王秀媛

(天津市寶坻區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，天津301800)

乙二胺四乙酸鹽對肝素鈉抗凝后血小板聚集的影響

王秀媛

(天津市寶坻區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，天津301800)

目的探討乙二胺四乙酸鹽(EDTA-K2)對肝素鈉抗凝后血小板聚集的影響。方法對38名血小板數(shù)量正常的體檢者抽取靜脈血標(biāo)本，分別使用EDTA-K2、肝素鈉抗凝20min、肝素鈉抗凝20min加入EDTA-K2、肝素鈉抗凝60min加入EDTA—K2的抗凝標(biāo)本,進(jìn)行計數(shù)及血涂片瑞氏染色觀察。結(jié)果肝素鈉抗凝靜脈血血小板計數(shù)結(jié)果為(93.7±32.18)×109/L；EDTA-K2抗凝血血小板計數(shù)結(jié)果為(210±58.39)×109/L。組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=16.74,P＜0.001)。肝素鈉抗凝靜脈血靜置20 min后加入EDTA-K2抗凝劑結(jié)果為(212.05±60.20)×109/L；與EDTA-K2抗凝血結(jié)果(210±58.39)×109/L比較，組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.844,P＞0.05)。肝素鈉抗凝靜脈血靜置60min后加入EDTA-K2抗凝劑結(jié)果為(56.74±15.33)×109/L，與EDTA-K2抗凝血結(jié)果(210±58.39)×109/L比較，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=22.88,P＜0.001)。結(jié)論EDTA-K2鈣離子螯合劑可可逆性地使初發(fā)聚集的血小板解聚。

血小板聚集；EDTA-K2；肝素鈉；血小板解聚

肝素鈉、乙二胺四乙酸鹽(EDTA-K2)是我們工作中經(jīng)常使用的兩種不同作用原理的抗凝劑。國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(ICSH)認(rèn)定EDTA-K2為血液常規(guī)分析的抗凝劑。我們在工作中發(fā)現(xiàn)用肝素抗凝的血液標(biāo)本，當(dāng)用血液細(xì)胞分析儀測定血小板數(shù)量減少時，在其抗凝標(biāo)本中加入EDTA-K2后，血小板數(shù)量可恢復(fù)正常。我們對此進(jìn)行了分析，試驗情況如下。

1 材料與方法

1.1 對象選擇健康體檢者38例，其中男20例，女18例，全血血小板數(shù)量均＞100×109/L。

1.2 主要儀器與試劑XE-2100型血細(xì)胞分析儀(日本希森美康株式會社)及其配套試劑；一次性真空抗凝管(肝素鈉、EDTA-K2)由浙江康是醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)；一次性采血針由浙江康德萊疾療器械股份有限公司制造；EDTA-K2抗凝杯；瑞氏染液。

1.3 測定方法采集38名血小板數(shù)量正常的來我院就診患者靜脈血標(biāo)本。常規(guī)消毒手臂，采肘部靜脈血，分別注入含肝素鈉抗凝管和含EDTA-K2抗凝管中充分混勻，20 min后用XE-2100型血細(xì)胞分析儀測定全血中血小板數(shù)量，并進(jìn)行涂片瑞氏染液觀察。然后再將肝素抗凝20min靜脈血取40μl加入含有EDTA-K2抗凝杯中，混勻15min后，XE-2100血細(xì)胞分析儀測定全血中血小板數(shù)量，并進(jìn)行涂片瑞氏染液觀察。將肝素抗凝60min靜脈血取40μl加入含有EDTA-K2抗凝杯中，混勻15 min后，XE-2100血細(xì)胞分析儀測定全血中血小板數(shù)量，并進(jìn)行涂片瑞氏染液觀察。以上標(biāo)本在測定時均重復(fù)3次取其均值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析所有數(shù)據(jù)采用x±s表示，試驗組與對照組間結(jié)果的比較采用配對t檢驗，P＜0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 38份分別用肝素鈉抗凝靜脈血靜置20min后計數(shù)血小板結(jié)果與EDTA-K2抗凝血結(jié)果比較：肝素鈉抗凝靜脈血血小板計數(shù)結(jié)果為(93.7±32.18)× 109/L；EDTA-K2抗凝血血小板計數(shù)結(jié)果為(210± 58.39)×109/L。經(jīng)配對樣本t檢驗分析，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=16.74,P＜0.001)。見表1。分別用瑞氏染色涂片觀察肝素抗凝靜脈血血小板可見輕度聚集；EDTA-K2抗凝血血小板無聚集現(xiàn)象。見圖1、圖2。

2.2 38份用肝素鈉抗凝靜脈血靜置20min后加入EDTA-K2抗凝杯中靜置15min后結(jié)果為(212.05± 60.20)×109/L，與EDTA-K2抗凝血結(jié)果(210±58.39) ×109/L比較，組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.844,P＞ 0.05)。用瑞氏染色涂片觀察血小板無聚集現(xiàn)象。見圖3。

圖1 EDTA-K2抗凝血瑞氏染色涂片圖(×400)

圖2 肝素鈉抗凝靜脈血靜置20m in瑞氏染色涂片圖(×400)

