李揚(yáng)宇，鄭春盛

(福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建福州350004)

尿液紅細(xì)胞定量分析方法學(xué)的探討

李揚(yáng)宇，鄭春盛

(福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建福州350004)

目的探討并比較尿液紅細(xì)胞自動(dòng)化儀器定量方法與人工鏡檢定量計(jì)數(shù)的關(guān)系。方法制備尿紅細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)液，分別用不離心、離心兩種人工鏡檢方法和UF-100全自動(dòng)尿沉渣分析儀、朗邁UriSed全自動(dòng)尿沉渣分析儀兩種自動(dòng)化尿液分析儀進(jìn)行檢測，分析四種尿紅細(xì)胞定量方法間的差異。結(jié)果離心鏡檢法檢測尿紅細(xì)胞結(jié)果與理論濃度之間偏差最大，不離心鏡檢法、UF-100分析儀法、朗邁UriSed分析儀法檢測結(jié)果較接近理論濃度。不離心鏡檢法檢測結(jié)果與理論濃度之間之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；UF-100分析儀、朗邁UriSed分析儀、離心鏡檢檢測結(jié)果與理論濃度間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；不離心鏡檢法檢測結(jié)果與UF-100分析儀、朗邁UriSed分析儀檢測結(jié)果間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；離心鏡檢檢測結(jié)果與UF-100分析儀、朗邁UriSed分析儀檢測結(jié)果之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。UF-100分析儀檢測結(jié)果與朗邁UriSed分析儀檢測結(jié)果之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。四種方法的檢測結(jié)果與理論值之間均有良好的線性關(guān)系(r值分別為0.991，0.999，0.999，0.998)。結(jié)論尿液紅細(xì)胞離心鏡檢計(jì)數(shù)法不適用于紅細(xì)胞定量分析。UF-100分析法和朗邁UriSed分析法由于具有快速自動(dòng)化檢測的特性更適用于尿紅細(xì)胞常規(guī)定量檢測，但對尿紅細(xì)胞的識(shí)別應(yīng)另行探討。不離心鏡檢計(jì)數(shù)法能較準(zhǔn)確地反映尿液紅細(xì)胞的實(shí)際濃度，但由于操作繁瑣，效率低下且存在人工誤差而不實(shí)用，可作為自動(dòng)化尿分析儀的復(fù)檢方法。

尿紅細(xì)胞；定量分析；尿沉渣分析儀

尿液紅細(xì)胞鏡檢對于泌尿系統(tǒng)疾病的診斷、鑒別診斷、定位及預(yù)后判斷具有重要的參考價(jià)值，是重要常規(guī)試驗(yàn)項(xiàng)目。為此，美國CLSI和中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)分別對尿液紅細(xì)胞定量進(jìn)行了規(guī)范[1]。隨著自動(dòng)化儀器如UF-100全自動(dòng)尿沉渣分析儀、朗邁UriSed全自動(dòng)尿沉渣分析儀等的應(yīng)用，為尿紅細(xì)胞定量提供了新的方法。但在臨床應(yīng)用上各種檢測方法差異很大，為了探討這些差異的原因，我們以紅細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)液的濃度為參考標(biāo)準(zhǔn)，對不離心、離心鏡檢計(jì)數(shù)、UF-100全自動(dòng)尿沉渣分析儀、朗邁UriSed全自動(dòng)尿沉渣分析儀四種方法進(jìn)行比對分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料朗邁UriSed全自動(dòng)尿沉渣分析儀及配套尿沉渣計(jì)數(shù)板(匈牙利77Elektronika公司)；UF-100全自動(dòng)尿沉渣分析儀(日本Sysmex公司)；普通雙目生物顯微鏡(日本Olympus公司)；TDL-5-A低速離心機(jī)(中國飛鴿公司)；一次性尿沉渣計(jì)數(shù)板(北京恒瑞天創(chuàng)機(jī)電設(shè)備有限公司)。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞的制備選擇福建省血液中心提供的濾白洗滌紅細(xì)胞樣本1份，用血細(xì)胞分析儀(用美國雅培公司提供的校準(zhǔn)品校準(zhǔn)，批號為L5023，N5023，H5023)測量紅細(xì)胞數(shù)值，使用正常人混合尿液(收集多人尿液，用高速離心方法除去細(xì)胞成分，留取上清液)將濾白洗滌紅細(xì)胞配制成濃度為l000/μl、500/μl、250/μl、125/μl、62.5/μl、31.3/μl、15.6/μl和7.8/μl的標(biāo)準(zhǔn)液。

