■王賞初 朱年華 肖俊武 王 璟 周澤輝

(1.長沙興嘉生物工程股份有限公司，湖南長沙 410000；2.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)，江西南昌 330045)

鋅是魚類重要的微量元素之一，是許多酶的組成成分或激活劑，如碳酸酐酶、羧肽酶、堿性磷酸酶(AKP)、乳酸脫氫酶等，而這些酶廣泛參與核酸和蛋白質(zhì)合成、能量代謝、氧化還原、細(xì)胞免疫和體液免疫過程等多種代謝[1-2]。最初鋅元素主要以硫酸鋅、氧化鋅等形式添加，而這些形式的無機鋅在應(yīng)用中存在生物學(xué)效價低，產(chǎn)品性能不穩(wěn)定，有毒物質(zhì)殘留多，不安全等諸多問題。因此，尋求一種安全高效綠色環(huán)保的新型微量元素鋅添加劑成為了行業(yè)關(guān)注的焦點。堿式氯化鋅作為一種新型鋅源，具有不吸濕、不溶于水、易溶于酸性和中性鹽溶液、產(chǎn)品穩(wěn)定性強及生物利用率高等性質(zhì)[2-3]。歐洲食品安全局(EFSA)報道，堿式氯化鋅作為一種新型鋅源在所有動物飼料中適量添加是安全的，并且是一種能夠滿足動物需求的有效鋅源[4]。有研究表明，堿式氯化鋅的生物利用率要比氧化鋅高2～3倍。而在低鋅日糧中(Zn≤400 mg/kg)，堿式氯化鋅與硫酸鋅的效價相近或略高[5]。堿式氯化鋅在仔豬中的應(yīng)用已有許多報道，已有的研究顯示，堿式氯化鋅在仔豬飼料中應(yīng)用對于促進(jìn)生長和預(yù)防腹瀉顯示出了比氧化鋅更多的優(yōu)勢[5-7]。到目前為止，國內(nèi)尚未見到有堿式氯化鋅在水產(chǎn)動物中應(yīng)用的研究報告。本試驗旨在探討在鯽魚配合飼料中添加不同鋅源及鋅水平對其生長性能、體形、血液指標(biāo)及組織中微量元素含量等方面的影響,為堿式氯化鋅在水產(chǎn)飼料中的應(yīng)用提供參考。

1 試驗設(shè)計

1.1 試驗地點

長沙興嘉天華農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司水產(chǎn)微量元素營養(yǎng)技術(shù)研究與示范基地。

1.2 試驗材料和方法

1.2.1 試驗動物

芙蓉鯽購自湖南省水科所，試驗選用體色鮮亮、體表無病無傷、體格健壯、體型和體重基本一致的芙蓉鯽魚，體質(zhì)量為（3.33±0.22）g，隨機平均分配至9個養(yǎng)殖桶中，每桶20尾，共計180尾。

1.2.2 試驗日糧及設(shè)計

本試驗基礎(chǔ)飼料參照鯽魚營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗組日糧分別在基礎(chǔ)日糧中添加硫酸鋅和堿式氯化鋅兩種不同的鋅源，添加水平均為50 mg/kg（以鋅元素計），試驗設(shè)計方法見表2。試驗設(shè)3個處理，以飼喂基礎(chǔ)日糧的鯽魚為對照組，每個處理3個重復(fù)。所有飼料原料經(jīng)粉碎過40目篩，充分混合均勻后用制粒機制成1.5 mm粒徑的顆粒飼料，陰干后，-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

表2 試驗設(shè)計

1.2.3 飼養(yǎng)管理

選用芙蓉鯽作為試驗魚，采用常規(guī)鹽水法對魚體消毒，試驗前，所有鯽魚先用基礎(chǔ)飼料馴養(yǎng)1周，使其適應(yīng)試驗飼料。挑選體格健壯，規(guī)格整齊的魚種進(jìn)行隨機分組，設(shè)3個處理組，每個處理組3個重復(fù)，每個重復(fù)20尾，平均體質(zhì)量為（3.33±0.22）g。在玻璃鋼化桶(0.467 m3)中進(jìn)行養(yǎng)殖試驗，水源為當(dāng)?shù)厮畮欤ㄌ烊凰?，未投飼料）。每?4 h流水，24 h充氧，每星期換水1/2。分別于每日的早9：00和下午16：00進(jìn)行投喂，每次投喂持續(xù)50～70 min，日投喂量為魚體質(zhì)量的3%～5%。每日測定水體溫度，觀察并記錄試驗魚的攝食及活動狀況。根據(jù)魚體體重及攝食情況每周及時調(diào)整投喂量。飼養(yǎng)72 d后，取樣測定各項指標(biāo)。

