■林春榕 左紹遠(yuǎn) 張翠香

（大理學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，云南大理 671000）

鈍頂螺旋藻（Spirulina platensis，SP）是藍(lán)藻門、藍(lán)藻綱、斷增藻目、顫藻科中的螺旋藻屬低等水生植物。SP是種微藻,體長(zhǎng)約200～500 μm,寬僅為5～10 μm,因藻體呈螺旋狀而得名。螺旋藻的蛋白質(zhì)含量十分豐富，高達(dá)干重的60%～70%，含有人類和動(dòng)物所必需的全部營(yíng)養(yǎng)必需氨基酸[1-2]。螺旋藻藻體細(xì)胞壁主要由粗蛋白組成，缺少纖維素，無(wú)需任何加工即可被動(dòng)物消化吸收，消化率高達(dá)70%以上，生物學(xué)價(jià)值為79.5%～87.7%。研究表明,除豐富的蛋白質(zhì)、多種微量元素、維生素外,SP尚含有螺旋藻多糖、藍(lán)藻蛋白、β-胡蘿卜素、γ-亞麻酸、肌醇等有益健康的生物活性物質(zhì)，這些活性物質(zhì)具有提高機(jī)體免疫力、抗氧化、抗病毒等多種功效[3-5]。隨著我國(guó)畜牧業(yè)的不斷發(fā)展，飼料資源日益緊張，而螺旋藻富含各種營(yíng)養(yǎng)成分且其營(yíng)養(yǎng)成分非常接近動(dòng)物機(jī)體的需要標(biāo)準(zhǔn)，因此，SP有可能成為一種優(yōu)質(zhì)、高效、綠色的營(yíng)養(yǎng)性飼料添加劑來(lái)源。本試驗(yàn)以SP為營(yíng)養(yǎng)性飼料添加劑，觀察了SP對(duì)斷奶至3月齡新西蘭兔生產(chǎn)性能、免疫功能、抗氧化作用及部分血液生化指標(biāo)的影響，以期為SP在肉兔生產(chǎn)中的實(shí)際應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇斷奶日齡35 d,體重為（980±80）g、健康狀況良好的新西蘭兔80只，公母各半，采用單因子完全隨機(jī)分組設(shè)計(jì)，隨機(jī)分為4個(gè)處理組：對(duì)照組、試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5只兔。組間體重?zé)o顯著差異（P＞0.05）。進(jìn)兔前將兔舍、兔籠消毒，4層籠養(yǎng)。其中對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別飼喂添加0.75%、1.5%、3%螺旋藻的基礎(chǔ)日糧。螺旋藻粉由云南永勝程海藍(lán)寶股份有限責(zé)任公司提供（批號(hào)：20110912）。試驗(yàn)期間日喂食3次，時(shí)間分別為08:00、12:00、18:30，并根據(jù)喂料后兔的采食情況增減喂料量（以下次投料前料槽略有余料為宜），使其處于自由采食狀態(tài)，自由飲水，兔舍自然通風(fēng)，自然采光，每3～5 d消毒兔舍1次。預(yù)試期7 d，正試期30 d。

1.2 基礎(chǔ)日糧

基礎(chǔ)日糧（對(duì)照組）參照NRC(1977)家兔飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制而成，基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。用制粒機(jī)將日糧壓制成直徑約4～6 mm的顆粒飼料，儲(chǔ)存在通風(fēng)干燥避光處備用。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.3 測(cè)定指標(biāo)和方法

1.3.1 生長(zhǎng)性能指標(biāo)測(cè)定

于正式試驗(yàn)期開始當(dāng)天晨飼前空腹12 h稱重作為試驗(yàn)兔始重，試驗(yàn)結(jié)束后空腹稱重作為試驗(yàn)兔末重，兩者相減即為增重，計(jì)算出平均日增重。正式試驗(yàn)期內(nèi)每天準(zhǔn)確記錄采食量，用于計(jì)算平均日采食量。日均采食量與平均日增重之比即為料重比。

1.3.2 檢測(cè)樣品采集與制備

在試驗(yàn)開始后的第30 d早晨空腹稱重后，每組隨機(jī)抽取4只體重接近平均體重的兔子，心臟采血8 ml，取0.5 ml測(cè)血糖，其余緩慢注入潔凈離心管中，室溫避光靜置30 min后，3 000 r/min離心10 min，分離血清，置于-20℃下冰箱保存，用于免疫指標(biāo)與生化指標(biāo)檢測(cè)。隨即將兔頸椎錯(cuò)位法致死，屠宰后取脾臟和胸腺，并剔除脂肪組織，迅速稱取已剔去脂肪的脾臟和胸腺的鮮重，并計(jì)算脾臟和胸腺指數(shù)。

免疫器官指數(shù)（g/kg）=免疫器官重（g）/宰前活重（kg）。

免疫球蛋白IgG、IgA、IgM測(cè)定試劑盒為北京利德曼生化技術(shù)有限公司產(chǎn)品，按試劑盒說明書進(jìn)行測(cè)定，超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）、總蛋白、白蛋白、總膽固醇、甘油三酯測(cè)定試劑盒為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品，按試劑盒說明書進(jìn)行測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（X±S）”表示。用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，Duncan's法多重比較，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 螺旋藻對(duì)肉兔生產(chǎn)性能的影響(見表2)

