章偉帆

（泉州市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)所，福建 泉州 362000）

沙門氏菌是一類革蘭氏陰性菌，其廣泛分布于自然界，是常見的人畜共患型致病菌。沙門氏菌對(duì)外界的抵抗力較強(qiáng)，耐膽鹽，對(duì)營(yíng)養(yǎng)需求不高。目前，已知沙門氏菌就將近2213種，而且?guī)缀跛械纳抽T氏菌都能引起嚴(yán)重的食物中毒事件，是導(dǎo)致食物中毒的主要病原菌，對(duì)人類健康安全造成重大威脅。在美國(guó)，每年有650萬～3300萬人發(fā)生食物中毒，近5000人因此而喪生［1］。為此，美國(guó)政府每年需要花費(fèi)近50億～60億美元［2］。在中國(guó)，沙門氏菌同樣嚴(yán)重危害著我國(guó)的食品安全。據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)表明，我國(guó)每年因沙門氏菌而導(dǎo)致的食物中毒事件占所有食物中毒事件的40%～60%。所以，建立一種快速有效的檢測(cè)手段是減少食物中毒事件的重要手段。但是由于沙門氏菌的血清型過于繁多，傳統(tǒng)的檢測(cè)方法又需要經(jīng)過預(yù)增菌、選擇性曾菌、分離培養(yǎng)、生化鑒定及血清學(xué)分型鑒定5個(gè)步驟。繁雜的生化反應(yīng)使得檢測(cè)過程十分復(fù)雜，耗時(shí)耗力，至少需要4～7天才能得到精確的檢測(cè)結(jié)果。因此，尋找一種快速、有效、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便的檢測(cè)技術(shù)成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的方向。下面就近年來對(duì)于沙門氏菌新的檢測(cè)技術(shù)做一個(gè)簡(jiǎn)單的介紹。

1 免疫學(xué)檢測(cè)方法

在所有檢測(cè)食品中的沙門氏菌的技術(shù)手段中，免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)占有重要的地位，主要是因?yàn)槠鋬r(jià)格低廉，不需要特定的實(shí)驗(yàn)儀器，容易在基層推廣開來。其基本原理就是利用抗原抗體之間的特異性結(jié)合而到達(dá)檢測(cè)目的。

1.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) （ELISA）

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) （ELISA）的基本原理是將抗原或者抗體先固定在某種固相載體上，然后加入酶標(biāo)抗原或者抗體和受檢樣品，與固相載體上的抗原或者抗體發(fā)生特異性結(jié)合，從而形成抗原抗體復(fù)合物。將固相載體上多余的反應(yīng)液清除后，加入酶反應(yīng)底物，使得反應(yīng)底物被固相載體上的酶所催化，產(chǎn)生有色物質(zhì)，最后通過測(cè)量有色物質(zhì)的含量來分析樣品中待測(cè)物質(zhì)的含量［3］。

1977年，Krysinski和Heimsch利用沙門氏菌鞭毛抗體，首次將ELISA方法應(yīng)用于食品檢測(cè)［4］。最初ELISA方法雖然能在48h內(nèi)快速檢測(cè)出沙門氏菌，但是由于所使用的多價(jià)抗血清在不同程度上存在交叉反應(yīng)，使得最初用ELISA檢測(cè)方法所得到的檢測(cè)結(jié)果假陽(yáng)性很高，而且靈敏度為105cfu/mL。隨著單克隆抗體技術(shù)的產(chǎn)生，Robinson等［5］建立了直接ELISA檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法大大降低了因交叉反應(yīng)而出現(xiàn)的假陽(yáng)性現(xiàn)象，顯示出單抗的卓越性能。在我國(guó)，焦新安等［6］利用單抗技術(shù)獲取了具有沙門氏菌廣譜結(jié)合特性的4種單克隆抗體，其中2種反應(yīng)互補(bǔ)，對(duì)已檢沙門氏菌的覆蓋率高達(dá)99%，而且并沒有與受檢大腸桿菌發(fā)生交叉反應(yīng)；黎兆滾等［7］利用ELISA技術(shù)檢測(cè)94份魚粉樣品中的沙門氏菌，所得的結(jié)果中陰性符合率為100%，陽(yáng)性符合率為92%，總符合率為98%；另外，文其乙等［8］利用沙門氏菌特異性單抗de7和CB8形成了快速檢測(cè)試劑盒，對(duì)500份蛋品進(jìn)行ELISA檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果可靠，陽(yáng)性率比國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方法高。