1.2.4 樣本制備

試驗開始和結(jié)束時，分別稱重1次，用于計算增重率和平均日增重、特定生長率。試驗結(jié)束時，每組取魚5尾以上，用無菌注射器從尾靜脈取血，每5尾魚的血液混合，作為一個樣本，放入4℃冰箱靜置過夜，3 000 r/min離心10 min制取血清，用于血液指標(biāo)的測定。

1.2.5 指標(biāo)測定

①生長性能指標(biāo)：成活率、增重率、平均日增重、餌料系數(shù)、肥滿度、臟體比。

增重率(%)=[末均重(g)-初均重(g)+死魚重(g)]/初均重(g)×100；

特定生長率(%/d)=[Ln末均重(g)-Ln初均重(g)]/養(yǎng)殖天數(shù)×100；

平均日增重=[末均重(g)-初均重(g)]/養(yǎng)殖天數(shù)(d);

餌料系數(shù)=總投飼量(g)/[終總重(g)-初總重(g)+死魚重(g)]；

肥滿度（g/cm3）=魚體重(g)/魚體長 (cm)3×100；

臟體比（%）=內(nèi)臟總重(g)/魚體重(g)×100。

②血液指標(biāo)：堿性磷酸酶、5'-核苷酸酶用全自動生化分析儀測定。

③組織器官微量元素鋅的含量：每個處理取9尾魚脊椎骨樣混合在一起，測定組織鋅含量，參考原子吸收光譜法(GB/T13885—2003)。

1.2.6 數(shù)據(jù)分析

試驗數(shù)據(jù)均采用SPSS statistics 16.0統(tǒng)計軟件分析，用單因素方差分析（One-way ANOVA）中的Duncan's多重比較法分析試驗數(shù)據(jù)的差異顯著性。試驗數(shù)據(jù)用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 試驗結(jié)果與分析

2.1 不同鋅源對鯽魚生長性能及形體指標(biāo)的影響(見表3)

表3 鯽魚的生長性能及形體指標(biāo)測定結(jié)果

如表3所示，不同鋅源組鯽魚增重率和特定生長率以堿式氯化鋅最高，顯著高于對照組（P＜0.05）；平均日增重極顯著高于對照組(P＜0.01)。與硫酸鋅組對比，添加堿式氯化鋅組鯽魚增重率、平均日增重及特定生長率有升高趨勢，分別高于硫酸鋅組5.38%、3.19%、4.2%（P＞0.05）。硫酸鋅組增重率和特定生長率高于對照組，但無顯著差異（P＞0.05）。加鋅試驗組餌料系數(shù)均比對照組低（P＞0.05）。各試驗組鯽魚肥滿度和臟體比無顯著差異（P＞0.05）。

2.2 不同鋅源對鯽魚血清指標(biāo)及骨鋅含量的影響（見表4）

表4 鯽魚血清指標(biāo)及脊椎骨鋅含量測定結(jié)果

如表4所示，日糧中添加堿式氯化鋅組鯽魚血清堿性磷酸酶活力和5'-核苷酸酶活力分別高于硫酸鋅組 173.02%(P＜0.05)、59.41%(P＜0.05)，分別高于對照組319.29%（P＜0.05）、91.29%（P＜0.05）。本試驗配方中添加不同鋅源對鯽魚脊椎骨微量元素的含量有影響。堿式氯化鋅組鯽魚脊椎骨鋅含量分別比對照組和硫酸鋅組高15.66%、8.64%。