表2 螺旋藻對(duì)肉兔生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，從平均日采食量來(lái)看，對(duì)照組和各試驗(yàn)組日均采食量差異不顯著(P＞0.05)，而試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組兔平均日增重則顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。試驗(yàn)Ⅰ組平均日增重比對(duì)照組提高了12.90%，但差異不顯著（P＞0.05）；試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組料重比顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），其中Ⅲ組料重比最低，與對(duì)照組相比降低了20.88%。

2.2 螺旋藻對(duì)肉兔免疫器官指數(shù)的影響(見表3)

表3 螺旋藻對(duì)肉兔免疫器官指數(shù)的影響（g/kg）

由表3可以看出，添加螺旋藻后，各組肉兔脾臟指數(shù)均提高，但無(wú)明顯差異（P＞0.05），而添加螺旋藻對(duì)胸腺指數(shù)影響明顯，與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組肉兔胸腺指數(shù)均顯著升高（P＜0.05），以 3%螺旋藻添加水平組的胸腺指數(shù)達(dá)到最大值，比對(duì)照組提高了30.37%，但各試驗(yàn)組間相比差異不顯著，表明添加不同水平的螺旋藻對(duì)肉兔胸腺指數(shù)的影響無(wú)劑量效應(yīng)關(guān)系。

2.3 螺旋藻對(duì)肉兔血清免疫球蛋白含量的影響(見表4)

表4 螺旋藻對(duì)肉兔血清免疫球蛋白含量的影響（g/l）

由表4可知，與對(duì)照組相比，螺旋藻處理Ⅰ組對(duì)肉兔血清IgG無(wú)顯著影響（P＜0.05），但螺旋藻處理Ⅱ、Ⅲ組對(duì)血清IgG有顯著影響（P＜0.05），且隨著螺旋藻添加量的增加，IgG呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢(shì)，其中以3%添加組效果最明顯。但各處理組間無(wú)明顯差異（P＞0.05）。而螺旋藻對(duì)血清IgA與IgM 則無(wú)明顯的影響（P＞0.05）。

2.4 螺旋藻對(duì)肉兔血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性及丙二醛（MDA）含量的影響(見表5)

表5 螺旋藻對(duì)肉兔血清SOD、GSH-Px活性及MDA含量的影響

表5結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，添加螺旋藻后，各處理血清SOD活性明顯升高（P＜0.05），分別比對(duì)照組提高了23.94%、29.78%、44.13%；1.5%、3%添加水平可使GSH-Px活性顯著升高（P＜0.05），但0.75%的螺旋藻添加水平對(duì)GSH-Px活性無(wú)明顯影響（P＞0.05）；0.75%、1.5%、3%的螺旋藻添加水平還使血清MDA含量顯著降低（P＜0.05），但各試驗(yàn)組間無(wú)明顯差異（P＞0.05）。

2.5 螺旋藻對(duì)肉兔血清生化指標(biāo)的影響(見表6)

表6 螺旋藻對(duì)肉兔血清生化指標(biāo)的影響

從表6結(jié)果可看出，日糧中添加0.75%、1.5%、3%的螺旋藻，血清總蛋白含量呈逐漸升高的趨勢(shì)。與對(duì)照組相比，1.5%、3%的螺旋藻添加水平可使血清總蛋白含量明顯升高（P＜0.05），分別升高16.00%、19.31%。但0.75%螺旋藻添加水平對(duì)總蛋白含量無(wú)明顯影響。另外，日糧中添加0.75%、1.5%、3%的螺旋藻，可明顯降低血清膽固醇含量(P＜0.05)，與對(duì)照組相比，分別降低18.22%、21.50%、30.84%。而日糧中添加螺旋藻對(duì)血清白蛋白、甘油三酯含量無(wú)明顯影響。

3 討論

3.1 螺旋藻對(duì)肉兔生產(chǎn)性能的影響

目前，有關(guān)螺旋藻作為飼料添加劑在魚、蝦類養(yǎng)殖中的應(yīng)用已有研究報(bào)道[6-11],但在肉兔的養(yǎng)殖中少見報(bào)道。螺旋藻是一種富含優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)的微藻，其細(xì)胞壁非常薄，極易被動(dòng)物消化為氨基酸而吸收。而當(dāng)必需氨基酸數(shù)量與種類滿足動(dòng)物需要時(shí)，動(dòng)物的生長(zhǎng)性能才能達(dá)到最佳水平。動(dòng)物機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)的需要從本質(zhì)上來(lái)說是對(duì)氨基酸的需要。螺旋藻中含有18種以上氨基酸，且含量豐富、組成均衡，可有效地補(bǔ)充動(dòng)物對(duì)氨基酸的需求。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，日糧中添加0.75%、1.5%、3%的螺旋藻，對(duì)照組和各試驗(yàn)組日均采食量并無(wú)明顯差異，而添加1.5%、3%的螺旋藻組肉兔平均日增重顯著高于對(duì)照組，料重比則顯著低于對(duì)照組，但添加0.75%的螺旋藻對(duì)肉兔平均日增重及料重比則無(wú)明顯影響（P＞0.05）。

