熊麗紅，錢榕，李國良

(江西省血液中心，江西南昌330047)

HBsAg檢測陰性而HBV-DNA檢測陽性標本乙肝兩對半結果模式分析

熊麗紅，錢榕，李國良

(江西省血液中心，江西南昌330047)

目的對ELISA檢測HBsAg結果陰性而HBV-DNA檢測陽性標本乙肝兩對半結果進行比較分析。方法采用2種不同廠家ELISA試劑對52224例無償獻血者血液標本進行HBsAg檢測，核酸檢測方法對51797例HBsAg檢測陰性標本進行HBV-DNA定性檢測，83例HBV-DNA定性檢測陽性標本進行HBV-DNA定量檢測和乙肝兩對半檢測。結果52224例獻血者HBsAg檢測陰性為51797例；51797例檢測HBsAg陰性標本而HBV-DNA定性檢測陽性共83例；83例HBVDNA定性檢測陽性標本經(jīng)定量檢測53例為陽性；83例HBV-DNA定性檢測陽性標本乙肝兩對半檢測有10種模式，HBcAb陽性占87.95%；HBcAb和HBeAb同時陽性占56.63%；HBsAg陽性占22.89%。結論由于經(jīng)濟原因核酸檢測暫不適宜全面推廣情況下，為減少經(jīng)輸血傳播乙肝，選擇靈敏度和特異性好的ELISA試劑檢測HBsAg；體檢征詢發(fā)現(xiàn)獻血者HBcAb、HBeAb同時陽性時暫緩獻血。

HBsAg；HBV-DNA；兩對半

目前我國血站系統(tǒng)廣泛采用ELISA技術檢測HBsAg，其能淘汰部分乙肝陽性血液輸入患者體內，不過該方法存在窗口期、免疫靜默期、鉤狀效應等漏檢現(xiàn)象。近年來，歐美、日本以及亞太地區(qū)一些國家地區(qū)陸續(xù)將NAT技術應用于獻血者血液檢測，以提高血液安全[1-3]。2010年衛(wèi)生部在全國14家血液中心或大型中心血站試點核酸檢測HBV、HCV、HIV，并將各單位核酸檢測陽性標本進行定量檢測和乙肝兩對半的檢測，現(xiàn)將本中心ELISA檢測HBsAg陰性而核酸檢HBV-DNA陽性標本其乙肝兩對半結果分析如下。

1 材料與方法

1.1 樣本來源本中心2010年8月9日至2011年4月30日無償獻血者血液標本52224例。

1.2 試劑和儀器

1.2.1 HBsAg ELISA試劑盒為試劑A(北京金豪生物制品有限公司)和試劑B(廈門新創(chuàng)生物制品有限公司，HBV-XC)。儀器采用HIMILTON STAR加樣儀(瑞士哈美頓公司)；FAME全自動酶免分析儀(瑞士哈美頓公司)。

1.2.2 NAT檢測試劑為Cobas TaqScreen MPX HBV/HCV/HIV聯(lián)合檢測試劑(美國羅氏診斷公司定性檢測試劑)。核酸檢測平臺(美國羅氏診斷公司)：HIMILTON STAR IVD標本混樣儀(瑞士哈美頓公司)，Cobas AmpliPrep核酸提取儀與cobas TaqMan分析儀通過混樣和數(shù)據(jù)管理服務器(PDM)連接組成平臺(簡稱CAP/CTM)。

1.2.3 乙肝兩對半羅氏公司所提供的乙肝兩對半相配套試劑，采用電化學發(fā)光法。衛(wèi)生部臨床檢驗中心工作人員負責檢測并將結果反饋至本中心。

1.2.4 核酸定量檢測HBV-DNA定量試劑為羅氏公司提供，實時熒光定量PCR系統(tǒng)，檢測平臺亦采用CAP/CTM平臺。由衛(wèi)生部臨床檢驗中心工作人員負責檢測并將結果反饋至本中心。

1.3 方法

1.3.1 ELISA方法將抗凝血液標本室溫離心后,用HIMILTON STAR加樣儀自動加樣,FAME全自動酶免分析儀檢測,過程嚴格按照試劑盒說明書操作,結果以吸光度值大于80%CUT-OFF值判定為陽性。

1.3.2 NAT方法ELISA試劑檢測HBsAg陽性不做核酸檢測。核酸定性檢測采用Cobas TaqScreen MPX方法，按試劑說明書HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA-1最低檢測限95%可信度分別是3.7IU/ m l，10.7IU/m l，49IU/m l。