3 討論

3.1 鋅對鯽魚生長性能的影響

鋅是魚類重要的微量元素之一，有促生長和增強魚體免疫力等生理功能[8]。本試驗結(jié)果顯示，未添加外源鋅的對照組（鋅含量93.03 mg/kg），鯽魚的生長性能均低于額外添加任何鋅源的試驗組，表明在實用飼料中添加一定量的外源鋅是有必要的。這可能是由于基礎(chǔ)飼料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子降低了鋅的消化吸收[8]，從而不能最大滿足鯽魚生長對鋅的需要，需要補充外源鋅。堿式氯化鋅在仔豬飼料中對于促進(jìn)生長和預(yù)防腹瀉顯示出了更多的優(yōu)勢[5-6]。但在水產(chǎn)上尚未見有關(guān)應(yīng)用研究報道。本試驗日糧蛋白源主要是植物蛋白，以鯽魚幼魚為試驗對象，結(jié)果顯示等量添加不同鋅源，堿式氯化鋅組鯽魚增重率、平均日增重及特定生長率均有高于硫酸鋅組的趨勢，且顯著或極顯著高于對照組（P＜0.05，P＜0.01）。說明本飼料基礎(chǔ)配方鋅未能滿足鯽魚最大生長需要，且在此飼料配方基礎(chǔ)上添加一定量的堿式氯化鋅的促生長效果要比添加等量的硫酸鋅好。

3.2 不同鋅源對鯽魚部分血液指標(biāo)的影響

鋅與動物體內(nèi)300多種酶的結(jié)構(gòu)和生物活性有關(guān)，參與體內(nèi)多種代謝[1，9]。堿性磷酸酶是典型的鋅依賴酶，對缺鋅非常敏感[10]。飼料中缺鋅，血清中鋅和堿性磷酸酶含量會下降[8]。在水生動物的骨骼礦化過程中也起著重要的作用，能夠較真實地反映魚類對鋅的攝取情況[11]。Ogino等[10]對鯉魚的研究表明，飼料中鋅含量高時血清堿性磷酸酶的活性也高。血清5'-核苷酸酶是一種特殊的磷酸水解酶，在動物體內(nèi)分布廣泛，參與嘌呤核苷酸的補救合成途徑，還作為重要的免疫信號分子參與跨膜信號傳導(dǎo)及細(xì)胞黏附。有研究認(rèn)為，血清堿性磷酸酶和5'-核苷酸酶可作為畜禽動物鋅營養(yǎng)狀況的有效指標(biāo)。本試驗結(jié)果顯示，堿式氯化鋅組相對于硫酸鋅組鯽魚血清堿性磷酸酶活力和5'-核苷酸酶活力有升高的趨勢。以血清堿性磷酸酶和5'-核苷酸酶活力為生物學(xué)效價評價指標(biāo)，堿式氯化鋅在此試驗配方條件下，相對于硫酸鋅的生物學(xué)效價有升高的趨勢。

3.3 不同鋅源對鯽魚脊椎骨鋅含量的影響

許多研究表明，脊椎骨鋅含量是反映體內(nèi)鋅狀態(tài)的一個敏感指標(biāo)[1]，本試驗結(jié)果顯示，在本試驗飼料配方中添加堿式氯化鋅鯽魚脊椎骨中鋅含量比硫酸鋅組高。說明堿式氯化鋅組的鋅更多地存在于脊椎骨中，參與體內(nèi)骨骼代謝。而以脊椎骨鋅含量作為鋅源的生物學(xué)效價評價指標(biāo)，則堿式氯化鋅的鋅生物學(xué)效價略高于硫酸鋅。

4 結(jié)論

在飼料中的應(yīng)用研究發(fā)現(xiàn)，堿式氯化鋅是一種比硫酸鋅生物效價更高的營養(yǎng)性鋅源，更有利于提高鯽魚的生產(chǎn)性能。在鯽魚飼料生產(chǎn)中，為了提高飼料效率和減少環(huán)境污染，可以使用堿式氯化鋅替代硫酸鋅。堿式氯化鋅作為一種安全、環(huán)保、高效的新型無機鋅鹽，在其他水產(chǎn)動物上的應(yīng)用、最適添加水平及作用機理還有待進(jìn)一步研究，以達(dá)到最佳的使用效果，獲得最好的經(jīng)濟效益。