1.3 分析儀法檢測前充分混勻尿液，嚴(yán)格按分析儀操作說明書進(jìn)行檢測。檢測中用SYSMEX公司的UF-CHECK液對UF-100尿液分析儀進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控監(jiān)測。

1.4 人工鏡檢定量計(jì)數(shù)法不離心鏡檢計(jì)數(shù)法：將混勻尿液滴入一次性尿沉渣計(jì)數(shù)板內(nèi)，靜置片刻。先在低倍視野下觀察細(xì)胞的分布情況，再在高倍視野下計(jì)數(shù)l0個(gè)大方格內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)。離心鏡檢計(jì)數(shù)法：將10ml尿液標(biāo)本倒入一次性尿沉渣管，充分混勻。以1500 r/min，離心5min，吸去上清液，留取0.2 m l沉渣，用一次性吸管輕輕混勻后，滴入一次性尿沉渣計(jì)數(shù)板內(nèi)，靜置片刻，先在低倍視野下觀察細(xì)胞的分布情況，再在高倍視野下計(jì)數(shù)l0個(gè)大方格內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)。離心后尿液標(biāo)本的紅細(xì)胞數(shù)(紅細(xì)胞數(shù)/μl)=10個(gè)大方格的紅細(xì)胞數(shù)/濃縮倍數(shù)。在標(biāo)本配制后2 h內(nèi)完成所有檢測。

1.5 檢測方法將各濃度尿紅細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)液分成6份，每份分別用不離心鏡檢法、UF-100分析儀法、朗邁UriSed分析儀法、離心鏡檢法檢測。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)處理采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，統(tǒng)計(jì)方法采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 四種方法尿紅細(xì)胞檢測結(jié)果離心鏡檢法檢測尿紅細(xì)胞結(jié)果與理論濃度之間偏差最大，不離心鏡檢法、UF-100分析儀法、朗邁UriSed分析儀法檢測結(jié)果較接近理論濃度。在濃度為1000/μl和濃度500/μl時(shí)以不離心結(jié)果最高，離心結(jié)果最低。其它濃度以UF-100分析儀測試結(jié)果最高，離心鏡檢法最低。UF-100分析法除為1000/μl外，結(jié)果均為正偏差；不離心鏡檢法除濃度為1000/μl和濃度500/μl外，結(jié)果均為負(fù)偏差；其它兩種檢測方法結(jié)果均為負(fù)偏差。離心鏡檢法偏差最大。見表1。

表1 四種方法紅細(xì)胞檢測結(jié)果(x±s，細(xì)胞數(shù)/μl)

2.2 四種方法尿紅細(xì)胞檢測結(jié)果與理論濃度經(jīng)Wilcoxon秩和檢驗(yàn)結(jié)果不離心鏡檢法檢測結(jié)果與理論濃度之間之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；UF-100分析儀、朗邁UriSed分析儀、離心鏡檢檢測結(jié)果與理論濃度間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；不離心鏡檢法檢測結(jié)果與UF-100分析儀、朗邁UriSed分析儀檢測結(jié)果間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；離心鏡檢檢測結(jié)果與UF-100分析儀、朗邁UriSed分析儀檢測結(jié)果之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。UF-100分析儀檢測結(jié)果與朗邁UriSed分析儀檢測結(jié)果之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