1.4 統(tǒng)計學處理所有資料均以例或百分率表示。

2 結果

2.1 52224例無償獻血者標本ELISA方法檢測HBsAg結果52224例獻血者HBsAg檢測陰性為51797例。陽性共427例，總陽性率為0.82%；兩種試劑均陽性為332例，陽性率為0.64%；單試劑陽性為95例，陽性率為0.18%。51797例檢測HBsAg陰性標本而HBV-DNA定性檢測陽性共83例，陽性率為0.16%。83例HBV-DNA定性檢測陽性標本經(jīng)定量檢測57例陽性，26例定量檢測陰性。

2.2 83例HBV-DNA定性檢測陽性經(jīng)衛(wèi)生部乙肝兩對半檢測結果乙肝兩對半檢測結果共有10種模式，分別以A～J表示，結果見表1。HBcAb陽性73例，占87.95%；HBcAb和HBeAb同時陽性47例，占56.63%；HBsAg陽性19例，占22.89%。

表1 HBsAg陰性而HBV-DNA定性檢測陽性乙肝兩對半檢測結果

3 討論

乙型肝炎及乙肝病毒攜帶者在我國廣泛流行,人群感染率高,是當前危害人民健康最嚴重的傳染病之一,從而影響人們的生活質量。乙肝病毒主要通過血液和其他體液排出體外,并通過注射或非注射途徑進入易感者體內。注射途徑包括輸血及血制品、集體預防接種、藥物注射和針刺、吸毒人員互相混合使用注射器等方式。為減少經(jīng)輸血傳播乙型肝炎《獻血者健康檢查要求》明確要求血液必需由不同工作人員使用不同廠家的試劑檢測HBsAg，隨著社會的發(fā)展，核酸檢測慢慢向輸血行業(yè)推廣，由于經(jīng)濟原因目前尚未向全國推廣。

應用ELISA方法檢測HBsAg陰性而HBVDNA定性檢測陽性的標本再次用電化學發(fā)光法檢測發(fā)現(xiàn)有22.89%HBsAg陽性，表明ELISA試劑檢測靈敏度有待進一步提高。在核酸檢測不能大規(guī)模推廣時，為減少經(jīng)輸血傳播乙肝，選擇特異性好，靈敏度高的試劑和方法不失為過渡之選，有研究報道使用酶聯(lián)免疫吸附法與定量聚合酶鏈反應檢測乙肝兩對半結果均未見明顯差異[4]。

應用ELISA方法檢測HBsAg陰性而HBVDNA定性檢測陽性的標本乙肝兩對半檢測結果顯示其中HBcAb陽性占87.95%，HBcAb和HBeAb同時陽性占56.63%。此現(xiàn)象的發(fā)生有可能為HB-sAg濃度過低，ELISA方法檢測不出；亦可能為HBsAg濃度過高，ELISA檢測中出現(xiàn)鉤狀效應檢測為陰性；也可能為基因突變形成新的變異株；亦可能為既往感染。

83例HBV-DNA定性檢測陽性中有26例定量檢測陰性，主要原因可能是與試劑靈敏度有關，羅氏公司定性檢測試劑靈敏度為3.8 IU/mL，而定量檢測試劑靈敏度為12 IU/mL；亦不排除定性檢測過程中經(jīng)污染造成假陽性結果。

總之，為減少經(jīng)輸血傳播乙型肝炎，首先應加強HBsAg的檢測，選擇靈敏度和特異性好的試劑，其次為保證受血者的安全，即使兩對半未納入無償獻血的常規(guī)檢測，但應增強對獻血者征詢，在知道其HBcAb、HBeAb同時陽性時應暫緩獻血，與相關報道相符[5]。

[1]Kleinman SH，KuhnsMC，Todd DS，etal．Frequency of HBV DNA detection in US blood donors testing positive for the presence of anti-HBc:implications for transfusion transmission and donor screening[J]．Transfusion,2003,43(6):696-704．

[2]Jarvis L，Becker J，Tender A，et al．Evaluation of the Roche cobas s201 system and cobas TaqScreen multiplex test for blood screening:a Europeanmulticenter study[J]．Transfusion，2008,48(9):1853-1861．

[3]Mine H，Emura H，Miyamoto M，et al．High throughput screening of 16 million serologically negative bloods donors for hepatitis B virus，and human immunodeficiency virus type-1 by nucleic acid amp lification testing with specific and sensitive multiplex reagent in Japan[J]．JVirolMethods,2003,112(1-2):145-151．

[4]岳化葵.酶聯(lián)免疫吸附法與定量聚合酶鏈反應對乙肝兩對半測定的比較分析[J],臨床和實驗醫(yī)學雜志,2008,7(11):73.

[5]王良華,葉賢林,尚桂芳,等.免疫篩查陰性獻血者血樣病毒核酸檢測的研究[J].中國輸血雜志,2005,18(4):286-289.

R446.62,R512.6+2

A

1674-1129(2013)05-0496-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.038