圖3 肝素鈉抗凝血靜置20分鐘后加入EDTA-K2后瑞氏染色涂片圖(×400)

2.3 38份用肝素鈉抗凝靜脈血靜置60min后加入EDTA-K2抗凝杯中靜置15 min后結(jié)果為(56.74± 15.33)×109/L，與EDTA-K2抗凝血結(jié)果(210±58.39) ×109/L比較，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=22.88,P＜0.001)。用瑞氏染色涂片觀察血小板數(shù)量減少，偶見聚集血小板，形態(tài)不規(guī)整。

表1 不同抗凝劑及存放時間血小板計數(shù)結(jié)果比較(×109/L,x±s)

3 討論

血小板聚集在血小板之間進(jìn)行，血小板膜表面受體GPⅡb/Ⅲa、血液中的Fg和Ca2+這三要素缺一不可[1，2]。研究結(jié)果顯示[3，4]，Ca2+在血小板中的作用是廣泛的，也是復(fù)雜的，血小板內(nèi)鈣濃度升高，血小板會被激活，內(nèi)鈣升高對血小板變形和分泌有重要作用。血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa是鈣離子依賴性二聚體復(fù)合物，在血小板變形前，藏于血小板膜內(nèi)側(cè)，在血小板活化變形后，可暴露于血小板表面。GPⅡb/Ⅲa分子的構(gòu)象發(fā)生改變，暴露出與纖維蛋白原(Fg)的受體與Fg結(jié)合，使血小板發(fā)生聚集[5-7]。Ca2+在血小板的聚集中起著必要作用。細(xì)胞內(nèi)鈣增加的主要來源有：一是細(xì)胞外鈣進(jìn)入；二是細(xì)胞器(如內(nèi)質(zhì)網(wǎng))內(nèi)鈣的釋放；三是細(xì)胞膜上結(jié)合鈣的釋放。EDTA-K2抗凝劑因其與鈣離子有很強的螯合作用使細(xì)胞外鈣離子減少，抑制血小板活化和纖維蛋白原(Fg)的受體與Fg結(jié)合，從而抑制血小板聚集。

肝素鈉既可抑制血小板功能,也可激活血小板。肝素鈉可以抑制凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集，但肝素鈉也可在無誘導(dǎo)劑的情況下直接激活血小板，并增強ADP誘導(dǎo)血小板聚集[8]。血小板聚集有兩種類型：第一相聚集(初級聚集)由外源性致聚劑誘導(dǎo)的聚集反應(yīng)；第二相聚集(次級聚集)由血小板釋放的ADP誘導(dǎo)的聚集[9]。ADP誘導(dǎo)的聚集至少通過兩個受體激活血小板[10]。其中ADPP2X1受體途徑的受體物質(zhì)為離子通道,作用機制主要是促進(jìn)鈣離子內(nèi)流，使血小板內(nèi)鈣濃度升高，血小板被激活。本實驗，在血小板初發(fā)聚集時將血漿中的鈣離子用EDTA-K2螯合后，ADP不能將鈣離子轉(zhuǎn)運至細(xì)胞內(nèi)，血小板不能形成第二相聚集。

通過實驗EDTA-K2可阻止血小板形成第二相聚集。EDTA-K2可以使肝素鈉抗凝的靜脈血引起的血小板初級聚集解聚。解聚原因還需要進(jìn)一步實驗和研究。

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Effect of EDTA on platelet aggregation after heparin anticoagulation

WANG Xiuyuan.Clinical Laboratory of Baodi Hospital of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 301800,China.

Platelet aggregation;EDTA-K2;Heparin sodium;Platelet disaggregation

R446.11+1

A

1674-1129(2013)05-0452-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.018

王秀媛，女，1971年7月出生，漢族，畢業(yè)于天津醫(yī)科大學(xué)。本科，副主任技師、檢驗專業(yè)，主要研究臨床檢驗診斷學(xué)。

Abstrat:ObjectiveTo explore the effectof EDTA-K2on plateletaggregation after heparin anticoagulation.M ethodsUsing 38 volunteers'venous blood as samples,which blood platelet counts were normal.The EDTA-K2and heparin sodium anticoagulant were added into those blood samples for 20minutes;after that,EDTA-K2was added into the heparin sodium anticoagulant in 20 minutes and 60 minutes,respectively;and finally,platelet count and W right-Giemsa stain were conducted for above-mentioned samples.ResultsThe counting result of platelet in heparin anticoagulated blood was(93.7±32.18)×109/L.The counting result of platelet in EDTA-K2anticoagulant blood was(210±58.39)×109/L.There was significant difference between the groups(t=16.74,P＜0.001).The resultof adding EDTA-K2after 20minuteswas(212.05±60.20)×109/L.Compared with the resultof EDTA-K2anticoagulant(210±58.39)×109/L,there was no statistically significant difference between the two groups(t=1.844,P＞0.05).The p latelet result of adding EDTA-K2after 60 minuteswas(56.74±15.33)×109/L.Compared with the result of EDTA-K2anticoagulant(210± 58.39)×109/L,there was significant difference between the groups(t=22.88,P＜0.001).ConclusionCalcium chelator EDTA-K2can reversiblymake the initial gathering blood platelet disaggregating.