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        ELISA兩步夾心法測定HBsAg在獻(xiàn)血篩查中的應(yīng)用

        2013-02-28 08:39:50何星洪茂黃小明
        關(guān)鍵詞:夾心獻(xiàn)血者試劑

        何星,洪茂,黃小明

        (1、金華市中心血站,浙江金華321000;2、上海市第一人民醫(yī)院寶山分院檢驗(yàn)科,上海寶山200940;3、金華市第五醫(yī)院,浙江金華321000)

        ELISA兩步夾心法測定HBsAg在獻(xiàn)血篩查中的應(yīng)用

        何星1,洪茂2,黃小明3

        (1、金華市中心血站,浙江金華321000;2、上海市第一人民醫(yī)院寶山分院檢驗(yàn)科,上海寶山200940;3、金華市第五醫(yī)院,浙江金華321000)

        目的評價無償獻(xiàn)血標(biāo)本用ELISA兩步法檢測HBsAg模式應(yīng)用的效果。方法對膠體金法篩查陰性無償獻(xiàn)血者標(biāo)本45477份,采用ELISA一步法和兩步法進(jìn)一步復(fù)核對比分析。結(jié)果膠體金法均為陰性標(biāo)本中,ELISA一步法282例HBsAg呈陽性,陽性率為0.62%;ELISA兩步法586例HBsAg呈陽性,陽性率為1.29%,兩種方法檢測結(jié)果的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論應(yīng)用ELISA兩步夾心法對獻(xiàn)血者HBsAg實(shí)施檢測對降低HBsAg漏檢率具有重要的意義。

        無償獻(xiàn)血;HBsAg;ELISA;兩步法

        我國是乙型肝炎高度流行區(qū),乙肝表面抗原(HBsAg)攜帶者達(dá)7.18%[1]。為了保證安全輸血,獻(xiàn)血前應(yīng)用膠體金法HBsAg的篩查,并用兩種不同試劑進(jìn)行兩次ELISA方法的HBsAg檢測,是目前采供血機(jī)構(gòu)對獻(xiàn)血者進(jìn)行乙型肝炎表面抗原(HB-sAg)檢測的主要策略。由于“一步法”存在產(chǎn)生“后帶現(xiàn)象”的可能,為盡可能避免漏檢,《中國藥典》2010年版中取消一步法,僅收錄二步法。我們用ELISA兩步夾心法方法和一步法分別對我血站45477名獻(xiàn)血員進(jìn)行HBsAg感染檢測,并分析這兩種方法在測定HBsAg結(jié)果上的差異,現(xiàn)報告結(jié)果如下。

        1 材料與方法

        1.1 標(biāo)本來源2010年6月至2011年5月本站無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本45477份。獻(xiàn)血者獻(xiàn)血前,均常規(guī)使用HBsAg金標(biāo)試紙條進(jìn)行初篩,結(jié)果陰性者方可獻(xiàn)血。

        1.2 試劑膠體金法HBsAg試劑為廈門英科新創(chuàng)公司產(chǎn)品。初檢試劑(“一步法”)HBsAg為廈門英科新創(chuàng)公司產(chǎn)品,復(fù)檢試劑(“兩步法”)HBsAg為雅培公司,以上三種試劑均經(jīng)過中國藥品生物制品檢定所批批檢定,且在有效期內(nèi)使用,操作嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行。

        1.3 主要儀器Tecan Rsp150全自動加樣儀(瑞士TECAN公司);BepⅢ全自動酶免分析系統(tǒng)(德國Bering公司);Xantus全自動加樣儀(瑞士Sias公司);FAME全自動酶免分析系統(tǒng)(瑞士HAMILTON

        公司);SUNRISE酶標(biāo)儀(瑞士TECAN公司); Columbus洗板機(jī)(瑞士TECAN公司)。

        1.4 方法與結(jié)果判斷

        1.4.1 酶免疫“一步法”檢測HBsAg原理,酶免疫“兩步法”檢測HBsAg原理[2]。

        1.5 統(tǒng)計學(xué)方法SPSS17.0統(tǒng)計軟件,率的比較用χ2檢驗(yàn),兩均數(shù)比較用t檢驗(yàn),P<0.05,為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 二種方法檢測45477份獻(xiàn)血者的HBsAg結(jié)果情況一步法檢測HBsAg陽性為282份,陽性率為0.62%(282/45477),二步法檢測HBsAg陽性為586份,陽性率為1.29%(586/45477);在730份HBsAg陽性標(biāo)本中,一步法的檢出率為38.63% (282/730),二步法的檢出率為80.27%(586/730)。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理,兩種方法檢測結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=107.50,P<0.01),見表1。

        表1 45477份獻(xiàn)血者的血清標(biāo)本ELlSA法檢測HBsAg結(jié)果[n(%)]

        2.2 138份二種方法同時陽性標(biāo)本的S/CO值情況當(dāng)S/CO值在0.9~7.99時,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理,一步法和二步法檢測HBsAg檢測能力差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t′=5.9693,P<0.05);當(dāng)S/CO值≥8.0時,一步法和二步法檢測HBsAg檢測能力差異也有統(tǒng)計學(xué)意義。(t′=4.9581,P<0.05),見表2。

