王文祥

北京榮昌藥物研究院，北京 100078

唇形科植物丹參(Salvia miltiorrhiza Bge)是一常用中藥?；瘜W成分研究表明，其主要含有酚酸類水溶性成分和二萜類脂溶性成分。藥理研究表明，丹參能降低肝內(nèi)I、II型膠原mRNA水平;對由膠原構成的網(wǎng)狀纖維結締組織增生、沉積和延伸均有抑制作用，提示丹參可減少肝內(nèi)細胞基質(zhì)生成，抑制星狀細胞轉化為成纖維細胞［1，2］。我們用水提后醋酸乙酯萃取所得的酚酸類成分，動物藥理研究表明有明顯抗肝纖維作用［3］，為了進一步闡明其所含的化學成分，對其進行系統(tǒng)分離從中分離鑒定了7個化合物，其分別為:4、5、4'、5'-四羥基 1、2 雙苯醚(1)，原二茶醛(2)，原二茶酸(3)，異阿魏酸(4)，咖啡酸(5)，丹參甲素(6)，丹酚酸D(7)，其中化合物1為首次從丹參中分得的化合物。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

熔點用WL-I型顯微熔點儀測定，溫度未校正。氣質(zhì)聯(lián)用為Finnigan MD800紅外用 perkin—Elmer 983紅外分光光度計。質(zhì)譜用JMS-DX 300質(zhì)譜儀，核磁共振譜用ACF-300型核磁共振儀。薄層層析及柱層析用硅膠(200目)均為青島海洋化工產(chǎn)品，分離中所用試劑均為色譜純。

1.2 提取與分離

取丹參飲片10 kg，用16倍量水熱提二次，每次1.5 h，濾過，合并液，濃縮至每毫升含生藥0.5 g。加5%明膠沉淀鞣質(zhì)，0～4℃放置12 h，濾過，濾液濃縮至每毫升含生藥1.0 g，加95%乙醇至含醇量為70%，0～4℃放置12 h，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至每毫升含生藥2.0 g。用稀鹽酸調(diào)pH2到3，再用醋酸乙酯萃取，減壓回收醋酸乙酯，真空干燥，即得丹參抗肝纖維化有效部位總酚酸。(平均得率大于2%)

將丹參總酚酸提取物拌硅膠后，分別用乙酸乙酯、丙酮和甲醇回流提取得乙酸乙酯、丙酮和甲醇三個部位，乙酸乙酯部位經(jīng)硅膠反復柱層析得化合物1～5。丙酮部位經(jīng)硅膠柱和ODS柱層析得化合物6、7。其中化合物1為首次從植物中分得的化合物。

1.3 鑒定

化合物1 為白色針晶，mp:198℃，三氯化鐵反應陽性。元素分析，分子式為C12H8O6。C58.12%，H3.31%。理論值C58.06%。IR:(cm-1):3100(締合 OH)，3083(芳 CH)，1692(—CH=C—O)，1645，1420，為芳環(huán)骨架振動，1310(—C=C—)。1H NMR:出現(xiàn)二個峰，δ:6.63 ppm，13.11 ppm。峰面積比值為1∶1，從峰形上看13.11為活潑H，可能為形成分子內(nèi)氫鍵締合峰，6.63為芳氫，無裂分，說明其鄰位無其他質(zhì)子。碳譜只有二個碳棒(165.97 ppm，133.98 ppm)均位于低場，說明此化合物無脂肪碳，并且為高度對稱化合物。DEPT譜說明:133，98峰為叔碳。由此推斷，化合物I可能為1、2、4、5四取代苯。因碳譜未有碳基峰，氫譜酚羥基如締合需處鄰位。EI/MS:248(M+)，203，185(203—H2O)，172，149(185—2H2O)，144(172—CO)，116(144—CO)，98，74，45。根據(jù)以上波譜數(shù)據(jù)結合有關文獻［10，11］鑒定化合物 1 為:4，5，4'，5'—四羥基 1，2雙苯醚。

化合物2 為灰白色針品，mp.195℃ 三氯化鐵陽性。IR:(cm-1):3323，2754，1654，1595，1536，1477，1166，1118，974，876，813，754，631。MS(EI):M/Z 138(M+)，137(100)，109(48，62)，81(30.43)，63(17.09)，53(20.32)。1H NMR(DMSO-D6):δ ppm 6.90(1H，d，J=8 Hz)，7.23(1H，d，J=1.85 Hz)，7.27(1H，dd，J=8 Hz，J=1.85 Hz)，9.67(3 H，S，-OH，-OH，-CHO)。13C NMR(DMSO-D6):δ ppm 124.8(C-1)，129.2(C-2)，115.8(C-3)，114.7(C-4)，152.4(C-5)，146.2(C-6)，191.4(C-7)。根據(jù)以波譜數(shù)據(jù)并與標準原兒茶醛波譜相比較［4］，鑒定化合物2為原兒茶醛。