2.3 四種方法尿紅細(xì)胞檢測結(jié)果與理論濃度的線性關(guān)系各檢測方法檢測結(jié)果與理論濃度均有良好的線性關(guān)系。見表3。

表2 四種方法尿紅細(xì)胞檢測結(jié)果與理論濃度經(jīng)W ilcoxon秩和檢驗(yàn)結(jié)果

表3 四種方法尿紅細(xì)胞檢測結(jié)果與理論濃度的線性關(guān)系

3 討論

尿沉渣的顯微鏡檢查是識(shí)別尿有形成分的“金標(biāo)準(zhǔn)”[2]。為規(guī)范尿沉渣鏡檢的方法學(xué)，中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)和美國CLSI都制定了尿沉渣鏡檢的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，檢測時(shí)留取l0 m l尿液于尿沉渣離心管中，標(biāo)準(zhǔn)條件下離心后，準(zhǔn)確留取0.2ml沉渣混勻，滴入標(biāo)準(zhǔn)尿沉渣計(jì)數(shù)板內(nèi)，記錄每高倍視野中尿液有形成分的數(shù)量，結(jié)果用l0個(gè)視野中最少和最多的有形成分?jǐn)?shù)(×～××個(gè)細(xì)胞/高倍視野)報(bào)告。上世紀(jì)80年代后建議采用每微升有形成分?jǐn)?shù)量(×個(gè)細(xì)胞/μl)的方式報(bào)告結(jié)果，即準(zhǔn)確計(jì)數(shù)一定體積計(jì)數(shù)板內(nèi)細(xì)胞數(shù)后，再經(jīng)換算得出尿沉渣中有形成分的數(shù)量。人工鏡檢由于操作繁瑣，在標(biāo)本量少時(shí)是可行的，但是如果標(biāo)本數(shù)量過多，那么檢測結(jié)果的質(zhì)量和速度就會(huì)受到影響[3]。近年來，為提高檢測效率，及時(shí)發(fā)出檢驗(yàn)報(bào)告，各種自動(dòng)化的尿液分析儀相繼面世，減輕了臨床檢測壓力，但是從臨床應(yīng)用上看，各種檢測方法之間有很大差異，給臨床應(yīng)用帶來混亂。

本研究結(jié)果表明，離心鏡檢法檢測尿紅細(xì)胞結(jié)果與理論濃度之間偏差最大，不離心鏡檢法、UF-100、朗邁UriSed分析儀檢測結(jié)果較接近理論濃度。其中不離心鏡檢檢測結(jié)果與理論濃度之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。離心法檢測結(jié)果與理論值相差很大，其檢測的結(jié)果均比理論值明顯減少。產(chǎn)生這種誤差的原因可能有以下幾個(gè)方面[4]：(1)尿液標(biāo)本在離心后，并沒有全部沉到管底，還有部分細(xì)胞存在上清液中，例如一些腎臟病變時(shí)，陳舊紅細(xì)胞Hb溢出，成為影細(xì)胞，使尿液比重降低，紅細(xì)胞不能完全離心到管底而留在上清液中。(2)離心時(shí)一些紅細(xì)胞被機(jī)械性破壞。(3)離心后的沉渣未充分混勻。(4)計(jì)數(shù)的尿紅細(xì)胞在計(jì)數(shù)池內(nèi)的分布不勻造成誤差。(5)尿紅細(xì)胞數(shù)量較少時(shí)，l0個(gè)大方內(nèi)的紅細(xì)胞量太少。(6)尿沉渣管的材質(zhì)不同，紅細(xì)胞黏附在管壁，造成紅細(xì)胞數(shù)量減少。(7)未能準(zhǔn)確留取0.2m l的尿沉渣。(8)在結(jié)果換算時(shí)要除以50這個(gè)濃縮系數(shù)，放大了上述的誤差。

