■李金龍 胡 毅 郇志利 戴振炎 肖調(diào)義 毛 盼 劉莊鵬 張俊智

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙 410128）

黃鱔是我國(guó)重要的特種水產(chǎn)養(yǎng)殖品種之一，其營(yíng)養(yǎng)豐富、肉質(zhì)鮮美，深受消費(fèi)者喜愛(ài)[1]。近年來(lái)，黃鱔養(yǎng)殖在淡水特種養(yǎng)殖中地位日益凸顯，但隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大和養(yǎng)殖環(huán)境的不斷惡化，黃鱔生長(zhǎng)緩慢、病害滋生等問(wèn)題日趨嚴(yán)重，而消毒劑、抗生素等化學(xué)藥物濫用嚴(yán)重影響黃鱔生長(zhǎng)和魚(yú)體品質(zhì)。因此研發(fā)健康、安全、高效的添加劑已成為黃鱔健康養(yǎng)殖亟需解決的問(wèn)題。

我國(guó)中草藥資源豐富，分布廣泛，具有價(jià)格低廉、加工工藝簡(jiǎn)單、副作用少等特點(diǎn)。中草藥作為免疫增強(qiáng)劑具有促生長(zhǎng)[2]、增強(qiáng)免疫、提高消化、改善魚(yú)體品質(zhì)[3]等功效，備受學(xué)者們關(guān)注。目前，不同中草藥添加水平對(duì)黃鱔生長(zhǎng)、免疫、血液生化指標(biāo)、消化酶等影響的研究仍少見(jiàn)報(bào)道。我們已從4種復(fù)方中草藥中篩選出一種具良好的誘食效果和促生長(zhǎng)的復(fù)合中草藥，已獲國(guó)家發(fā)明專(zhuān)利授權(quán)(CN 102302098 A)。本試驗(yàn)旨在探討該復(fù)合中草藥在黃鱔飼料中的最適添加量。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)選用的中草藥杜仲、當(dāng)歸、山楂、白術(shù)、肉桂、小茴香、大黃、黃芩、黃芪等購(gòu)自長(zhǎng)沙市某藥店，藥材烘干后粉碎過(guò)篩，按復(fù)方中草藥配方混勻制備，置于-20℃冰箱中貯存?zhèn)溆?。以魚(yú)粉、豆粕、玉米蛋白粉、啤酒酵母等為蛋白源配制成的粉狀飼料為對(duì)照組,分別添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0(對(duì)照)、0.5%、1.0%、2.0%的復(fù)方中草藥配制成4種粉狀飼料 (見(jiàn) 表 1)，即 為 D1(0)、D2(0.5%)、D3(1.0%)、D4(2.0%)。

表1 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)成分（%干重）

1.2 飼養(yǎng)與管理

試驗(yàn)用黃鱔為洞庭湖區(qū)規(guī)格整齊的野生黃鱔，在常德市西湖區(qū)某黃鱔養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行網(wǎng)箱馴化暫養(yǎng)。鱔魚(yú)入箱后2 d內(nèi)不投餌料，2 d后開(kāi)始投餌馴化。首次少量投喂比例為1∶1的蚯蚓和鮮魚(yú)肉糜，依照攝食情況逐漸地增加投喂量和鮮魚(yú)漿的投喂比例，直到鱔魚(yú)能完全攝食全鮮魚(yú)漿且穩(wěn)定攝食其體重5%的量后，開(kāi)始添加粉狀試驗(yàn)飼料（鮮魚(yú)漿∶飼料=4∶1），依照攝食情況逐漸地增加試驗(yàn)飼料的投喂比例，直到鱔魚(yú)能穩(wěn)定攝食粉狀試驗(yàn)飼料后，饑餓24 h后挑選規(guī)格均勻、健康的黃鱔分組。

養(yǎng)殖試驗(yàn)在同一池塘的網(wǎng)箱中進(jìn)行，試驗(yàn)黃鱔初始平均重為(20.53±0.18)g，隨機(jī)分成6組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)網(wǎng)箱(1.5 m×2.0 m×1.5 m)飼喂70尾，以魚(yú)體重的3%～5%投喂，10 min內(nèi)食完為宜，日投喂1次(17:30-19:00)各組飼糧，養(yǎng)殖試驗(yàn)進(jìn)行90 d。

