劉珍瓊，熊國(guó)亮，辛茶香

(江西省胸科醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西南昌330006)

LA檢測(cè)隱球菌莢膜多糖抗原在隱球菌性腦膜炎診斷中的應(yīng)用

劉珍瓊，熊國(guó)亮，辛茶香

(江西省胸科醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西南昌330006)

目的探討乳膠凝集試驗(yàn)(LA)在隱球菌性腦膜炎中的早期診斷價(jià)值。方法收集56例確診的隱球菌性腦膜炎患者和25例結(jié)核性腦膜炎、病毒性腦膜炎患者的腦脊液，采用乳膠凝集試驗(yàn)檢測(cè)隱球菌莢膜多糖抗原，并與真菌培養(yǎng)和直接鏡檢方法相比較，評(píng)價(jià)其診斷的靈敏度和特異度。結(jié)果乳膠凝集試驗(yàn)、真菌培養(yǎng)和直接鏡檢3種方法診斷的靈敏度分別為91.1%、69.6%和73.2%，乳膠凝集試驗(yàn)特異度分別為96.0%、100%、100%。結(jié)論乳膠凝集試驗(yàn)檢測(cè)隱球菌莢膜多糖抗原可作為隱球菌性腦膜炎的早期診斷方法。

乳膠疑集試驗(yàn)；隱球菌性腦膜炎；隱球菌莢膜多糖抗原

對(duì)于新型隱球菌性腦膜炎，傳統(tǒng)的診斷方法主要是鏡檢和培養(yǎng)，但在發(fā)病的早期鏡檢可呈正常，而培養(yǎng)方法耗時(shí)，且陽(yáng)性率低，故在一定程度上延誤該病的診治。因此，尋找一種快速、靈敏、特異的早期檢測(cè)新型隱球菌感染的方法極其重要。本研究應(yīng)用乳膠疑集試驗(yàn)(LA)檢測(cè)新型隱球菌莢膜多糖抗原,探討其對(duì)隱球菌性腦膜炎的早期診斷價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 病例來(lái)源56例病例來(lái)自2012年1月至2013年4月本院神經(jīng)內(nèi)科住院患者,根據(jù)病史、臨床癥狀、體征、實(shí)驗(yàn)室檢查和病原學(xué)檢查，以及抗生素和抗結(jié)核藥物治療無(wú)效,改用抗真菌藥物治療有效,確診為隱球菌性腦膜炎者入選。其中男35例，女21例，年齡23～71歲。所有標(biāo)本的留取均在用抗真菌藥物之前。對(duì)照組25例同樣來(lái)自本院神經(jīng)內(nèi)科，確診為結(jié)核性腦膜炎或病毒性腦膜炎患者入選，其中男14例，女11例，年齡20～70歲。

1.2 儀器和試劑真菌鑒定試劑條API-20CAUX(法國(guó)梅里埃生物有限公司)；隱球菌抗原乳膠凝集試劑：采用美國(guó)Immuno-Mycologies有限公司生產(chǎn)的隱球菌抗原乳膠檢測(cè)系統(tǒng)(LATEX-CRYTOCOCCUSANTIGEN DETECTION SYSTEM)；革蘭染液由貝索公司提供;BACTEC9120全自動(dòng)血培養(yǎng)儀為美國(guó)BD公司產(chǎn)品。

1.3 方法

1.3.1 鏡檢墨汁染色:墨汁染色選用印度墨汁或國(guó)產(chǎn)優(yōu)質(zhì)墨汁，將腦脊液(CSF)標(biāo)本離心后取沉淀物直接染色鏡檢，在黑色背景下可見(jiàn)到透亮的菌體和寬厚莢膜。革蘭染色:取CSF標(biāo)本離心后沉淀物行革蘭染色后鏡檢，找到藍(lán)色的菌體和無(wú)色的莢膜為陽(yáng)性。