1.2 免疫磁珠分離技術(shù) （IMS）

免疫磁珠分離技術(shù)法 （IMS）技術(shù)的原理是將特異性抗體偶聯(lián)在磁性顆粒表面，在外加磁場(chǎng)的作用下與受檢樣品中的靶細(xì)胞特異性結(jié)合，使得靶細(xì)胞能夠富集、分離。近年來，研究人員利用免疫磁珠來富集沙門氏菌，從而使得檢測(cè)更加快捷。1996年，Mansfield和Forsythe比較了選擇性培養(yǎng)基富集法和免疫磁珠捕捉法富集對(duì)120種食物進(jìn)行沙門氏菌的富集和分離。結(jié)果表明免疫磁珠捕捉法富集效果和選擇性培養(yǎng)基富集的效果相同［9］。IMS檢測(cè)技術(shù)雖然在特異性方面具有很大的優(yōu)勢(shì)，但是靈敏度不足，所以近年來IMS技術(shù)都是與ELISA、PCR、Taqman PCR技術(shù)相結(jié)合，形成IMSELISA、IMS－PCR、IMS－TaqmanPCR技術(shù)，這樣就大幅度的增加了檢測(cè)的靈敏度，提高檢測(cè)的準(zhǔn)確率。

Kofitsyo等［10］利用免疫磁珠富集分離技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)相結(jié)合，即IMS－ELISA技術(shù)檢測(cè)食品中的沙門氏菌，包括前期的樣品處理，整個(gè)檢測(cè)過程只花費(fèi)了26h，檢測(cè)最低限為105cfu/mL；2008年Virve等利用免疫磁珠富集分離技術(shù)與熒光定量PCR相結(jié)合，即IMS－Taqman PCR技術(shù)，對(duì)食品中的沙門氏菌進(jìn)行檢測(cè)，包括樣品處理的6h，整個(gè)流程只需要8h，而且靈敏度、準(zhǔn)確度、特異性分別為98.4%、99.1%、100.0%［11］；2009年，Mercanoglu等［12］利用免疫磁珠富集分離技術(shù)與PCR技術(shù)有效的結(jié)合，建立快速有效檢測(cè)沙門氏菌的IMS－PCR方法，對(duì)牛奶中的沙門氏菌進(jìn)行檢測(cè)只需要14h，而且檢測(cè)的靈敏度達(dá)到1～10cfu/mL。

2 分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)

分子生物學(xué)檢測(cè)方法是近年來發(fā)展最為迅速的食品檢測(cè)手段之一，由于其具有簡(jiǎn)便快捷，特異性強(qiáng)，準(zhǔn)確性高等優(yōu)點(diǎn)，使得它在食品安全檢測(cè)上表現(xiàn)出很大的優(yōu)越性。

2.1 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù) （PCR技術(shù)）

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù) （PCR）是近年來發(fā)展較快的一項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)，它具有簡(jiǎn)便，快捷，特異性強(qiáng)以及靈敏度高等特點(diǎn)，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于食品安全檢測(cè)。PCR技術(shù)檢測(cè)沙門氏菌的基本原理很簡(jiǎn)單，就是通過設(shè)計(jì)特異性引物，擴(kuò)增沙門氏菌中保守性高的核酸序列，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析受檢樣品中是否含有沙門氏菌，所以PCR技術(shù)的關(guān)鍵在于靶序列的選擇和引物的設(shè)計(jì)。