UF-100全自動(dòng)尿沉渣分析儀是利用流式技術(shù)與電阻抗原理進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。朗邁UriSed全自動(dòng)尿沉渣分析儀是將不離心的尿液加入特制的計(jì)數(shù)板中，通過內(nèi)置離心機(jī)以2000r/min離心(半徑6cm)10s，使尿液均勻地沉積于計(jì)數(shù)板底部，然后采用顯微-電荷耦合器件(CCD)攝像技術(shù)對尿液成分圖像進(jìn)行拍攝，最后通過人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)等多種計(jì)算模型對尿液成分進(jìn)行自動(dòng)識(shí)別和分類計(jì)數(shù)并統(tǒng)計(jì)結(jié)果，檢測結(jié)果可通過對圖像的人工識(shí)別進(jìn)行修正。這兩種檢測方法檢測尿紅細(xì)胞結(jié)果與理論值之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是它們與不離心鏡檢法之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與理論濃度之間也有良好的線性關(guān)系，再加上具有快速自動(dòng)檢測的特性，這兩種方法可以作為臨床尿紅細(xì)胞定量的常規(guī)檢測方法。

綜上所述，不離心鏡檢、UF-100分析法、朗邁UriSed分析法檢測時(shí)尿液均未離心，其結(jié)果與理論值較接近，在臨床尿紅細(xì)胞常規(guī)定量上是可取的。UF-100分析法、朗邁UriSed分析法兩種方法由于具有快速自動(dòng)化檢測的特性更適用于尿紅細(xì)胞常規(guī)定量檢測，不離心鏡檢法由于操作繁瑣，效率低下且存在人工誤差而不實(shí)用，可用于自動(dòng)化尿分析儀可疑結(jié)果的復(fù)檢方法[5-7]。離心法鏡檢存在諸多影響因素，不適用于定量分析，但是離心鏡檢法可以濃縮尿液中的有形成分，對于早期發(fā)現(xiàn)病理成分，具有重要的診斷意義，如果能夠進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化操作，其結(jié)果也可具有一定的代表性，仍是常規(guī)檢測的重要方法。

此次研究是在無其它物質(zhì)干擾的理想狀態(tài)下檢測尿紅細(xì)胞。在實(shí)際工作中，尿液標(biāo)本的存放時(shí)間、尿紅細(xì)胞經(jīng)腎臟或泌尿道擠壓等破壞、尿液比重過低、尿pH值偏高、尿液標(biāo)本收集容器受到消毒劑污染，真菌、脂肪滴、結(jié)晶等被誤判為紅細(xì)胞，菌尿等都會(huì)干擾尿紅細(xì)胞定量檢測[8-10]。因此尿液標(biāo)本檢測前應(yīng)重視標(biāo)本分析前質(zhì)量控制[11]，對尿分析儀結(jié)果有疑問時(shí)，應(yīng)進(jìn)行人工鏡檢確認(rèn)，決不能不加分析作為確診依據(jù)。采用尿沉渣分析儀法和顯微鏡檢查法聯(lián)合檢測尿液可降低漏檢率，提高檢測的精確度，為臨床準(zhǔn)確診斷和及時(shí)治療提供有效的依據(jù)[12]。此外，由于在尿紅細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)液配制過程中，樣本的稀釋也會(huì)造成一定程度的誤差，本研究所用的四種檢測方法檢測紅細(xì)胞時(shí)的差異并不代表各方法學(xué)的真實(shí)識(shí)別能力。

[1]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].第3版.南京:東南大學(xué)出版社,2006:293-294.

[2]叢玉隆.尿液沉渣檢查標(biāo)準(zhǔn)化建議[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2002,25 (3):249-250.

[3]叢玉隆,馬駿龍.尿液有形成分鏡檢與自動(dòng)化檢測方法學(xué)利弊和互補(bǔ)分析[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2009,32(6):609-611.

[4]叢玉隆,馬駿龍,張時(shí)民,等.尿液細(xì)胞成分定量分析方法學(xué)研究[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2006,29(3):211-214.

