王志東 張子軍

彈力纖維染色方法的改良與體會

王志東 張子軍

彈力纖維廣泛分布于人體的血管、肺、心臟等組織中。在研究肺腺癌彈力纖維的過程中, 摸索出比較好的彈力纖維染色方法, 現(xiàn)介紹如下。

1 染色程序

①切片脫蠟至水。②Lugol碘液處理5 min。③稍水洗。④5%硫代硫酸鈉處理5 min。⑤流水沖洗5min。⑥75%乙醇稍冼。⑦醛品紅染液處理10min；⑧75%乙醇浸洗2次,每次約10秒；⑨稍水洗；⑩Harris蘇木素復染, 酒精脫水,二甲苯透明, 中性樹膠封片。

2 染液配制

①Lugol碘液配制碘片:碘化鉀:蒸餾水=1g:2g:100 ml,至碘片全部溶解。②醛品紅染液配制堿性品紅:70%乙醇:濃鹽酸:三聚乙醛=0.5 g:100 ml:1ml:1ml。③Harris蘇木素復染液配制蘇木素精:無水乙醇:甘油:硫酸鉀鋁:蒸餾水:冰乙酸=2 g:100 ml:100 ml:3 g:100 ml:10 ml(配制完畢, 陽光下曝曬6周后方可使用, 并且每日搖動一次)。

3 染色結果

彈力纖維染成紫紅色, 呈波浪狀分布；細胞核染成藍色；二者對比明顯, 可以在充分了解組織全貌的情況下對彈力纖維的分布、堆積的量進行細致的觀察, 也可以對細胞與彈力纖維的關系進行比較觀察, 并且在觀察彈力纖維的過程中,可同時看到肺腺癌腫瘤細胞的分化狀況, 使切片更直觀和醒目。此方法用時短, 染液易配制, 要求條件不高, 切片可長時間保存。

4 注意事項

在75%乙醇浸洗時, 時間要嚴格掌握, 并要隨時在顯微鏡下控制染色的情況, 以便隨時終止乙醇浸洗, 防止切片被75%乙醇脫色。Harris蘇木素復染時, 根據(jù)染色室室溫的條件將時間掌握在3~5 min。然后進行自來水沖洗返藍, 自來水沖洗時間要充分, 返藍要徹底, 同時也要在顯微鏡下進行染色控制。染色完成后切片直接進入無水乙醇脫水, 脫三次,每次2 min。

5 討論

彈力纖維在新鮮標本上呈黃色發(fā)亮的細線條狀［1］。在HE染色狀態(tài)下, 呈現(xiàn)鮮艷的粉紅色, 但是, HE染色的組織學切片, 除細胞核呈藍色外, 細胞漿、細胞膜及細胞間質多呈現(xiàn)為深淺不一的紅粉色, 再加上組織發(fā)生病理改變而導致彈力纖維斷裂、增生, 進而導致其排列散亂, 更難以判斷彈力纖維發(fā)生了怎樣的病理改變。所以找到一種簡便、有效的彈力纖維染色方法就尤為重要。如, 發(fā)生慢性支氣管炎、肺腺癌、彈力纖維瘤、動脈粥樣硬化、不明原因動脈炎等疾病時,彈力纖維會發(fā)生病理改變。傳統(tǒng)地衣紅染色時間以天計, 并且在用鹽酸酒精分化時, 對時間的控制要求非常高, 必須在顯微鏡下觀察分化程度, 一旦彈力纖維清晰, 應立刻終止分化。否則, 一旦發(fā)生過分化, 經過多日反應而染色的彈力纖維上的地衣紅就會被鹽酸酒精脫色, 而達不到染色效果?？墒? 若分化時間不夠, 組織背景染色就比較重, 彈力纖維與組織背景對比就不明顯, 影響染色結果觀察。Weigert間苯二酚—堿性品紅是顯示彈力纖維最常用方法之一［2］, 用此方法染彈力纖維, 可以顯示的比較清晰, 但是, 這種方法會使膠原纖維著色, 所以這種方法的特異性就受到質疑。而維多利亞藍染色時間長, 分化難以掌握, 結構顯示不夠清晰, 也給判斷帶來困難。本方法在醛品紅法的基礎上進行了改進, 從染色效果上看, 彈力纖維顯色清晰, 與背景對比明顯, 無其他非特異性染色。同時, 這種染色方法操作簡單、染色時間短、染色液可重復使用。這些特點為診治、研究富于彈力纖維改變的疾病奠定了組織學基礎。

［1］ 王玉清. 彈力纖維染色法的改進. 錦州醫(yī)學院學報, 2001,22(2): 26.

［2］ 李冰, 劉同慎, 馬云, 等. 長效Weigert彈力纖維染色液染色效果分析. 濱州醫(yī)學院學報, 2002, 25(2): 157.

116001 大連市第六人民醫(yī)院病理科(王志東);大連市兒童醫(yī)院(張子軍)