近年來對(duì)于PCR檢測(cè)技術(shù)的報(bào)道很多。invA基因是決定沙門氏菌的侵染力的，所編碼的蛋白普遍存在于沙門氏菌表面，其序列具有高度的保守性［13］。Rahn等［14］利用沙門氏菌的invA基因作為靶序列，對(duì)630種沙門氏菌和142種非沙門氏菌進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明在非沙門氏菌中沒有一個(gè)菌種擴(kuò)增出目的條帶，在630種沙門氏菌中除了4個(gè)菌種外，其余菌種均擴(kuò)增出目的條帶；在歐洲，由4個(gè)歐洲實(shí)驗(yàn)室聯(lián)合對(duì)435個(gè)天然樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明用invA基因作為靶序列進(jìn)行檢測(cè)的特異性和準(zhǔn)確性高達(dá)97.5%［15］。

在國(guó)內(nèi)，我國(guó)研究人員也報(bào)道了許多有關(guān)該技術(shù)的文章。黃金林等［16］開發(fā)設(shè)計(jì)了沙門氏菌中高度保守的組氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)操縱子基因序列的引物，并對(duì)15株沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株，10株非沙門氏菌菌株以及27株現(xiàn)場(chǎng)分離的沙門氏菌菌株進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果表明所有對(duì)照菌株均未出現(xiàn)目的條帶，而沙門氏菌菌株皆有495bp的目的條帶，從結(jié)果可以說明所開發(fā)的這對(duì)引物對(duì)沙門氏菌的檢測(cè)表現(xiàn)出極高的特異性；孔繁德等［17］根據(jù)沙門氏菌基因組序列中高度保守的序列fimY基因，建立了用于檢測(cè)沙門氏菌的PCR通用方法，并用該方法對(duì)廈門地區(qū)的禽類產(chǎn)品進(jìn)行了沙門氏菌的檢測(cè)，取得了喜人的成績(jī)；汪琦等［18］利用PCR方法快速檢測(cè)方法對(duì)全脂奶粉、生牛肉和加工過的雞肉中的沙門氏菌進(jìn)行檢測(cè)，其檢測(cè)結(jié)果與傳統(tǒng)檢測(cè)手段檢測(cè)結(jié)果一致，檢出限為100cfu/25g，準(zhǔn)確性達(dá)100%。

2.2 熒光定量PCR

熒光定量PCR不同于常規(guī)PCR之處在于，它能夠?qū)NA進(jìn)行定量檢測(cè)，而且敏感性達(dá)到4.5 cuf/mL，是常規(guī)PCR的100倍，特異性高，能夠避免PCR污染問題。其原理是在PCR過程中加入一個(gè)含有熒光基團(tuán)標(biāo)記的特異性寡核苷酸鏈探針，該探針兩端分別標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)和熒光報(bào)告基團(tuán)。在PCR過程中，熒光淬滅基團(tuán)從探針上脫落，從而使得熒光報(bào)告基團(tuán)發(fā)出的熒光能夠被熒光系統(tǒng)檢測(cè)到。根據(jù)檢測(cè)到的熒光信號(hào)對(duì)PCR過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量分析檢測(cè)。

Seo等［19］在對(duì)雞蛋的檢測(cè)中，采用熒光定量PCR手段對(duì)D型沙門氏菌特有的sefA基因進(jìn)行擴(kuò)增，結(jié)果表明使用熒光定量PCR手段與常規(guī)檢測(cè)方法檢測(cè)的結(jié)果一致，而且最低檢出限僅為1cfu/600g雞蛋清洗液；Malorny等［20］在對(duì)雞蛋和禽肉樣品的沖洗液進(jìn)行檢測(cè)中，用Taqman探針擴(kuò)增腸道沙門氏菌所特有的Prot6e基因，發(fā)現(xiàn)結(jié)果與常規(guī)檢測(cè)100%一致，且最低檢出限為3cfu/50mL；我國(guó)科研人員鐘偉軍［21］等根據(jù)stn基因設(shè)計(jì)了1對(duì)特異性引物和熒光探針，stn是能夠編碼鼠傷寒沙門氏菌腸毒素的基因，他們通過摸索熒光定量PCR體系和條件，建立了一套檢驗(yàn)沙門氏菌的熒光定量PCR方法。他們利用這套方法對(duì)人工污染沙門氏菌的雞蛋 （沙門氏菌初始含菌量為1cfu/g）和豬肉 （沙門氏菌初始含菌量為1cfu/g）進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果皆為陽(yáng)性，具有較強(qiáng)的特異性和高的敏感性。

