楊 斌 譚麗娟 鄭春燕 苑海濤(青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心內(nèi)科，山東 青島 266003)

纈沙坦對(duì)不穩(wěn)定型心絞痛患者CD4+CD28－T淋巴細(xì)胞及預(yù)后的影響

楊 斌 譚麗娟 鄭春燕 苑海濤1(青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心內(nèi)科，山東 青島 266003)

目的研究纈沙坦對(duì)不穩(wěn)定型心絞痛患者外周血中CD4+CD28－T淋巴細(xì)胞的比例及其相關(guān)細(xì)胞因子IFN-γ的影響。方法將85例經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影證實(shí)的不穩(wěn)定型心絞痛患者隨機(jī)分為常規(guī)治療組和纈沙坦治療組。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)42例常規(guī)治療組和43例纈沙坦治療組患者治療前及治療6個(gè)月后外周血中CD4+CD28－T淋巴細(xì)胞的數(shù)量，以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA法)測(cè)定治療前后血漿中干擾素-γ(IFN-γ)水平，并同時(shí)觀察兩組患者出院后6個(gè)月內(nèi)因不穩(wěn)定型心絞痛再次入院、急性心肌梗死、血運(yùn)重建及死亡等主要心血管事件(MACE)情況。結(jié)果兩組患者在治療6個(gè)月后CD4+CD28－T淋巴細(xì)胞的比例及血漿中IFN-γ水平均較治療前下降(P＜0.05)，纈沙坦治療組下降較常規(guī)治療組更為明顯(P＜0.05)。纈沙坦治療組6個(gè)月內(nèi)的主要心血管事件顯著減少(P＜0.05)。結(jié)論纈沙坦可能通過降低不穩(wěn)定型心絞痛患者外周血中CD4+CD28－T淋巴細(xì)胞的比例及血漿中IFN-γ的水平，從而達(dá)到穩(wěn)定斑塊，改善預(yù)后的作用。

不穩(wěn)定型心絞痛;T淋巴細(xì)胞;纈沙坦;干擾素-γ

不穩(wěn)定型心絞痛(UAP)的發(fā)病機(jī)制是冠狀動(dòng)脈粥樣斑塊的破裂、出血，繼而血栓形成，引起冠狀動(dòng)脈不完全阻塞，而動(dòng)脈粥樣斑塊的破裂與炎癥和免疫反應(yīng)有密切的關(guān)系〔1，2〕，新近研究表明 CD4+CD28－T淋巴細(xì)胞在VAP患者外周血中出現(xiàn)異常擴(kuò)增(增加10%)而在穩(wěn)定型心絞痛和正常人中這種T淋巴細(xì)胞的表達(dá)小于1%，表明CD4+CD28－T淋巴細(xì)胞異常增殖可能是其發(fā)病機(jī)制之一〔3〕。調(diào)節(jié)CD4+CD28－T淋巴細(xì)胞的比例有可能穩(wěn)定斑塊，減少臨床缺血事件的發(fā)生。已有研究證明血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑(ARB)能夠調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群的失衡〔4〕，而本研究目的是觀察纈沙坦能否降低UAP患者外周血CD4+CD28－T淋巴細(xì)胞的比例及其對(duì)UAP患者預(yù)后的影響。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 2009年10月至2011年2月，本院心內(nèi)科收治的85例UAP患者，其中男63例，女22例，年齡(61±7.5)歲，符合Braunwald分級(jí)Ⅱ或Ⅲ級(jí)，入院前1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)過靜止性胸痛，有一過性的ST段壓低或T波倒置，CK-MB和CTnT升高小于正常上限的2倍。排除合并嚴(yán)重心力衰竭(LVEF＜40%)、高血壓、風(fēng)心病、心肌病、嚴(yán)重的肝腎功能不全、風(fēng)濕系統(tǒng)疾病、嚴(yán)重感染、惡性腫瘤及應(yīng)用炎癥抑制物如非甾體類抗炎藥或類固醇等的患者。將上述85例患者隨機(jī)分為兩組:常規(guī)治療組42例(男30例，女12例)和纈沙坦(代文)組43例(男33例，女10例)，所有患者均行冠狀動(dòng)脈造影檢查顯示至少有1支血管直徑狹窄超過50%。兩組患者的年齡、性別和冠心病危險(xiǎn)因素均無顯著性差異。見表1。

1.2 給藥方法 常規(guī)治療組給予常規(guī)藥物治療(阿司匹林、低分子肝素、β-受體阻滯劑、他汀類、硝酸酯類和鈣離子拮抗劑等藥物)，纈沙坦治療組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用纈沙坦(valsartan，代文，諾華公司產(chǎn)品)80 mg，1次/d，連續(xù)服藥6個(gè)月，用藥期間注意觀察腎功能和血鉀及血壓的變化。