        2.3 448份兩步法陽性一步法陰性標(biāo)本處理結(jié)果情況對448份標(biāo)本同時做HBeAg,HBeAb和HBcAb三項(xiàng)檢測,只要有一項(xiàng)有反應(yīng)性記錄為陽性,共記420份;其他三項(xiàng)檢測均無反應(yīng)性的28份。對420份有反應(yīng)性的標(biāo)本用一步法稀釋處理,檢測結(jié)果見表3。

        表2 兩種方法均為陽性的138例標(biāo)本S/CO值比較

        表3 一步法檢測420份不同稀釋標(biāo)本的HBsAg結(jié)果

        3 討論

        經(jīng)過本次回顧性研究發(fā)現(xiàn):所有獻(xiàn)血者都在獻(xiàn)血前用金標(biāo)試紙條做了HBsAg初篩,因此大部分HBsAg攜帶者都被排除。但是受初篩試劑方法本身的限制,仍然有部分HBsAg陽性的標(biāo)本被采集。本文收集從2010年6月到2011年5月對HBsAg進(jìn)行檢測的數(shù)據(jù),包括使用國產(chǎn)新創(chuàng)試劑一步法數(shù)據(jù)和同時用進(jìn)口雅培試劑兩步法復(fù)檢數(shù)據(jù)。由表1可見HBsAg陽性率,一步法為0.62%,兩步法為1.29%,表明兩步法檢測水平明顯高于一步法。通過表2,對比二種方法同時陽性標(biāo)本的S/ CO值,同一標(biāo)本兩步法與一步法存在顯著差異,而且兩步法S/CO值普遍都要高,這也顯示兩步法比一步法檢測能力要強(qiáng)。通過表3分析得出,隨著稀釋倍數(shù)增加,一步法陽性檢出率逐步上升,漏檢率明顯下降。

        筆者認(rèn)為,一步法在檢測HBsAg時,很可能出現(xiàn)過量的抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合,卻沒有形成“HBsAb-HBsAg-HBsAb-HRP”復(fù)合物,即產(chǎn)生“鉤狀效應(yīng)”[3],尤其是高濃度的HBsAg導(dǎo)致“后帶現(xiàn)象”,出現(xiàn)假低值,嚴(yán)重時可以造成假陰性。將這些標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)稀釋后可以有效消除鉤狀效應(yīng),這與有關(guān)文獻(xiàn)報道一致[4]。兩步法通過把游離抗原(未與固相抗體結(jié)合的多余抗原)洗掉,再加酶標(biāo)抗體,因?yàn)榻Y(jié)合抗原是多價的,所以形成“HBsAb-HBsAg-HBsAb-HRP”復(fù)合物,最后催化底物,呈現(xiàn)陽性結(jié)果,有利避開“后帶現(xiàn)象”(見表3),而且不用稀釋樣本。至于28份HBeAg, HBeAb和HBcAb三項(xiàng)檢測均為陰性標(biāo)本,由于不同試劑廠家針對乙型肝炎病毒DNA的S基因編碼的衣殼蛋白包被物差異或者其他不明原因造成。但是兩種試劑都存在一定漏檢率,因此同時使用兩種不同試劑來檢測對降低HBsAg漏檢率有重要意義,這也符合國標(biāo)“采出的血液必須進(jìn)行初檢和復(fù)檢的要求”規(guī)定。

        綜上所述,此前ELISA一步夾心法靈敏度高,特異性好,耗時也不長久,因此得以廣泛應(yīng)用。但是近幾年來相繼有報道ELISA一步夾心法檢測HBsAg也易出現(xiàn)假陰性結(jié)果[5]。作為經(jīng)典的兩步法,與ELISA一步夾心法檢測HBsAg時對實(shí)驗(yàn)條件要求基本相同,不需要特別儀器和專門技術(shù)培訓(xùn)。筆者認(rèn)為ELISA兩步夾心法敏感性更高,有利于避免產(chǎn)生高值鉤狀效應(yīng)和縮短HBV感染的“窗口期”[6]。血站應(yīng)篩查出部分處于窗口期或?qū)κ苎呦鄬Σ话踩难?,進(jìn)一步降低輸血風(fēng)險。因此,在降低HBV傳播風(fēng)險提高血液安全性方面,兩步法具有非常重要的意義,一步法與兩步法聯(lián)合使用,更能保證血液安全。

        [1]衛(wèi)生部疾病預(yù)防控制局,中國疾病預(yù)防控制中心.全國人群乙型病毒性肝炎血清流行病學(xué)調(diào)查報告[M].北京:人民衛(wèi)生出版社, 2011:4.

        [2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(三部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:355.

        [3]楊劍.ELISA一步法和兩步法檢測乙肝HBsAg的結(jié)果比較[J]實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2011,29(5):569.

        [4]胡越,蔣瑞馨,邵家幼.兩種酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙肝表面抗原的結(jié)果比較[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012,30(3):269-270.

        [5]風(fēng)倩,陶傳敏,嚴(yán)可明,等.ELISA一步夾心法檢測HBsAg假陰性原因分析.[J]華西醫(yī)學(xué),2008,23(6):1394-1395.

        [6]謝琳,易鳴,高命,等.ELISA一步夾心法檢測HBsAg假陰性的原因及對策分析[J].現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué),2011,37(3):211-212.

        R446.62,R512.6+2,R193.3

        A

        1674-1129(2013)05-0498-02

        10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.039

        洪茂

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