2.3 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增 （LAMP）

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)是由 Notomi等［22］在2000年開發(fā)的一種新的核酸擴(kuò)增技術(shù)。它的原理是根據(jù)靶序列上的6個(gè)特定區(qū)域設(shè)計(jì)4條引物，在65℃恒溫條件下，利用具有鏈置換活性的Bst DNA聚合酶能夠在1h內(nèi)擴(kuò)增出109個(gè)靶序列拷貝的核酸擴(kuò)增技術(shù)。在擴(kuò)增過程中，反應(yīng)液中的鎂離子能夠與從核苷酸中析出的焦磷酸根離子結(jié)合，生成肉眼可見的白色沉淀——焦磷酸鎂。LAMP與常規(guī)PCR相比，其無需繁雜的電泳和紫外觀察過程，也不需要昂貴的PCR儀器，所以便于基層應(yīng)用。

LAMP技術(shù)的關(guān)鍵在于關(guān)鍵區(qū)域的選擇和特異性引物的設(shè)計(jì)。研究發(fā)現(xiàn)invA基因在不同沙門氏菌菌株之間存在較高的同源性，而且通過Blast分析，該基因與其他物種并無同源關(guān)系，所以invA基因是沙門氏菌的一個(gè)重要的特殊區(qū)域。黃金海等［23］通過對(duì)invA基因進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，通過LAMP技術(shù)對(duì)4種非沙門氏菌和7種沙門氏菌血清型進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)7種沙門氏菌皆能進(jìn)行有效擴(kuò)增，而4種對(duì)照菌不能擴(kuò)增，這說明利用invA基因設(shè)計(jì)出的特異性引物對(duì)于檢測(cè)沙門氏菌具有極好的特異性。而且在對(duì)于食品中沙門氏菌的檢測(cè)中，樣品中最低檢限為336cfu/mL，具有很高的靈敏性。

LAMP具有特異性強(qiáng)，靈敏性高，操作簡(jiǎn)便，無需儀器等優(yōu)點(diǎn)。重要的是運(yùn)用LAMP技術(shù)檢測(cè)沙門氏菌只需要2h，即使加上增菌時(shí)間，也只需15h，便于基層的推廣，具有很高的實(shí)用價(jià)值。

2.4 基因芯片 （DNA chip）

基因芯片又稱生物芯片、DNA芯片。其原理是將許多已知的DNA探針固定在玻片或者硅片上，微生物樣品DNA可以通過PCR的方法標(biāo)記探針。然后將經(jīng)過熒光標(biāo)記的樣品分子與固定在基因芯片上的DNA探針進(jìn)行雜交。用洗脫液將沒有雜交的樣品分子洗脫后，通過熒光信號(hào)的強(qiáng)弱來判斷樣品分子的序列信息和數(shù)量，最后利用序列信息來分析樣品中是否含有目的菌。該方法可以一次性檢測(cè)多種病原菌，而且具有特異性強(qiáng)，靈敏度高，快速準(zhǔn)確等特點(diǎn)，在檢測(cè)沙門氏菌等致病菌中具有廣泛的應(yīng)用前景。