1.3.2 培養(yǎng)和鑒定將無(wú)菌留取的腦脊液注入血培養(yǎng)瓶中,于BACTEC9120全自動(dòng)血培養(yǎng)儀內(nèi)監(jiān)測(cè)，報(bào)警陽(yáng)性的培養(yǎng)瓶立即轉(zhuǎn)種沙保羅培養(yǎng)基，生長(zhǎng)并分純后采用真菌鑒定試劑條AI-20CAUX鑒定。

1.3.3 乳膠凝集試驗(yàn)常規(guī)方法收集無(wú)菌樣本，1000×g離心15min以確保去除所有白細(xì)胞和微粒體，小心吸取腦脊液加入無(wú)菌容器(有渾濁或絮狀沉淀的標(biāo)本棄去)，100℃孵育腦脊液5min備用。在環(huán)狀玻片的分離環(huán)中分別加入25μl隱球菌抗原陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和經(jīng)熱處理的腦脊液，然后在每個(gè)環(huán)中加入25μl隱球菌乳膠，用分離的涂藥棒徹底混合環(huán)中物質(zhì)，室溫下手動(dòng)旋轉(zhuǎn)5min后立即觀察結(jié)果。

1.3.4 結(jié)果判斷在無(wú)光背景中立即讀數(shù)并劃分等級(jí)從陰性到4+，陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)該2+或更大一些，陰性對(duì)照應(yīng)該低于1+，具體劃分依據(jù)如下：陰性(-):無(wú)可見(jiàn)團(tuán)塊的均勻顆粒懸浮液；1+：乳狀背景下小但明顯塊狀；2+：輕微團(tuán)塊背景下小但明顯塊狀；3+：清晰背景下大的和小的塊；4+：非常清晰背景下大塊狀。

2 結(jié)果

56例患者CSF檢查結(jié)果：鏡檢陽(yáng)性41例，鏡檢包括革蘭染色和墨汁染色；真菌培養(yǎng)陽(yáng)性39例；乳膠凝集試驗(yàn)陽(yáng)性53例；乳膠凝集試驗(yàn)、真菌培養(yǎng)和直接鏡檢3種方法診斷的陽(yáng)性率分別為91.1%、69.6%和73.2%。對(duì)照組26例鏡檢和培養(yǎng)結(jié)果均為陰性，而乳膠凝集試驗(yàn)中有1例為陽(yáng)性，特異度為96%。3種檢驗(yàn)方法結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 乳膠凝集試驗(yàn)、真菌培養(yǎng)和直接鏡檢檢測(cè)結(jié)果比較

3 討論

近年來(lái)隨著臨床上廣譜抗生素、免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素、腫瘤放化療的廣泛應(yīng)用和近年來(lái)AIDS患者的不斷增多，隱球菌性腦膜炎患者明顯增多。大多數(shù)隱球菌性腦膜炎患者病情重、病死率高，且其臨床癥狀不典型，早期常誤診,不少患者被誤當(dāng)炎癥和結(jié)核治療,部分病例當(dāng)腦腫瘤手術(shù)后才確診。尤其是當(dāng)前臨床常用的隱球菌腦膜炎的診斷方法敏感性低，極易延誤治療時(shí)機(jī)，導(dǎo)致病死率及致殘率增加。大量臨床資料也表明，隱球菌性腦膜炎的療效和轉(zhuǎn)歸很大程度上取決于早期明確診斷[1,2]。缺乏敏感而又特異的病原學(xué)檢測(cè)手段是隱球菌性腦膜炎易誤診的一個(gè)重要原因。

