洪麗萍 蔡亞蘭 黃加秀 石晶萍 朱佳麗 段鵬

RP-HPLC法測定鹽酸左氧氟沙星片的含量

洪麗萍 蔡亞蘭 黃加秀 石晶萍 朱佳麗 段鵬

目的 建立鹽酸左氧氟沙星片中鹽酸左氧氟沙星含量測定的RP-HPLC法。方法 色譜柱Agilent XDB-C18柱；流動相為醋酸鹽緩沖夜(pH值為3.0)-乙腈(45：55), 流速1.0 ml/min, 檢測波長295 nm。結(jié)果 鹽酸左氧氟沙星在5.00~250.00 μg/ml范圍內(nèi)線性關系良好, r=1.000。平均回收率為99.91%, RSD為0.3%(n=6)。結(jié)論 本方法簡便, 準確, 其他組分不干擾測定,可以用于鹽酸左氧氟沙星片中鹽酸左氧氟沙星的定量分析。

RP-HPLC；鹽酸左氧氟沙星片；含量測定

鹽酸左氧氟沙星片是我公司生產(chǎn)的奎諾酮類抗生素, 該產(chǎn)品為氧氟沙星的左旋體, 其抗菌活性約為氧氟沙星的兩倍,它的主要作用機制為抑制細菌DNA旋轉(zhuǎn)酶(細菌拓撲異構酶Ⅱ)的活性, 阻礙細菌DNA復制, 臨床上主要用于敏感細菌引起的輕、中度感染。作者參考產(chǎn)品質(zhì)量標準［1］和中國藥典方法對測定產(chǎn)品中鹽酸左氧氟沙星的含量方法進行研究分析和方法學驗證, 研究結(jié)果表明HPLC法簡便, 準確, 可以用于控制本制劑產(chǎn)品的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

儀器：瑞士梅特勒公司的XS205 電子天平, 昆山公司的KQ-500B型超聲波器, 美國安捷倫公司的高效液相色譜儀Agilent1200 Series等儀器。

試藥：鹽酸左氧氟沙星對照品(批號為：130537)購于美國西格瑪公司, 揚子江藥業(yè)集團有限公司生產(chǎn)的鹽酸左氧氟沙星片(批號分別為：12050111, 12060111, 12070111)為,乙腈純度級別是色譜純, 其它用到的化試級別均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法的色譜條件和系統(tǒng)適應性試驗 選用安捷倫公司的XDB C18柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm)為色譜柱；以醋酸鹽緩沖夜(pH值為3.0)-乙腈(45：55)；流速1.0 ml/min；檢測波長為295 nm；柱溫：30℃；流速：1.0 ml/min。

對上述色譜條件進行試驗分析后發(fā)現(xiàn)：鹽酸左氧氟沙星色譜主峰與試驗樣品中的其他組分色譜峰達到了有效分離,試驗后方法的理論板數(shù)以鹽酸左氧氟沙星峰計>2000；陰性對照樣品溶液獲得的色譜圖中在鹽酸左氧氟沙星相對應的位置上無色譜峰出現(xiàn), 表明樣品中其他成分不干擾鹽酸左氧氟沙星的測定, 上述色譜條件可行。

2.2 配制對照品溶液 取批號為：130537的鹽酸左氧氟沙星對照品適量, 加流動相溶解制成每1 ml含5 mg的鹽酸左氧氟沙星對照品貯備液。

2.3 線性關系試驗 分別精密吸取上述對照品貯備液適量,用流動相稀釋制成濃度分別為：5 μg/ml、10 μg/ml、25 μg/ml、50 μg/ml、100 μg/ml、150 μg/ml、 250 μg/ml的溶液, 按上述色譜條件分別進樣20 μl, 以鹽酸左氧氟沙星濃度為橫坐標(X),其峰面積積分值為縱坐標(Y), 得回歸方程為： Y= 51.37X-3.076 相關系數(shù)r=1.000.

結(jié)果表明鹽酸左氧氟沙星的濃度和其峰面積呈現(xiàn)良好的線性關系的濃度范圍在5.00~250.00 μg/ml之間。

2.4 精密度試驗 取濃度為0.05012 mg/ml的鹽酸左氧氟沙星對照品溶液20 μl, 按樣品測定項下方法操作, 重復進樣6次, 結(jié)果鹽酸左氧氟沙星峰面積均值為6332.84082, RSD值為0.1%, RSD值小于2.0%, 表明該方法精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗 取新制備的濃度為0.05039 mg/ml的樣品溶液, 在(25±2)℃的環(huán)境條件下考察, 按上述色譜條件每隔1 h進樣20 μl, 記錄每次測定的峰面積, 共測定12次, 鹽酸左氧氟沙星峰面積均值為5325.542315, RSD值為0.1%, RSD值<2.0%, 試驗結(jié)果表明樣品溶液在(25±2)℃的環(huán)境條件可放置12 h。

2.6 方法重復性 任取批號為12010111的產(chǎn)品, 按樣品測定項下方法制備6份供試液, 試驗結(jié)果表明鹽酸左氧氟沙星片含量均值為99.90%, RSD為0.22%。

2.7 加樣回收率試驗 采用加樣回收法。取已知鹽酸左氧氟沙星含量的樣品(12050111, 12060111, 12070111)適量, 分別精密加入鹽酸左氧氟沙星對照品溶液(0.05 mg/ml)10 ml, 按照“2.8”項下方法制備6份供試液, 分別進樣20 μl, 按上述色譜條件測定, 平均回收率為99.91%, RSD為0.3%。

2.8 樣品含量測定 取本品20片, 精密稱定, 研細, 精密稱定細粉適量(約相當于鹽酸左氧氟沙星5 mg), 置100 ml量瓶中, 加流動相50 ml, 超聲處理(功率500 W, 頻率40 kHz) 30 min, 放冷, 用流動相稀釋至刻度, 搖勻, 濾過, 即得, 精密量取續(xù)濾液20 μl。按上述色譜條件測定, 以外標法計算樣品中鹽酸左氧氟沙星的含量。

2.9 陰性對照樣品溶液的制備 陰性對照樣品溶液即缺鹽酸左氧氟沙星的空白溶液, 其制備按處方比例準確稱取除鹽酸左氧氟沙星以外的其它物料, 模擬本品的制備工藝和供試品溶液的制備方法, 制成缺鹽酸左氧氟沙星的空白溶液。

3 討論

3.1 色譜條件的選擇 分別選取不同配比的醋酸鹽緩沖夜(pH值為3.0)-乙腈為流動相, 不同廠家不同規(guī)格的色譜柱進行分析, 試驗結(jié)果表明最佳色譜條件是選擇流動相為醋酸鹽緩沖夜(pH值為3.0)-乙腈(45:55), 選取安捷倫的XDB C18(150 mm×4.6 mm, 5 μm)色譜柱, 設置參數(shù)柱溫為30℃,流速為1.0 ml/min, 檢測波長為295 nm。

［1］ 中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準(試行).YBH28972005.

225321 泰州, 揚子江藥業(yè)集團有限公司質(zhì)量管理部質(zhì)量檢測中心

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