Cremonesi等［24］利用細(xì)菌的16SrRNA基因設(shè)計(jì)探針，制成基因芯片，成功運(yùn)用于微生物中病原菌的檢測(cè)；2006年，為了確認(rèn)和驗(yàn)證鼠傷寒沙門氏菌的致病基因，Shannon等［25］利用基因芯片，通過PCR擴(kuò)增了10個(gè)目的基因，并制成熒光探針標(biāo)記與DNA雜交，這些基因包括：orgA、spi4H、purR、ORF319、rmbA、misL、spi4F、spi4N、rRNA以及ttrB，最終成功的檢測(cè)到了71個(gè)致病基因，這個(gè)結(jié)果表明通過PCR擴(kuò)增增加了基因芯片雜交的準(zhǔn)確度和可信度；Wilson等［26］利用病原體致病基因和20寡核苷酸藻紅素標(biāo)記探針，開發(fā)了一套可以精確識(shí)別18種真核生物、原核生物和致病性病毒的DNA微陣列。

3 檢測(cè)沙門氏菌的其他方法

除了上述所介紹的免疫學(xué)方法和分子生物學(xué)方法，近年來其他越來越多的新技術(shù)也體現(xiàn)出它的優(yōu)越性。

3.1 生物傳感器 （Biosensor）

生物傳感器的原理是將待測(cè)樣品與儀器中的生物分子識(shí)別原件發(fā)生反應(yīng)，然后通過儀器中特有的信號(hào)轉(zhuǎn)換器將反應(yīng)信號(hào)轉(zhuǎn)變成可辨別的光信號(hào)或者電信號(hào)。所以，影響生物傳感器檢測(cè)的特異性和靈敏性的關(guān)鍵在于儀器中的生物分子識(shí)別原件以及信號(hào)轉(zhuǎn)換器。Pathiran等［27］使用沙門氏菌的多克隆抗體制成生物分子識(shí)別原件，制成可用于檢測(cè)沙門氏菌的生物傳感器，該傳感器反應(yīng)時(shí)間小于100s，最低敏感度為102個(gè)細(xì)胞/mL。雖然生物傳感器具有自動(dòng)化程度高，分析速度快，對(duì)使用者要求低等特點(diǎn)，但由于生物分子識(shí)別原件壽命短，生產(chǎn)成本高，這是阻礙該方法發(fā)展的重要原因。

3.2 熱裂解氣相色譜－質(zhì)譜技術(shù) （Py－GC－MS）

熱裂解氣相色譜—質(zhì)譜技術(shù)是一種簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高的一種新技術(shù)，目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于微生物的鑒定和檢驗(yàn)當(dāng)中。郭愛玲等［28］采用Py－GC－MS技術(shù)對(duì)沙門氏菌細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，通過分析總離子流色譜圖，確定沙門氏菌熱裂解氣相色譜－質(zhì)譜的條件與部分裂解產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)，從而能夠?yàn)榭焖勹b定沙門氏菌提供新的方法；董海燕［29］建立了一套Py－GC－MS快速檢測(cè)沙門氏菌的方法，她將4種沙門氏菌全細(xì)胞在650℃下裂解，時(shí)間為12s，離子源溫度230℃的條件下，得到了4張總離子色譜圖，確定了4種沙門氏菌裂解產(chǎn)物 （吲哚、苯酚、1－十三烯）的分子結(jié)構(gòu)，為快速檢測(cè)沙門氏菌奠定了基礎(chǔ)。

3.3 電阻抗法

近年來一項(xiàng)新的生物技術(shù)——電阻抗法已經(jīng)逐步應(yīng)用于食品中微生物的檢測(cè)，而且對(duì)食品中沙門氏菌的檢測(cè)已經(jīng)通過了AOAO的認(rèn)可。其原理是根據(jù)不同微生物在生長(zhǎng)和繁殖過程中，將培養(yǎng)基內(nèi)電惰性大分子底物分解成電活性小分子產(chǎn)物的能力不同，從而導(dǎo)致電阻抗降低的程度不同。Pless等［30］用電阻抗法和傳統(tǒng)檢測(cè)方法對(duì)250種食品中進(jìn)行沙門氏菌檢測(cè)，結(jié)果表明在122種沙門氏菌污染食品中，電阻抗法檢出了119種，而傳統(tǒng)檢測(cè)方法僅檢出了106種；陳廣全等［31］對(duì)21種人工加入沙門氏菌的食品進(jìn)行檢測(cè)，分別用了電阻抗法和傳統(tǒng)檢測(cè)方法，結(jié)果電阻抗法檢測(cè)結(jié)果與傳統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果一致，對(duì)于陰性結(jié)果可以在48h內(nèi)得到。這說明電阻抗法能夠快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出食品中的沙門氏菌。

