史麗華

（遼寧醫(yī)學(xué)院畜牧獸醫(yī)學(xué)院，遼寧 錦州 121001）

2011年5月下旬，義縣某養(yǎng)羊戶有7只山羊羔突然發(fā)病，數(shù)分鐘內(nèi)死亡2只，2～4h內(nèi)死亡3只，2天內(nèi)又死亡2只，病死率100%。死亡的山羊是膘情較好的2月齡大羔。死亡分散在圈舍、放牧途中和放牧地。發(fā)病后畜主自行購(gòu)入阿莫西林進(jìn)行治療，但無效果。該群山羊膘情較好，以往沒見任何疾病，也沒打過任何疫苗和驅(qū)過蟲。羊只平時(shí)采食良好，全天放牧不補(bǔ)料，飲水即在溝塘邊的積水坑。

1 臨床癥狀

羊群在放牧過程中有的山羊羔突然發(fā)病，病初相繼出現(xiàn)2只山羊離群倒地抽搐，很快死亡，無明顯癥狀。有2只山羊，肌肉抽搐，磨牙，口涎增多，眼球轉(zhuǎn)動(dòng)，倒地，四肢做劃泳運(yùn)動(dòng)，隨后頭頸顯著抽縮，2～4h內(nèi)死亡。有1只山羊早期癥狀為步態(tài)不穩(wěn)，以后臥倒，并有感覺過敏，流涎，上下頜“咯咯”作響，繼而昏迷，角膜反射消失，3～4h內(nèi)死亡。有2只山羊精神不振，全身無力，病初步態(tài)不穩(wěn)，以后倒臥，繼而昏迷，在2天內(nèi)衰竭死亡。

2 病理剖檢變化

死亡的山羊尸體腐敗迅速，腹部臌脹，可視黏膜發(fā)紺。剖檢3只，真胃膨滿，充滿食糜，在胃底腺區(qū)有出血，黏膜壞死、潰瘍。小腸黏膜出血，特別是漿膜下嚴(yán)重出血，漿膜表面呈暗紅色，似血腸，切開腸管見黏膜呈暗紅色血樣，腸黏膜壞死。腸系膜淋巴結(jié)腫大、出血。腎腫大、軟化有波動(dòng)感，有2只是一側(cè)性，另1只是兩側(cè)性的。心包液、胸腔液、腹腔液增多，滲出液呈澄黃色透明，暴露在空氣后不久凝結(jié)呈膠凍狀，心臟擴(kuò)張，心肌柔軟，心內(nèi)膜、心外膜呈點(diǎn)狀或斑狀出血。有1只羔羊的肺充血、水腫，肺的被膜下有出血點(diǎn)。膽囊擴(kuò)張，積有多量淡綠色稍黏稠的膽汁。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3．1 試驗(yàn)材料 無菌條件下采集病死羊的心血、肝、脾、腎臟等病料。

革蘭染色液、葡萄糖血液瓊脂平板培養(yǎng)基、肝片肉湯培養(yǎng)基、綿羊血瓊脂平板培養(yǎng)基、牛乳培養(yǎng)基，上述染色液和培養(yǎng)基按常規(guī)方法制備。微量糖發(fā)酵管，購(gòu)自上海醫(yī)化所，產(chǎn)氣莢膜梭菌定型血清，購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。試驗(yàn)動(dòng)物用豚鼠，購(gòu)置醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心。

3．2 試驗(yàn)方法

3．2．1 細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查 無菌采集病死羊心血、肝、脾、腎，進(jìn)行涂片和觸片，進(jìn)行革蘭染色，鏡檢。

3．2．2 細(xì)菌分離培養(yǎng) 將無菌采集的心血、肝、脾、腎病料分別接種在肝片肉湯及葡萄糖血液瓊脂平板上，在厭氧環(huán)境中，置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)8～24 h，觀察細(xì)菌培養(yǎng)特性。取上述培養(yǎng)物涂片鏡檢，觀察細(xì)菌形態(tài)特征。