[5]陸玉靜,馬駿龍,劉培培,等.朗邁UrisSed型全自動(dòng)尿沉渣分析儀的應(yīng)用評價(jià)[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志,2010,35(3):326-329.

[6]祝丙華,王會(huì)中,高德祿,等.UrisSed全自動(dòng)尿液有形成分分析儀性能評價(jià)[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,33(14):1727-1729.

[7]叢玉隆.自動(dòng)化儀器檢查尿有形成分的問題與思考[J].實(shí)用醫(yī)院臨床雜志,2012,9(3):1-3.

[8]洪英,田居祥.AVE-762C型尿液有形成分分析儀系統(tǒng)性能評價(jià)[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012,30(5):524-525.

[9]馬駿龍,叢玉隆.菌尿?qū)δ蛞悍治鰞x測定尿紅細(xì)胞的影響[J].中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,l999,22(4):206-208.

[10]陳津,王德春,王丹,等.IRIs iQ200全自動(dòng)尿沉渣分析儀與Symex UF-100分析儀及人工鏡檢的比較和評價(jià)[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2006,29(4):374-375.

[11]高杰.檢驗(yàn)科應(yīng)重視分析前標(biāo)本因素對檢驗(yàn)結(jié)果的影響[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012,30(5):461-462.

[12]張紅霞,費(fèi)安興,江鴻,等.尿干化學(xué)分析法、尿沉渣分析儀法和顯微鏡檢查法聯(lián)合檢測尿白、紅細(xì)胞及管型結(jié)果分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012,30(3):288-290.

M ethodological study of quantitative analysis for urinary red blood cells

LI Yangyu，ZHENG Chunsheng.Department of Laboratory Medicine，Affiliated People's Hospital of Fujian University of Traditional Chinese Medicine，F(xiàn)uzhou 350004，China

ObjectiveTo study the quantitativemethod of detecting urinary red blood cells(RBC)by automated urine cell analyzer and evaluate its relationship with themicroscopic count.MethodsUrine samples with different concentrations of RBCs were detected by manualm icroscopy with/without centrifugalization,UF-100 urinary sediment analyzer and LabUMat UriSed automated urine cell analyzer,respectively.ResultsUrine RBC concentration detected by manualmicroscopy with centrifugalization deviated dramatically from theoretical concentration.While the concentration analyzed by manualm icroscopy without centrifugalization,UF-100 and LabUMat UriSed was close to theoretical concentration.There was no statistical difference between results analyzed bymanualmicroscopy without centrifugalization and theoretical concentration(P＞0.05),There were statistical differences among the results tested bymanualmicroscopywith centrifugalization,UF-100 and LabUMat UriSed(P＜0.05).There were no statistical difference between results analyzed by manualmicroscopy without centrifugalization and that by UF-100 or by LabUMat UriSed(P＞0.05).Therewere statistical difference between results analyzed bymanualmicroscopy with centrifugalization and that by UF-100 or by LabUMat UriSed(P＜0.05).There was statistical difference between results analyzed by UF-100 and that by LabUMat UriSed(P＜0.05).Therewas good linear relationship between the detection results of the fourmethods and the theoretical concentration(rwas 0.991，0.999，0.999，0.998,respectively).ConclusionManualmicroscopy with centrifugalization is not app licable for the quantitative analysis of urinary RBCs.UF-100 and LabUMat UriSed aremore applicable for routine quantitative detection of urinary RBCs for their quick and automated features.Nevertheless,the function for the cell identification should be under further investigation.Manual microscopy without centrifugalization may reflect the actual RBC concentration more accurately. But it's overelaborate,inefficientand existing artificial error,it should be used for rechecking the results detected by the automated urine cell analyzer.

Urinary Red Blood Cells；Quantitativemethods；Urinary sedimentanalyzer

R446.12+1

A

1674-1129(2013)05-0425-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.007

李楊宇，男，1978年8月出生，主管技師，畢業(yè)于福建醫(yī)科大學(xué)，本科，主要研究方向?yàn)榕R床檢驗(yàn)。