化合物4 為白色針晶，mp.213℃，三氯化鐵陽性。IR(cm-1):3401，2979，2948，1671，1628，1511，1443，1263，1135，1023，977，857，815，760。MS(EI):M/Z 194(M+)，179(42.07)，133(19.28)。1H NMR(DMSO-D6):δppm3.81(3H，S，-OCH3)，6.25(1H，d，J=15.99)，7.46(1H，d，J=15.99)，7.10(1H，d，J=7.61 Hz)，7.24(1H，d，J=1.91 Hz)，7.28(1H，dd，J=7.97 Hz，J=1.96 Hz)。13C NMR(DMSO-D6):δppm 55.78(C-10)，127.24(C-1)，144.32(C-2)，141.99(C-3)，152.27(C-4)，116.40(C-5)，121.11(C-6)，112.16(C-7)，114.26(C-8)，167.89(C-9)。根據(jù)以上波譜數(shù)據(jù)并與已知化合物相比較［4］，鑒定化合物4為異阿魏酸。

化合物5 白色結晶，mp.186℃。三氯化鐵試劑陽性。IR VKBrmax(cm-1):3482，3050-2556(br)，1645，1610，1599，1449，1277。1H NMR(DMSO):δ6.12(1H，1d，J=8.3，1.8)，7.31(1H，d，J=1.8)，7.43(1H，d，J=15.2)。化合物5與咖啡酸數(shù)據(jù)一致［4］，故鑒定化合物5為咖啡酸。

化合物6 為白色針晶。mp.IR:VKBrmax(cm-1):3600(OH)，3054(芳 H)，2943，2816，1646(COOH)，1567，1528，1469(為芳環(huán)骨架振動)，1393(—C=C—)，1211，1121，871。1H NMR(DMSO-D6):δppm 2.40(1H，dd，J=8.5 Hz，13.5 Hz)，2.83(1H，dd，J=5 Hz，13.5 Hz)，3.6(1H，ddJ=5 Hz，8.5 Hz)，6.44(1H，dd，J=7.95 Hz，1.93 Hz)，6.57(1H，d，J=7.95 Hz)，6.65(1H，d，J=1.93 Hz)。根據(jù)以上數(shù)據(jù)與已知波譜比較［6］，鑒定化合物6為丹參甲素。

化合物7 為黃色結晶，mp.288℃。三氯化鐵反應陽性。IR(cm-1):3390(OH)，1795，1715()，1636，1614，1521(芳環(huán))，1275，1185，1063，977。1H NMR δ(ppm)6.37(1H，d，J=18)，7.53(1H，d，J=18)為一反式雙鍵氫，7.44(1H，d，J=8.5)，6.89(1H，d，J=8.5)為苯環(huán)上二個相連的氫，6.67(1H，d，J=6.76)，6.57(1H，dd，J=6.76，1.5 Hz)，6.69(1H，d，J=1.5 Hz)另一個苯環(huán)的兩個鄰位一個間位氫，2.96(1H，dd，J=8.5，13.5 Hz)，3.05(1H，dd，J=8.5，13.5 Hz)，5.07(1H，dd，J=5，8.5 Hz)2.08(2H，S)為一連環(huán)上氫。13C NMR和DEPT表明:3個碳基 碳1741，170，165.9。二個脂仲碳:36.3，33.11一個連氧叔碳73.24，以及7個芳季碳和7個芳叔碳。根據(jù)以上波譜數(shù)據(jù)［6，7］化合物7鑒定為:丹酚酸D。

2 討論

上述分離鑒定結果表明:丹參水溶性酚性成分主要為酚性芳酸類化合物。根據(jù)分離得率丹參甲素和丹酚酸D所占比例最大，說明丹參抗纖維化有效部位是以丹參素為代表的丹參總酚酸，本研究在分離時未分到已報道的丹參抗纖維化有效成分丹酚酸A 和 B［8，9］，可能與其不穩(wěn)定易氧化和分解，同時也提示它們不是丹參抗纖維化唯一有效成分，或者它們在體內(nèi)抗纖維化是非原型化合物起作用而是先分解成其他化合物后再起作用。

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