程宏忠 王 平 彭 浩 吳建強(qiáng) (云南省第一人民醫(yī)院胸心外科，云南 昆明 650032)

非小細(xì)胞肺癌組織及癌旁組織VEGF、P16蛋白的表達(dá)及意義

程宏忠 王 平 彭 浩 吳建強(qiáng) (云南省第一人民醫(yī)院胸心外科，云南 昆明 650032)

目的分析P16蛋白、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)組織及癌旁組織的表達(dá)情況。方法應(yīng)用免疫組化SP法檢測NSCLC組織65例，距腫瘤邊緣5 cm以上癌旁正常組織20例中VEGF、P16蛋白的表達(dá)。結(jié)果①VEGF在肺癌組織的陽性表達(dá)率72.3%，明顯高于癌旁組織的陽性表達(dá)率35.0%(P＜0.05);P16蛋白在肺癌組織的陽性表達(dá)率47.7%，明顯低于癌旁組織的陽性表達(dá)率85.0%(P＜0.05)。②P16蛋白的表達(dá)與肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、分化程度有關(guān)，而與病理類型無關(guān);VEGF的表達(dá)與臨床分析、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。NSCLC組織中P16蛋白與VEGF之間呈負(fù)相關(guān)(rs=－0.537，P＜0.01)。結(jié)論NSCLC組織中存在VEGF與P16蛋白表達(dá)的異常，且兩者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，推測NSCLC的發(fā)病與血管生成及P16表達(dá)異常有關(guān)。

非小細(xì)胞肺癌;癌旁組織;P16蛋白;VEGF

肺癌的發(fā)病是逐步演進(jìn)的過程，并涉及眾多基因及其產(chǎn)物、細(xì)胞分子的異常表達(dá)。p16基因是近年來研究發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，在人類50%腫瘤細(xì)胞株中存在p16基因的缺失和突變，其表達(dá)產(chǎn)物P16蛋白是作用于細(xì)胞分裂周期的關(guān)鍵因子之一〔1〕。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是促進(jìn)血管生長的最有效的因子，其異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生有密切的關(guān)系。本研究旨在分析P16蛋白、VEGF在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)組織及癌旁組織的表達(dá)情況，探討其在NSCLC發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 選自我院2008年1月至2011年12月手術(shù)切除的NSCLC組織標(biāo)本織65例。所有患者術(shù)前均未進(jìn)行放療和化療，術(shù)后經(jīng)病理診斷證實，其中男38例，女27例，年齡60～78〔平均(68.2±4.6)〕歲。根據(jù)WHO分型標(biāo)準(zhǔn)〔2〕分為:鱗癌35例，腺癌30例;高分化19例，中分化26例，低分化20例。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟(UICC)標(biāo)準(zhǔn)分為:Ⅰ級28例，Ⅱ級21例，Ⅲ級16例。同時切取距腫瘤組織5 cm以上的癌旁組織20例作為對照。所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，5μm厚連續(xù)切片，并經(jīng)高年資病理醫(yī)師核實診斷。

1.2 方法 免疫組化染色采用SP法，主要試劑VEGF及P16蛋白單抗、S-P試劑盒、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色液和乙二胺四乙酸(EDTA)修復(fù)液，由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。所有切片常規(guī)脫蠟、水化、流水沖洗、加抗原修復(fù)液，微波爐間斷加熱進(jìn)行抗原熱修復(fù)，山羊血清封閉，滴加一抗、二抗及工作液，DAB顯色，復(fù)染、封片，用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作陰性對照，陽性對照采用北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供的陽性切片。

1.3 結(jié)果判定〔3〕根據(jù)顯色程度判斷:標(biāo)本無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。根據(jù)陽性細(xì)胞在觀察細(xì)胞中所占比例:陽性細(xì)胞數(shù)≤10%為1分;11% ～50%為2分;51%～75%為3分;＞75%為4分。再按這兩項指標(biāo)的總積分將結(jié)果分成4級:0～3分為(－);4～5分為(+);6～7分為(++)，8分以上為(+++);其中+～+++為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件，計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗，采用Spearman等級相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 VEGF在肺癌組織及癌旁組織的表達(dá) VEGF在肺癌組織的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織(P＜0.05)。見表1。

表1 VEGF在肺癌組織及癌旁組織的表達(dá)(n)

2.2 P16蛋白在肺癌組織及癌旁組織的表達(dá) P16蛋白在肺癌組織的陽性表達(dá)率明顯低于癌旁組織(P＜0.05)。見表2。

表2 P16蛋白在肺癌組織及癌旁組織的表達(dá)(n)