1.3 樣品采集、分析及計(jì)算

1.3.1 生長(zhǎng)指標(biāo)

試驗(yàn)初始和結(jié)束時(shí)分別對(duì)各網(wǎng)箱的鱔魚(yú)進(jìn)行記數(shù)、稱重。

成活率(SR，%)=試驗(yàn)結(jié)束魚(yú)尾數(shù)/試驗(yàn)初始魚(yú)尾數(shù)×100；

增重率(WG,%)=(試驗(yàn)?zāi)~(yú)總重-試驗(yàn)初魚(yú)總重)/試驗(yàn)初魚(yú)總重×100。

1.3.2 血液指標(biāo)

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后饑餓24 h,用2.0 ml的無(wú)菌注射器從尾靜脈采血，每個(gè)網(wǎng)箱隨機(jī)取5尾鱔魚(yú)采血，采出的血液合于10 ml無(wú)菌離心管中，4℃靜置過(guò)夜后，4 000 r/min離心10 min，取上層血清置于-80℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

血糖（GLU）、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、天門(mén)冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、總抗氧化力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LSZ)等均采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測(cè)定，補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4采用浙江伊利康生物技術(shù)有限公司試劑盒測(cè)定。

1.3.3 腸道消化酶

試驗(yàn)結(jié)束后，每個(gè)網(wǎng)箱隨機(jī)取5尾黃鱔置死后，在冰盤(pán)上迅速解剖取其前腸，除去腸道內(nèi)容物和附著物，用冰生理鹽水清洗，濾紙吸干后稱重，剪碎后置于電動(dòng)勻漿器中冰水浴勻漿，4℃高速低溫冷凍離心機(jī)6 000 r/min離心15 min，取上清液，于24 h內(nèi)完成測(cè)定。脂肪酶、淀粉酶的測(cè)定采用南京建成生物工程研究所的試劑盒，胰蛋白酶測(cè)定采用Folin酚法測(cè)定，腸道蛋白質(zhì)含量采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定。

脂肪酶活力單位定義：在37℃條件下，每1 g組織蛋白在本反應(yīng)體系中與底物反應(yīng)1 min，每消耗1 μmol底物為1個(gè)酶活力單位。

淀粉酶活力單位定義：每1 mg組織蛋白在37℃與底物作用30 min，水解10 mg淀粉定義為1個(gè)酶活力單位。

蛋白酶活力單位定義：每1 g組織蛋白在40℃條件下每1 min水解酪蛋白產(chǎn)生1 μg酪氨酸定義為1個(gè)蛋白酶活力單位。

1.3.4 魚(yú)體成分測(cè)定

試驗(yàn)結(jié)束后，每個(gè)網(wǎng)箱隨機(jī)取5尾黃鱔于-20℃冰箱冷凍作全魚(yú)樣品，飼料及全魚(yú)常規(guī)成分參考賀建華[4]的方法測(cè)定，其中水分測(cè)定采用105℃烘箱恒重法，粗脂肪測(cè)定采用索氏抽提法，灰分測(cè)定采用550℃馬弗爐灼燒法，粗蛋白測(cè)定采用凱氏定氮法，利用FOSS全自動(dòng)定氮儀測(cè)定。

1.4 試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS Statistics軟件進(jìn)行單因素方差分析處理，當(dāng)差異顯著時(shí)（P＜0.05），則采用Duncan's法進(jìn)行多重比較。分析結(jié)果用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±S.D.）”表示。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)方中草藥對(duì)黃鱔生長(zhǎng)的影響(見(jiàn)表2)

表2 復(fù)方中草藥對(duì)黃鱔生長(zhǎng)的影響（n=3）

由表2可知，飼料中添加中草藥對(duì)黃鱔成活率有不同程度地提高，其中1.0%和2.0%添加組成活率顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，而在增重率上，1.0%添加組顯著高于對(duì)照組和其他組(P＜0.05)，0.5%和2.0%添加組增重率與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異(P＞0.05)。