4 小結(jié)

隨著生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，新的食品檢測(cè)技術(shù)層出不窮。這些技術(shù)與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比較而言，具有快速、簡(jiǎn)便、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)。分子生物學(xué)檢測(cè)手段雖然能夠快捷地檢測(cè)沙門氏菌，但是技術(shù)難度大，成本高，推廣難度大。而免疫學(xué)方法中ELISA應(yīng)用較為普遍，隨著相關(guān)研究的不斷深入，ELISA技術(shù)在食品檢測(cè)中發(fā)揮著越來越重要的作用?？傊?，隨著免疫學(xué)和分子生物學(xué)的發(fā)展，相信對(duì)于食品中沙門氏菌的檢測(cè)技術(shù)將向著快捷、特異性強(qiáng)、靈敏度高、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的方法不斷發(fā)展。

［1］WARD，JOHN W.Incidence of foodborne illnesses：preliminarydata from foodborne diseases active surveillance network（FoodNet）［J］.MMWR Weekly，1999 （48）：189－194.

［2］MCNABBW.A general framework illustrating an approach to quantitative microbialfood safety risk assessment ［J］.Food Protect，1998 （61）：1216－1228.

［3］張魯.食品中沙門氏菌檢測(cè)方法的探討 ［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36 （2）：569－70.

［4］KRYSINSKI E P，HEIMSCH R C.Use of enzyme－labeled antibodies to detect Salmonella in foods ［J］.Applied and environmental microbiology，1977，33 （4）：947－954.

［5］ROBINSONB J，PRETZMANCI，MATTINGJ A.An enzyme immunoassay usingmyeloma protein for detection of Salmonellae［J］.Appl.Environ.Microbiol，1983 （45）：18－16.

［6］焦新安，王志亮.單克隆抗體測(cè)定沙門氏菌鞭毛蛋白屬共同抗原表位的分布特性 ［J］.單克隆抗體通訊，1995，11（3）：4－10.

［7］黎兆滾，吳文翰.用ELISA法快速檢測(cè)沙門氏菌 ［J］.中國(guó)人獸共患病雜志，1998，14（1）：61－62.

［8］文其乙，田銀芳，陸毓明，等.應(yīng)用直接ELISA快速檢測(cè)蛋品中的沙門氏菌仁 ［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，1996，6 （6）：358－359.

［9］MANSFIELDL，F(xiàn)ORSYTHES.Collaborative ring－trial of Dynabeads anti－Salmonella forimmunomagnetic separation of stressed Salmonella cells from herbs and spices ［J］.Inter.J.Food Microbiol，1996 （29）：41－47.

［10］CUDJOE K S，HAGTVEDT T，DAINTY R.Immunomagnetic separation of Salmonella from foodsand their detection using immunomagnetic particle（IMP）－ELISA ［J］.International Journal ofFood Microbiology，1995，27 （1）：11－25.

［11］HAGREN V，LODE P，SYRJAL A，et al.An 8－h(huán)our system for Salmonella detection with immunomagnetic separation and homogeneous time－resolved fluorescence PCR ［J］.International Journal of Food Microbiology，2008，125 （2）：158－161.

［12］TABAN B M，BEN U，AYTAC S A.Rapid detection of Salmonella in milk by combined immunomagnetic separation－poly merase chain reaction assay［J］.American Dairy Science－Association，2009，92 （6）：2382－2388.

