(cè)結(jié)果與分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012,30(3):291-293.

[7]于國(guó)芳,譚立明,李華,等.吸入性變應(yīng)原檢測(cè)對(duì)診斷過(guò)敏性疾病的臨床應(yīng)用[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012,30(3):230-232.

[8]候明.成人特發(fā)性血小板減少性紫癜的規(guī)范化診斷與治療[J].臨床血液學(xué)雜志,2008,21(1):3-4.

Analysis of experimental results in 59 children with Idiopathic thrombocytopenic purpura

CAI Xuqing，HUANG Daolian. Clinical Laboratory,Hospital of Torch Development Zone of Zhongshan City,Guangdong Zhongshan 528437,China

Abstrac:ObjectiveTo analyse the morphologic changes of bone marrow megakaryocytes and platelets and allergy index changes in children with idiopathic thrombocytopenic purpura(ITP).Methods Fifty-nine children with ITP were enrolled to undergo morphology observation of bone marrow megakaryocyte and platelet，eosinophil counts and allergen detection.Results Vacuoles were visible in cytoplasma of bone marrow megakaryocytes in 91.5%ITP children.Immature megakaryocytes were observed producing platelets in 50.8%ITP children.88.1%ITP children had platelet morphologic abnormalities.The numbers of bone marrow eosinophil increased in 83.1%ITP children，and the levels of peripheral blood IgE increased in 72.9%ITP children.Conclusions Morphological changes of megakaryocyte have important significance in final diagnosis of ITP,the increase of bone marrow eosinophilia and serum IgE is helpful to differential diagnosis and therapy of ITP.

Idiopathic thrombocytopenic purpura;Megakaryocyte;Eosinophil;Morphology;Allergen IgE

R331.1+43,R558+.1,R446.11+1

A

1674-1129(2013)01-0031-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.01.011

蔡旭清，女，1972年生，大專，主管檢驗(yàn)技師，從事醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)工作。