3.2 螺旋藻對(duì)肉兔免疫器官指數(shù)及血清免疫球蛋白含量的影響

脾臟和胸腺是動(dòng)物最為重要的免疫器官，胸腺在淋巴細(xì)胞的形成、分導(dǎo)、分化過程中起著重要的作用；脾臟是動(dòng)物的外周免疫器官，是T、B淋巴細(xì)胞定居和對(duì)抗原刺激進(jìn)行免疫應(yīng)答的場(chǎng)所。免疫器官指數(shù)是免疫器官重與活體重的比值，它是衡量動(dòng)物機(jī)體免疫水平的重要指標(biāo)之一。免疫器官指數(shù)越大，表明動(dòng)物的免疫功能越強(qiáng)。而血清IgG、IgA、IgM 3種免疫球蛋白是參與體液免疫的主要抗體，三者在血清中的含量可以代表機(jī)體的體液免疫水平[12]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加0.75%、1.5%、3%的螺旋藻，可顯著提高肉兔胸腺指數(shù)（P＜0.05），添加1.5%、3%的螺旋藻可促進(jìn)血清IgG水平升高（P＜0.05），表明螺旋藻具有促進(jìn)動(dòng)物機(jī)體免疫功能的作用，提高動(dòng)物抵抗疾病的能力，其機(jī)制可能與螺旋藻的活性成分螺旋藻多糖有關(guān)[13]。

3.3 螺旋藻對(duì)血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性及丙二醛（MDA）含量的影響

自由基是機(jī)體正?；虍惓Ｉ磻?yīng)的產(chǎn)物,它的生成會(huì)對(duì)包括免疫細(xì)胞在內(nèi)的所有細(xì)胞造成嚴(yán)重毒害,不僅損害細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu),而且影響蛋白質(zhì)功能、DNA結(jié)構(gòu)和細(xì)胞內(nèi)能量代謝[14]。而超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPx）是體內(nèi)最重要的抗氧化酶類之一，在機(jī)體抗氧化、抗自由基損傷中起著重要作用，能有效地清除體內(nèi)產(chǎn)生的自由基，從而維持體內(nèi)自由基產(chǎn)生和清除的動(dòng)態(tài)平衡，對(duì)機(jī)體具有較好的保護(hù)作用。MDA是體內(nèi)自由基反應(yīng)的終末產(chǎn)物，其含量可間接反映體內(nèi)自由基的多少及反應(yīng)的強(qiáng)度。本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加螺旋藻，可使SOD活性顯著提高，同時(shí)1.5%、3%的添加水平還可使GSH-Px活性顯著提高（P＜0.05）。另外，0.75%、1.5%、3%的螺旋藻添加水平還使血清MDA濃度明顯降低，與對(duì)照組相比，差異顯著（P＜0.05）。表明螺旋藻具有較好的清除自由基能力，保護(hù)機(jī)體免受過氧化損傷。

3.4 螺旋藻對(duì)肉兔血清生化指標(biāo)的影響

血清總蛋白和白蛋白水平是判斷動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)狀況的重要指標(biāo)之一，同時(shí)也可反映日糧蛋白質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)水平、動(dòng)物對(duì)蛋白質(zhì)的消化吸收程度。本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加1.5%、3%的螺旋藻，可使肉兔血清總蛋白的含量顯著升高（P＜0.05）。表明添加螺旋藻后，氨基酸的種類和數(shù)量基本平衡，肉兔對(duì)蛋白質(zhì)的消化以及對(duì)氨基酸的吸收、利用得到進(jìn)一步改善。

膽固醇與甘油三酯是血脂的主要成分。尤其是膽固醇，是動(dòng)脈粥樣硬化形成的主要原因,血液中長(zhǎng)期過高的膽固醇及血管壁上過多的脂類容易被自由基氧化,形成脂質(zhì)過氧化物,在血管壁上沉積,從而導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化。動(dòng)脈粥樣硬化可導(dǎo)致動(dòng)物心、腦血管疾病。已有研究表明，螺旋藻可降低高脂血癥大鼠血脂[15]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加0.75%、1.5%、3%的螺旋藻，可明顯降低血清膽固醇含量（P＜0.05），與對(duì)照組相比，分別降低18.22%、21.50%、30.84%。但螺旋藻對(duì)甘油三酯含量無(wú)明顯影響。因此，日糧中添加螺旋藻可預(yù)防肉兔動(dòng)脈粥樣硬化的形成。

綜上所述，日糧中添加螺旋藻，可促進(jìn)肉兔生長(zhǎng)、降低料重比，提高肉兔機(jī)體免疫力及抗氧化能力，降低肉兔血清膽固醇含量。其中以1.5%、3%的添加水平效果較好。