1.3 主要試劑和儀器 所有流式試劑均購于法國Immunotech公司，抗體均為鼠抗人單克隆抗體，主要試劑及產(chǎn)品編號(hào)如下:PE－CD4+:Im0499，F(xiàn)ITC－CD28－:Im1236，同型對(duì)照 PE/FITCIgG1:Im 0670/Im 0639，溶血素Optilyse:PNA11894;BECKMAN COULTER公司的流式細(xì)胞儀 EPICS XL-4。ELISA試劑盒(IFN-γ)購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，IFN-γ最低檢測(cè)濃度為8 pg/m l。

表1 兩組患者一般臨床資料的比較(±s)

表1 兩組患者一般臨床資料的比較(±s)

指標(biāo) 常規(guī)治療組(n=42)纈沙坦組(n=43)59±6 61±5性別(男/女) 30/12 33/10吸煙史(吸/不吸) 25/17 30/13糖尿病(有/無) 26/16 28/15家族史(有/無) 27/15 29/14總膽固醇(mmol/L) 4.75±0.62 4.92±0.57低密度脂蛋白膽固醇(mmol/L) 3.53±0.42 3.35±0.86高密度脂蛋白膽固醇(mmol/L) 1.12±0.28 0.97±0.35甘油三酯(mmol/L)年齡(歲)1.47±0.59 1.62±0.43

1.4 標(biāo)本制備 所有患者于服藥前及服藥6個(gè)月后于清晨空腹抽取肘靜脈血5 m l(EDTA抗凝)，其中2 ml用于流式細(xì)胞檢測(cè)，3 ml用于細(xì)胞因子(ELISA法)測(cè)定。

1.5 流式細(xì)胞儀檢測(cè) 應(yīng)用BECKMAN COULTER公司的EPICSXL-4流式細(xì)胞儀，通過前向角散射光(FSC)和側(cè)向角散射光(SSC)設(shè)門選定分析的目的群體淋巴細(xì)胞，每個(gè)測(cè)定管分析10 000個(gè)淋巴細(xì)胞，數(shù)據(jù)處理應(yīng)用SystemⅡ3.0分析軟件。以散點(diǎn)圖顯示細(xì)胞表達(dá)，以百分比表示細(xì)胞數(shù)量。

1.6 血漿細(xì)胞因子的測(cè)定 嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明操作進(jìn)行，具體步驟如下:取待測(cè)血漿100μl加入已被IFN-γ單克隆抗體包被的96孔板，置37℃溫箱孵育120 min，用洗滌液洗板6次，再加入生物素化的抗人IFN-γ的抗體50μl，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃溫箱孵育60 min后用洗滌液洗板6次。每孔中再加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的Strepavidin 100μl置37℃溫箱孵育60 min后洗板6次，加OPD底物工作液100μl，置37℃暗室反應(yīng)10 min，最后每孔加 50μl終止液混勻。在492 nm處測(cè)OD值，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出IFN-γ的濃度。

1.7 兩組患者出院后6個(gè)月內(nèi)主要心血管事件的情況 記錄治療后兩組UAP患者在6個(gè)月內(nèi)主要心臟不良事件(MACE)的發(fā)生情況，主要包括不穩(wěn)定型心絞痛再次入院、急性心肌梗死、血運(yùn)重建及死亡等。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS11.5軟件，計(jì)量資料以±s表示，計(jì)數(shù)資料以百分率表示，分別行t檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者治療前后外周血中CD4+CD28－T淋巴細(xì)胞的比較 兩組患者治療前外周血中CD4+CD28－T淋巴細(xì)胞的比例無顯著性差異(10.1%vs 9.01%，P＞0.05)。兩組患者治療后外周血中CD4+CD28－T淋巴細(xì)胞的比例較治療前降低(P＜0.05)，但纈沙坦組改變較常規(guī)治療組更為明顯(4.84%vs 1.51%，P＜0.05)。

2.2 兩組患者治療前后血漿中IFN-γ水平的比較 常規(guī)治療組和纈沙坦組患者治療前血漿中IFN-γ水平無顯著性差異〔(148±11)vs(112±7)pg/ml，P ＞0.05〕。兩組患者治療后血漿中IFN-γ水平較治療前降低〔(146±9)vs(93±6)pg/m l，P＜0.05〕，但纈沙坦組改變較常規(guī)治療組更為明顯(P＜0.05)。

2.3 兩組患者治療6個(gè)月后MACE事件發(fā)生率的比較 6個(gè)月后常規(guī)治療組發(fā)生MACE事件10例(23.8%)，但纈沙坦組僅有4例(9.3%)差異有顯著性(P＜0.05)。

2.4 兩組患者血壓的比較 兩組UAP患者血壓在治療前無明顯差異(P＞0.05)，在治療后均有所下降(P＜0.05)，但兩者相比差異無顯著性(P＞0.05)。見表2。

表2 兩組患者血壓的變化(±s，mmHg)

表2 兩組患者血壓的變化(±s，mmHg)

與治療前比較:1)P＜0.05

組別 n SBP治療前 治療后常規(guī)治療組 42 125±13 117±921) 82±7 76±521)治療后DBP治療前纈沙坦組 43 127±111 119±1 0231) 83±61 75±8231)