2.2 復(fù)方中草藥對(duì)黃鱔部分血液生理生化指標(biāo)的影響（見(jiàn)表3）

表3 復(fù)方中草藥對(duì)黃鱔部分血液生理生化指標(biāo)的影響（n=3）

由表3可知，與對(duì)照組相比，飼料中添加中草藥能顯著降低黃鱔血糖、甘油三酯、總膽固醇含量(P＜0.05)，1.0%和2.0%中草藥添加組尿素氮含量顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)，且0.1%和2.0%添加組之間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，而0.5%中草藥添加組與對(duì)照組相比較差異不明顯(P＞0.05)；血清中天門(mén)冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性隨添加量增加呈波動(dòng)變化，0.5%中草藥添加組顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，1.0%中草藥添加組則顯著低于對(duì)照組，2.0%中草藥添加組與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(P＞0.05)；而丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性在2.0%中草藥添加組顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，其他組與對(duì)照組相比則無(wú)顯著差異(P＞0.05)。

2.3 復(fù)方中草藥對(duì)黃鱔非特異性免疫指標(biāo)的影響(見(jiàn)表4)

表4 復(fù)方中草藥對(duì)黃鱔非特異性免疫指標(biāo)的影響（n=3）

由表4可知，與對(duì)照組相比，各添加組均能顯著提高黃鱔T-AOC活力（P＜0.05)，且各添加組間無(wú)顯著差異(P＞0.05)，當(dāng)添加量為1.0%時(shí)，血清中SOD、LSZ、C3、C4、CAT等指標(biāo)顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。

2.4 復(fù)方中草藥對(duì)黃鱔腸道消化酶活性的影響(見(jiàn)表5)

由表5可知，黃鱔腸道消化酶活性隨中草藥添加量增加呈先升后降趨勢(shì)，0.5%和1.0%中草藥添加組淀粉酶活性顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），且0.5%和1.0%添加組組間差異不顯著（P＞0.05）；各添加組脂肪酶活性均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），其中1.0%添加組活性最高；當(dāng)添加量為1.0%時(shí)，蛋白酶活性顯著高于對(duì)照組和其他組（P＜0.05）。

2.5 復(fù)方中草藥對(duì)黃鱔體成分的影響(見(jiàn)表6)

表5 復(fù)方中草藥對(duì)黃鱔腸道消化酶活性的影響（n=3）

表6 復(fù)方中草藥對(duì)黃鱔體成分的影響（%，n=3）

由表6可知，在體成分方面，與對(duì)照組相比，添加中草藥均能顯著降低黃鱔粗脂肪和灰分含量(P＜0.05)，能一定程度地提高魚(yú)體粗蛋白含量，其中1.0%中草藥添加組粗蛋白含量最高，與對(duì)照組相比差異顯著(P＜0.05)，但對(duì)黃鱔魚(yú)體水分含量無(wú)顯著影響(P＞0.05)。

3 討論

3.1 復(fù)方中草藥對(duì)黃鱔生長(zhǎng)的影響

中草藥含有多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生物活性成分，兼有藥用、營(yíng)養(yǎng)及誘食三種功效，適量添加能顯著提高水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)，改善其對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化和利用率。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中添加中草藥能提高黃鱔的成活率，添加量為1.0%和2.0%時(shí)成活率顯著高于對(duì)照組，當(dāng)添加量為1.0%時(shí)，黃鱔的增重率最高，這與黃鱔在消化酶活性上的表現(xiàn)一致，添加量為1.0%時(shí)，黃鱔3種消化酶活性均顯著高于對(duì)照組，且蛋白酶活性顯著高于其他添加組，原因是該復(fù)方中草藥中的山楂[5]、杜仲[3]、小茴香、肉桂等具有誘食、促消化功效，從而促進(jìn)魚(yú)類(lèi)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收，提高黃鱔的生長(zhǎng)及飼料利用率，與王吉橋等[6]的研究結(jié)果相似。