當(dāng)前大多醫(yī)院檢測(cè)新型隱球菌方法為墨汁染色、革蘭染色和真菌培養(yǎng)。腦脊液涂片墨汁染色鏡檢，操作簡(jiǎn)單、迅速，是診斷隱球菌性腦膜炎直接而快速的診斷方法，但在發(fā)病的初期，鏡檢可呈正常，需要反復(fù)多次檢查才能找到隱球菌；真菌培養(yǎng)方法耗時(shí),且陽(yáng)性率較低。故在一定程度上延誤該病的診治。因此,尋找一種快速、靈敏、特異的早期檢測(cè)深部隱球菌感染的方法尤為重要。乳膠凝集試驗(yàn)是針對(duì)新型隱球菌莢膜多糖抗原的免疫學(xué)檢測(cè),在早期診斷中優(yōu)于傳統(tǒng)的培養(yǎng)法和鏡檢法。本研究數(shù)據(jù)顯示乳膠凝集試驗(yàn)陽(yáng)性率較高，真菌培養(yǎng)和鏡檢陽(yáng)性率相對(duì)較低。本試驗(yàn)結(jié)果表明利用乳膠凝集試驗(yàn)檢測(cè)腦脊液中隱球菌莢膜多糖抗原的陽(yáng)性率為91.1%，與Antionori等[3]報(bào)道腦脊液中隱球菌抗原檢測(cè)的陽(yáng)性率為94.1%基本相符。但要注意的是，高濃度隱球菌抗原所致的鉤帶現(xiàn)象和體內(nèi)未知非特異性蛋白對(duì)隱球菌抗原的掩蓋效應(yīng),能夠引起假陰性；同時(shí)有文獻(xiàn)報(bào)道，RF陽(yáng)性血清和TB患者血清可引起隱球菌莢膜多糖抗原乳膠凝集試驗(yàn)假陽(yáng)性[4]。

綜上所述，乳膠凝集試驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)隱球菌莢膜多糖抗原對(duì)隱球菌性腦膜炎的診斷有重要臨床應(yīng)用價(jià)值，優(yōu)于目前常用的真菌培養(yǎng)和鏡檢方法，可作為隱球菌性腦膜炎的早期診斷方法。

[1]盧洪洲,曹天高,周穎杰,等.乳膠凝集試驗(yàn)對(duì)新生隱球菌性腦膜炎診斷及治療的意義[J].中華傳染病雜志,2005,24(3):209-211.

[2]王馮濱,歐強(qiáng),勵(lì)峰,等.新生隱球菌性腦膜炎25例臨床分析[J].中國(guó)感染與化療雜志,2010,10(1):41-43.

[3]Antinori S,Radice A,Galimberti L,et al.The role of cryptococcal antigen assay in diagnosis and monitoring of cryptococcalmeningitis[J].JClin Microbiol,2005,43(11):5828-9.

[4]王露霞,劉海英,石凌波,等.隱球菌莢膜多糖抗原乳膠凝集試驗(yàn)干擾因素的探討[J].臨床檢驗(yàn)雜志,2010,28(2):159.

Application of latex agglutination test for detecting cryptoceccal capsular polysaccharide antigen in diagnosis of patients w ith cryptoceccal meningitis.

LIU Zhenqiong,XIONG Guoliang,XIN Chaxiang.Department of Clinical Laboratories，Jiangxi Chest Hospital，Nanchang 330006，China

ObjectiveTo exp lore the early diagnostic value of capsular polysaccharide antigens detected by latex agglutination test(LA)in the diagnosis of cryptococcalmeningitis.MethodsThe cryptococcal capsular polysaccha antigenswere tested by LA in the CSF from 56 patientswith cryptococcalmeningitis,and 25 patients with tuberculousmeningitis or viralmeningitis.The sensitivity and specificity were compared with fungal culturemethod and directmicroscopy examination.ResultsThe detection sensitivity of latex agglutination,fungal culture and directmicroscopy examination for diagnosis of cryptococcosis was 91.1%,69.6%and 73.2%,respectively;and the specificity was 96.0%,100%and 100%,respectively.ConclusionDetection of cryptococcal antigens by latex agglutination test could be considered as a test for early diagnosis of cryptococcalmeningitis.

Latex agglutination test；Cryptoceccalmeningitis；Cryptoceccal capsular polysaccharide antigen

R446.62,R519.4,R379.5

A

1674-1129(2013)05-0446-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.015

劉珍瓊，女，1974年1月生，碩士，副主任技師，主要從事臨床檢驗(yàn)工作。