2.3 VEGF和P16蛋白在肺癌中表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

不同病理類型肺癌P16蛋白陽性表達(dá)率比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05);不同臨床分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與P16蛋白陽性表達(dá)有關(guān)(P＜0.05)。不同臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與VEGF陽性表達(dá)有關(guān)(P＜0.05);不同病理類型、分化程度病例VEGF陽性表達(dá)率比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。NSCLC組織中P16蛋白與VEGF陽性率呈負(fù)相關(guān)(rs=－0.537，P＜0.01)。見表3。

表3 VEGF和P16蛋白在肺癌中表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系〔n(%)〕

3 討論

腫瘤細(xì)胞具有自我更新的不斷增殖的能力，而腫瘤這種持續(xù)性的生長及其轉(zhuǎn)移都需要新生血管的形成。在眾多的影響腫瘤新生血管形成的因素中，VEGF是最有效的促進(jìn)血管形成的因子之一〔4〕。VEGF可以與血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性結(jié)合，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，增強(qiáng)血管通透性，通過激活蛋白酶促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞外基質(zhì)降解，從而為新生血管生長及延伸提供基礎(chǔ)。研究證實，惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移均伴隨著VEGF的異常改變。Stefanoup等〔5〕研究發(fā)現(xiàn)，77.3%的NSCLC患者出現(xiàn)VEGF高表達(dá)，其表達(dá)情況與黏附因子呈正相關(guān)。高曉來〔6〕應(yīng)用ELISA檢測發(fā)現(xiàn)NSCLC患者VEGF水平明顯高于健康對照組。本研究應(yīng)用免疫組化法檢測NSCLC組織，結(jié)果發(fā)現(xiàn)VEGF在肺癌組織的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，與Stefanoup等〔5〕的報道基本一致。

P16蛋白是p16基因表達(dá)的產(chǎn)物。p16基因是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因，也是細(xì)胞周期中的基本基因〔7〕，直接參與細(xì)胞周期的調(diào)控，包括肺癌、腎癌、皮膚癌、卵巢癌、乳腺癌和腦腫瘤等大約50%的腫瘤細(xì)胞株均存在p16基因的突變或缺失〔8〕。P16蛋白可以直接對細(xì)胞周期進(jìn)行調(diào)控，最終阻止細(xì)胞進(jìn)入分裂期，而一旦p16基因突變，P16蛋白則不能有效地抑制細(xì)胞周期，導(dǎo)致細(xì)胞進(jìn)入惡性增殖。本研究中P16蛋白在肺癌組織的陽性表達(dá)率明顯低于癌旁組織，說明肺癌組織中可能存在p16基因的突變或缺失，因此其產(chǎn)物P16蛋白的表達(dá)明顯降低。證實了p16基因的突變與肺癌的發(fā)生和發(fā)展有密切的關(guān)系。

本研究還發(fā)現(xiàn)，P16蛋白的表達(dá)與肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期和分化程度有關(guān)，而與病理類型無關(guān);VEGF的表達(dá)與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān);NSCLC組織中P16蛋白與VEGF呈負(fù)相關(guān)。筆者推測NSCLC的發(fā)病與血管生成及P16表達(dá)異常有關(guān)，且P16蛋白和VEGF在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中可能存在協(xié)同作用，其具體機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

1 張菡菡，祝 博，孔麗君.CD44 v6和P16表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌生物學(xué)行為關(guān)系〔J〕.齊魯醫(yī)學(xué)雜志，2009;24(5):408-10.

2 陳 崗，廖美琳.肺癌WHO新病理分類的臨床意義〔J〕.中國腫瘤，2004;13(10):613-5.

3 許良中，楊文濤.免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)〔J〕.中國癌癥雜志，1996;6(4):229-31.

4 許學(xué)亮，邵紅玲.STAT5、VEGF和EGFR在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)的相關(guān)性研究〔J〕.中國免疫學(xué)雜志，2012;28(6):555-6.

5 Stefanoup D，Goussia AC，Arkoumani E，et al.Expression of vascular endothelial growth factor and the adhesion moleculor E-cadherin in nonsmall cell lung cancer〔J〕.Anticancer Res，2003;23(6):4715-20.

6 高曉來.肺癌患者血清Survivin和VEGF的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.臨床肺科雜志，2012;17(1):109-10.

7 張晨策，魏煜程，沈 毅.非小細(xì)胞肺癌組織P53、P16和Bcl-2蛋白表達(dá)及意義〔J〕.齊魯醫(yī)學(xué)雜志，2011;26(4):302-3.

8 張永明，李 輝，楊文鋒，等.非小細(xì)胞肺癌組織中Cyclin D1、p16蛋白的表達(dá)變化及意義〔J〕.山東醫(yī)藥，2012;52(14):58-60.

R73

A

1005-9202(2013)12-2761-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2013.12.012

程宏忠(1964-)，副主任醫(yī)師，副教授，主要從事胸部腫瘤的診斷與治療研究。

〔2012-07-22收稿 2013-01-22修回〕

(編輯 袁左鳴)