3 討論

許多證據(jù)表明不穩(wěn)定斑塊炎癥的發(fā)生發(fā)展和T淋巴細(xì)胞活化及促炎癥細(xì)胞因子的作用有關(guān)〔5，6〕。Liuzzo等〔7〕在 UAP患者外周血中發(fā)現(xiàn)了CD4+CD28－表型的單克隆T淋巴細(xì)胞的異常增殖，并且與患者的發(fā)病、再發(fā)及預(yù)后有密切的關(guān)系〔3，7〕，提示CD4+CD28－T淋巴細(xì)胞亞群的增多可能是獨(dú)立于傳統(tǒng)心血管危險(xiǎn)因子以外的危險(xiǎn)因素。

CD4+CD28－T淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生高水平的IFN-γ從而活化單核巨噬細(xì)胞，加速單核巨噬細(xì)胞對(duì)動(dòng)脈粥樣斑塊的浸潤;活化的單核巨噬細(xì)胞也大量分泌TNF-α等促炎癥細(xì)胞因子以及基質(zhì)金屬蛋白酶等，從而損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞降低斑塊的穩(wěn)定性〔8〕;另一方面，UAP患者的CD4+CD28－T淋巴細(xì)胞有溶細(xì)胞毒作用，能夠在體內(nèi)殺傷內(nèi)皮細(xì)胞〔6〕;CD4+CD28－T淋巴細(xì)胞也可通過表達(dá)腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)與病變中表達(dá)CCR5(又稱CD195，為一種趨化因子受體)的血管平滑肌細(xì)胞結(jié)合誘導(dǎo)血管平滑肌的凋亡〔9〕，從而導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定性。最近的研究證實(shí)應(yīng)用細(xì)胞因子抗體(抗TNF-α)在體外能夠降低CD4+CD28－T淋巴細(xì)胞的比例，但是能否給不穩(wěn)定型心絞痛患者帶來臨床益處尚無定論〔10〕。

本實(shí)驗(yàn)表明UAP的常規(guī)治療包括他汀類等藥物可抑制UAP患者體內(nèi)的炎癥和免疫反應(yīng)。纈沙坦具有降壓以外的抗炎和免疫抑制作用，能夠降低CD4+CD28－T淋巴細(xì)胞的比例，減少IFN-γ的產(chǎn)生。纈沙坦通過抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用，有穩(wěn)定UAP患者粥樣斑塊，改善其臨床癥狀和預(yù)后的作用。CD4+CD28－T淋巴細(xì)胞活化、增殖以及向動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的遷徙導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定是一個(gè)復(fù)雜的免疫反應(yīng)過程，多種細(xì)胞因子及效應(yīng)分子參與其中。我們僅通過臨床觀察到血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑確實(shí)可以降低UAP患者外周血中CD4+CD28－T淋巴細(xì)胞的比例，其具體機(jī)制有待深入研究。

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Effects of valsartan on CD4+CD28－T lymphocyte and IFN-γ in patients w ith unstable angina pectoris

YANG Bin，TAN Li-Juan，ZHENG Chun-Yan，et al.
Department of Cardiology，the Affiliated Hospital of M edical College Qingdao University，Qingdao 266003，Shandong，China

Ob jective To investigate the effects of valsartan on CD4+CD28－T lymphocytes and its cytokine in patients with unstable angina pectoris(UAP).Methods85 UAP patientswere recruited and divided into two groups randomly:conventional group(n=42)and valsartan group(n=43).The quantity of CD4+CD28－T lymphocytes of two groupswas detected by flow cytometry and the level of IFN-γwasmeasured by ELISA atbaseline and 6 months later.Major adverse cardiovascular events(MACE)in two groupswere observed after6 months.ResultsThe frequency of CD4+CD28－T lymphocytes and the levels of IFN-γ in two groups were all lower than those of baseline level(P﹤0.05)and more reduced in valsartan group compared with those of conventional group(P﹤0.05).MACE in valsartan group was significantly improved in 6months(P﹤0.05).ConclusionsValsartan could reduce frequency of CD4+CD28－T lymphocytes and the levels of IFN-γin patients with UAP.Thismay contribute to the stability of atherosclerotic plaque and improvement ofmyocardial ischemia.

Unstable angina;T lymphocyte;Valsartan;Interferon-γ

R541.4

A

1005-9202(2013)05-0993-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2013.05.001

國家自然基金資助(81070188);山東省優(yōu)秀中青年科學(xué)家科研獎(jiǎng)勵(lì)基金(BS2009YY027)

1 山東省立醫(yī)院心內(nèi)科

苑海濤(1971-)，男，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，主要從事心血管免疫學(xué)研究。

楊 斌(1979-)，男，主治醫(yī)師，碩士，主要從事心血管免疫學(xué)研究。

〔2011-10-21收稿 2012-05-20修回〕

(編輯 曹夢(mèng)園)