尿素氮是機(jī)體蛋白代謝的終產(chǎn)物，其含量直接反映出蛋白質(zhì)在機(jī)體內(nèi)合成和分解狀況。與對(duì)照組相比，飼料中添加中草藥能顯著降低血清中血糖、血脂、總膽固醇含量，且當(dāng)添加量為1.0%(D3)和2.0%(D4)時(shí)，血清中尿素氮含量顯著低于對(duì)照組(D1)，這可能是因?yàn)樵搹?fù)方中草藥中富含的黃酮類(lèi)、萜類(lèi)化合物、多糖類(lèi)等生物活性物質(zhì)對(duì)機(jī)體具有降血脂、降血糖、調(diào)節(jié)蛋白代謝作用，這與本試驗(yàn)的體成分結(jié)果相吻合。本試驗(yàn)中各中草藥添加組的粗脂肪和灰分含量均顯著低于對(duì)照組，且粗蛋白含量較對(duì)照組均有不同程度地提高，其中D3(1.0%)組粗蛋白含量顯著高于對(duì)照組，與羅慶華等[7]、石英等[8]研究相似。AST和ALT是反映肝臟功能正常與否的重要指標(biāo)，肝組織受損時(shí)，使血清中轉(zhuǎn)氨酶活性升高[9-10]。本試驗(yàn)表明，投喂1.0%的中草藥飼料能降低黃鱔AST、ALT活性，可能是中草藥中的黃芪多糖有抗氧化及穩(wěn)定肝細(xì)胞膜作用，能促進(jìn)膽紅素代謝，減少肝細(xì)胞壞死，促進(jìn)肝細(xì)胞再生[11]，說(shuō)明適量添加中草藥對(duì)肝臟有一定保護(hù)作用，這與田海軍等[12]研究結(jié)果相似。

3.2 復(fù)方中草藥對(duì)黃鱔非特異性免疫的影響

魚(yú)類(lèi)免疫防御主要依賴抗氧化系統(tǒng)(SOD、CAT、T-AOC等)、溶菌酶、補(bǔ)體系統(tǒng)、干擾素等所組成的非特異性免疫[13-14]。SOD、CAT能清除體內(nèi)超氧陰離子自由基（·O2-）、羥自由基（·OH）、過(guò)氧化氫（H2O2）等有害成分，保護(hù)機(jī)體免受其傷害[15]。TAOC是機(jī)體抗氧化能力的重要指標(biāo)，其活性與機(jī)體氧自由基代謝狀況和對(duì)外來(lái)刺激的代償能力有關(guān)。補(bǔ)體是魚(yú)類(lèi)抵抗微生物感染的重要成分，啟動(dòng)后參與機(jī)體靶細(xì)胞溶解和調(diào)理反應(yīng)，而補(bǔ)體C3是補(bǔ)體系統(tǒng)的主要成分。溶菌酶是一種具有抗菌活性的水解酶，通過(guò)溶解細(xì)胞壁使細(xì)胞破裂[16]。中草藥內(nèi)富含多糖類(lèi)、苷類(lèi)、生物堿類(lèi)、黃酮類(lèi)等多種免疫活性物質(zhì)[17]，對(duì)黃鱔具有抗菌消炎、增強(qiáng)免疫等作用；但中草藥對(duì)動(dòng)物機(jī)體具有雙向調(diào)節(jié)作用，免疫效果不會(huì)隨添加量增加而不斷增強(qiáng)，適量添加對(duì)動(dòng)物機(jī)體免疫有促進(jìn)作用，而過(guò)量添加會(huì)產(chǎn)生一定的負(fù)作用[18]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，各中草藥添加組均能顯著提高黃鱔T-AOC活力(P＜0.05)，但投喂添加量為1.0%的中草藥飼料能顯著提高黃鱔血清SOD、LSZ、T-AOC、CAT活性和補(bǔ)體C3、C4含量，且效果明顯優(yōu)于添加0.5%、2.0%組，可能是低濃度中草藥對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的有效刺激不夠，效果不顯著；而長(zhǎng)期投喂(P＜0.05)高濃度中草藥能使機(jī)體產(chǎn)生免疫疲勞現(xiàn)象[19-21]，說(shuō)明添加適量中草藥能顯著增強(qiáng)黃鱔的非特異性免疫力，這與Harikrishnan等[22]、Jian等[23]分別在虎蝦和建鯉中的研究結(jié)果相似。

4 小結(jié)

本研究表明，飼料中添加1.0%該復(fù)方中草藥對(duì)黃鱔生長(zhǎng)、非特異性免疫、腸道消化酶活性及魚(yú)體品質(zhì)有明顯的促進(jìn)和改善作用。