全媛，王平平

(泰州市第二人民醫(yī)院檢驗科，江蘇泰州225500)

兩種定量檢測D-二聚體方法的比較

全媛，王平平

(泰州市第二人民醫(yī)院檢驗科，江蘇泰州225500)

D-二聚體；檢測；方法比較

D-二聚體(D-dimer,D-D)是反映已交聯(lián)的纖維蛋白被纖溶酶降解的特異性分子標(biāo)記物，是血栓性疾病的唯一標(biāo)記物，它能有效地確定有無穩(wěn)定的纖維蛋白存在。它的生成或增高反應(yīng)了凝血和纖溶系統(tǒng)的激活，其血漿中的水平可代表體內(nèi)凝血酶的活性及纖維蛋白的生成情況，可以作為體內(nèi)血栓形成的指標(biāo)之一[1]。近年來，定量檢測D-二聚體含量已成為排查深靜脈血栓(DVT)、肺栓塞(PE)、彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)等血栓性疾病的重要手段之一，并作為溶血栓治療的動態(tài)監(jiān)測指標(biāo)[2]。但是不同的檢測方法D-二聚體結(jié)果通常不一致

[3]，現(xiàn)將本院兩種檢測D-二聚體的方法進(jìn)行比較，結(jié)果如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 免疫比濁法采用美國IL公司ACL-9000全自動血凝儀及其配套D-D檢測試劑。

1.1.2 VIDAS測D-D：采用法國生物梅里埃D-D檢測試劑，在VIDAS儀器按操作說明進(jìn)行檢測。

1.2 標(biāo)本

1.2.1 質(zhì)控品IL公司提供的正常及高值質(zhì)控血漿。

1.2.2 血樣隨機(jī)抽取住院及門診患者共100例，采集新鮮全血用109mmol/L枸櫞酸鈉1:9抗凝，3000r/min離心10min，分離血漿，3h內(nèi)完成檢測。

1.3 試驗原理

1.3.1 免疫比濁法的原理樣品中的D-二聚體分子與包被有高特異性D-二聚體克隆抗體的乳膠顆粒結(jié)合后，乳膠顆粒發(fā)生凝集，在405nm檢測透光強(qiáng)度變化，凝集程度與樣本中的D-二聚體含量成正比。

1.3.2 VIDAS測D-D原理：是一種定量全自動ELISA法，將兩步的免疫夾心法與最后的熒光檢測結(jié)合起來，利用現(xiàn)成的單劑量試劑和分析儀中儲存的校準(zhǔn)系統(tǒng)，對單份樣品進(jìn)行檢測。

1.4 方法

1.4.1 重復(fù)性實驗(批內(nèi)精密度)根據(jù)CLSI的EP5-A2文件[4]對于精密度評價的要求，分別在ACL-9000血凝儀和VIDAS測定正常及高值水平血漿D-D含量，3h內(nèi)各水平測試20次，計算均值(x)、標(biāo)準(zhǔn)差(s)、變異系數(shù)(CV)。

1.4.2 穩(wěn)定性實驗(批間精密度)按上述方法分別測定正常及高值質(zhì)控血漿D-D含量，每天1次，連續(xù)測定20天，計算均值(x)、標(biāo)準(zhǔn)差(s)、變異系數(shù)(CV)。

1.4.3 比對實驗根據(jù)CLSIEP9-A2文件[5]，選取隨機(jī)的住院及門診病人新鮮全血標(biāo)本100例，采用上述兩種方法平行檢測D-D含量，最后對檢測結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行相關(guān)性分析。

表1 D-D批內(nèi)及批間精密度測定結(jié)果

2 結(jié)果

2.1 重復(fù)性與穩(wěn)定性比濁法和VIDAS法的重復(fù)性與穩(wěn)定結(jié)果見表1，可見VIDAS法的重復(fù)性與穩(wěn)定要優(yōu)于比濁法。

2.2 比對實驗將檢測結(jié)果作回歸曲線，得到免疫比濁法與VIDAS比對結(jié)果的回歸方程：y=0.873x+ 46.485,相關(guān)系數(shù)r=0.981。根據(jù)CLSI文件要求(r＞0.975)，可見兩種方法相關(guān)性理想。

3 討論

血漿D-D是纖溶酶水解蛋白形成的降解產(chǎn)物之一，為繼發(fā)性纖溶所特有的代謝物，是血栓已形成并被溶解的直接證據(jù)。但D-D測定受很多因素的影響，只要機(jī)體血管內(nèi)有血栓形成及纖維溶解活動，D-D含量就升高。

根據(jù)上述實驗結(jié)果，兩種定量檢測方法均有準(zhǔn)確、快速、簡便的特點，尤其VIDAS法具有更高的檢測靈敏度和精密度，避免了連續(xù)加樣的偶然誤差，重復(fù)性和穩(wěn)定性要優(yōu)于免疫比濁法。但是，VIDAS測定一個標(biāo)本需一個試劑條，一個批次檢測標(biāo)本量不多，免疫比濁法一個批次檢測標(biāo)本量比較大，對于標(biāo)本量大的醫(yī)院來說，免疫比濁法更加快速，簡便。不同檢測法雖然使用的抗體不同，識別的抗原不同，但比對實驗結(jié)果表明，兩種方法相關(guān)性較好。因此，選擇哪一種D-D檢測方法需各實驗室根據(jù)自身具體情況決定。

[1]傅應(yīng)裕,陳小華,秦光明.乳膠增強(qiáng)免疫比濁法檢測D-二聚體水平的方法學(xué)評價[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2005,10(5):441-442.

[2]郭雪梅,王鴻利.快速D-二聚體檢測在診斷靜脈血栓形成中的應(yīng)用進(jìn)展[J].中國實驗診斷學(xué)，2000,4(1):41-43.

[3]師偉,張國富.D-二聚體研究進(jìn)展.實用醫(yī)技雜志，2010,17(11)：1031-1033.

[4]NCCLS.Evaluation of Performance of Quantitative Measurement Methods；Approved Guideline-Second Edition.NCCLS document EP5-A2[S].NCCLS,940 West Valley Road,Suite 1400,Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA,2004.

[5]NCCLS.Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples；Approved Guideline-Second Edition.NCCLS document EP9-A2[S].NCCLS,940 West Valley Road,Suite 1400,Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA,2002.

R446.62,R364.1+5

B

1674-1129(2013)05-0504-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.043