3．2．3 純培養(yǎng) 釣取葡萄糖血液瓊脂平板上典型菌落，劃線接種于綿羊血瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)8～12h。

3．2．4 生化試驗(yàn) 將綿羊血瓊脂平板上細(xì)菌分別移種于葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖、果糖、淀粉發(fā)酵管及牛乳培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)8～12h后觀察結(jié)果。

3．2．5 腸毒素檢查 取病死羊回腸的內(nèi)容物100 mL，加4倍生理鹽水稀釋，充分混合后，3 000r／min離心10min，取其上清液分別給2組豚鼠腹腔注射0．2mL，0．5mL，每組5只。觀察其發(fā)病死亡情況，以判斷是否有腸毒素存在。同時(shí)設(shè)3只豚鼠為對(duì)照組，分別注射生理鹽水0．5mL。

3．2．6 毒素定型試驗(yàn) 用前述回腸內(nèi)容物上清液各0．4mL分別與A、B、C、D型產(chǎn)氣莢膜梭菌定型血清各0．1mL混合，置于37℃恒溫箱內(nèi)中和50 min。其后分別給5只試驗(yàn)豚鼠腹腔注射。同時(shí)另外給3只豚鼠單獨(dú)注射0．4mL回腸內(nèi)容物之上清液作對(duì)照。

3．3 試驗(yàn)結(jié)果

3．3．1 細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查 經(jīng)100倍油鏡檢查，涂片上均見有兩端鈍圓，革蘭陽性大桿菌，單個(gè)存在或2～3個(gè)菌體相連的短鏈，有莢膜。

3．3．2 細(xì)菌分離培養(yǎng)特性 肝片肉湯培養(yǎng)基 經(jīng)37℃培養(yǎng)8h后，肝片肉湯渾濁，有氣泡產(chǎn)生；培養(yǎng)24h，管底形成白色沉淀物。葡萄糖血液瓊脂平板培養(yǎng)基 經(jīng)37℃培養(yǎng)8h后，形成圓形或圓盤形中央隆起的淺灰色菌落，有溶血環(huán)或雙溶血環(huán)。取上述培養(yǎng)物涂片鏡檢，可見革蘭陽性大桿菌，與病料涂片上的細(xì)菌形態(tài)一致。

3．3．3 生化試驗(yàn)結(jié)果 能發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、果糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不分解甘露醇、淀粉。在牛乳培養(yǎng)基上產(chǎn)生“暴烈發(fā)酵”現(xiàn)象。上述生化反應(yīng)結(jié)果符合產(chǎn)氣莢膜梭菌的生化特性。

3．3．4 腸毒素檢查結(jié)果 注射病死羊回腸內(nèi)容物上清液的2組豚鼠分別于4h和10h后死亡，對(duì)照組健活。說明病死羊腸內(nèi)有腸毒素存在。

3．3．5 毒素定型試驗(yàn)結(jié)果 注射A、B、C型血清（抗毒素）＋腸內(nèi)容物（腸毒素）的豚鼠和只注射腸內(nèi)容物的對(duì)照組豚鼠均先后死亡，只有注射D型血清＋腸內(nèi)容物的豚鼠存活。據(jù)此可判斷腸毒素為D型。

4 小結(jié)與討論

4．1 根據(jù)流行病學(xué)、臨床癥狀、病理剖檢及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，診斷本次疫情為由D型產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的山羊腸毒血癥。

4．2 當(dāng)羊群中出現(xiàn)本病時(shí)，立即轉(zhuǎn)移到高燥的地區(qū)放牧。避免喂食蛋白質(zhì)過多的飼草、飼料，及鮮嫩多汁牧草，避免在沼澤地或水田放牧，放牧?xí)r避免飲坑溝中不清潔積水。

4．3 在常發(fā)病地區(qū)，應(yīng)定期注射羊腸毒血癥菌苗。