［13］NGUYEN A V，KHAN M L，LU Z.Amplification of Salmonella chromosomal DNA using the potymerase chain－e action［J］.Avian Dis，1994，38 （1）：19－126.

［14］RAHN K，GRANDIS S，CLARKE R，et al.Amplification of all invA gene sequence of Salmonella typhimuriumbypolymerase chain reaction as a specific method of detection of Salmonella ［J］.Mot Call Probes，1992，6 （4）：271－2791.

［15］MALOMY B，HOORFAR J.Multicenter validation of the analytical accuracy of Salmonella PCR：towards aninternationaltandard ［J］.App Environ Microbiol，2003，69 （1）：290－2961.

［16］黃金林，焦新安，文其乙，等.應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)快速檢測(cè)沙門氏菌 ［J］.揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào)：農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版，2002，23 （3）：5－7.

［17］孔繁德，陳瓊，徐淑菲，等.沙門氏菌通用PCR快速檢測(cè)試劑盒的研制與應(yīng)用 ［J］.福建畜牧獸醫(yī)，2007 （S）：27－30.

［18］汪琦，張昕，張惠媛.利用PCR方法快速檢測(cè)食品中的沙門氏菌 ［J］.檢驗(yàn)檢疫科學(xué)，2005，15 （6）：26－28.

［19］SEO K H，VALENTIN Bon I E，BRACKTETT R E，et al.Rapid specific detection of Salmonella Enteritidis in pooled eggs by real－time PCR ［J］.Journal of Food Protection，2004，67 （5）：864－869.

［20］MALORNY B，PACCASSONI E，F(xiàn)ACH P，et al.Diagnostic real－time PCR for detection of Salmonella in food ［J］.Applied and Environmental Microbiology，2004，70 （12）：7046－7052.

［21］鐘偉軍，趙明秋，鄧中平.熒光定量PCR快速檢測(cè)食品中沙門氏菌方法的建立及初步應(yīng)用 ［J］.中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2008，30 （3）：220－224.

［22］NOTOMI T，OKAYAMA H，MASUBUCHI H，et al.Loop－mediated isothermal amplification of DNA ［J］.Nucleic acids research，2000，28 （12）：63.

［23］黃金海，孫躍輝，陳瑞，等.食品中沙門氏菌LAMP快速檢測(cè)方法的建立 ［J］.天津大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，45（5）：468－472.

［24］CREMONESI P，PISONI G，SEVERGNINI M，et al.Pathogen detection in milk samples by ligation detection reactionmediated universal array method ［J］.Journal of dairy science，2009，92 （7）：3027－3039.

［25］OURTNEY S，MOSSOBA M E，HAMMACK T S.Using PCR amplification to increase the confidence level of Salmonella typhimurium DNA microarray chip hybridization ［J］.Molecular and Cellular Probes 2006 （20）：163－171.

［26］WILSON W J，STROUT C L，DESANTIS T Z，et al.Sequence－specific identification of 18pathogenic microorganisms using microarray technology ［J］.Molecular and cellular probes，2002，16 （2）：119－127.

［27］PATHIRANAA S T，BARBAREEB J，CHIN B A，et a1.Rapid andsensitive biosensor for Salmonella ［J］.Biosensors and Bioelectron，2000，15：135－141.

［28］郭愛玲，鄭華英，馬愛民，等.沙門氏菌全細(xì)胞的熱裂解氣相色譜－質(zhì)譜分析 ［J］.分析化學(xué)，2007，35（5）：700－702.

［29］董海燕.沙門氏菌熱裂解氣相色譜—質(zhì)譜法研究 ［J］.針織工業(yè)，2012 （6）：64－66.

［30］PLESS P，F(xiàn)UTSCHIK K.Rapid detection of salmonellae by means of a new impedance－splitting method［J］.Journalof－Food Protection，1994，57 （5）：369－376.

［31］陳廣全，張惠媛，饒紅，等.電阻抗法檢測(cè)食品中沙門氏菌［J］.食品科學(xué)，2001，22 （9）：66－70.