張迎軍 武慧強 劉曉宇

1.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古呼和浩特 010010；2.內(nèi)蒙古中醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古呼和浩特 010010

原發(fā)性高血壓是一種與多基因遺傳以及環(huán)境相關(guān)的疾病，其相關(guān)基因具有種族及地區(qū)性差異。人類血管緊張素Ⅱ受體1(AT1R)基因定位于3q21-q25染色體上，長1 kb，含1個外顯子，不含內(nèi)含子。研究表明，AT1R基因A1166C點突變與人類原發(fā)性高血壓（EH）相關(guān)[1]。蒙古族是內(nèi)蒙地區(qū)的主體民族，也是在內(nèi)蒙開展高血壓病因?qū)W研究的代表性人群。2002年6月—2011年6月，該研究以蒙古族原發(fā)性高血壓患者作為研究對象，旨在探討AT1R基因多態(tài)與高血壓之間的關(guān)系，以期明確二者的相關(guān)關(guān)系，為高血壓防治開辟新思路。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以該醫(yī)院心內(nèi)科門診及體檢中心收治或體檢的蒙古族原發(fā)性高血壓患者及健康查體者為研究對象，入選病例間均無血緣關(guān)系，且三代內(nèi)無與非蒙古族通婚史，均簽署知情同意書。原發(fā)性高血壓組(EH組)納入標準：按照2010年《中國高血壓防治指南》[2]診斷標準，收縮壓≥140 mmHg和／或舒張壓≥90 mmHg，同時排除繼發(fā)性高血壓、肝腎疾病、過量飲酒史。對照組（C組）納入標準：收縮壓<140 mmHg，舒張壓<90 mmHg，同時排除肝腎疾病、過量飲酒史。EH組共納入病例200例，其中男77例，女123例，年齡30～65歲，平均為54.6歲；C組共納入232例，其中男99例，女133例，年齡33～67歲，平均為53.2歲。兩組在性別構(gòu)成比、年齡等因素差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。而EH組血壓、甘油三酯、總膽固醇等指標均值分別為165.8/97.1 mmHg、2.2 nmol/L、4.8 nmol/L,均顯著高于 C組 (118.6/76.6 mmHg、1.5 nmol/L、3.9 nmol/L)（P<0.05）。

1.2 臨床指標測定及標本采集

用標準方法進行血壓測量；基礎(chǔ)血壓采用水銀柱袖帶血壓計測量，患者坐位，測量其右上臂血壓值，每隔5 min測1次，共測3次，取平均值。晨起空腹自肘前靜脈抽取靜脈血15 mL，一部分經(jīng)離心分離出血漿和血細胞，存放-70℃冰箱，用于分子生物學(xué)檢測；一部分應(yīng)用血液生化分析儀測定血液生化指標。

1.3 AT1R基因多態(tài)性檢測

基因多態(tài)性檢測應(yīng)用多聚酶鏈反應(yīng)（PCR）、瓊脂糖電泳等方法完成。酚一氯仿法進行DNA抽提，用primier5軟件設(shè)計包含AT1R多態(tài)位點的引物，所用引物為5’-GCT TTG TCT TGT TGC AAA AGG-3’和 5’-CCC ACT CAA ACC TTT CAA-3’，多聚酶鏈式反應(yīng)(PCR)總體積 20 μL：其中 10Xbuffer 2 μL，2.5 mmol／L dNTP 1.6 μL，上下游引物(10μmol/l)各 0.4 μL，DNA 模板 1 μL，rTaq(5 U/μL)0.1 μL，ddH2O 14.5 μL；反應(yīng)參數(shù)為 94 ℃預(yù)變性 3 min進入循環(huán)，94℃變性 30 s，50℃退火30 s，72℃延伸 30 s，共循環(huán)40次，最后72℃終末延伸10 min。酶切體系10 μL包括PCR產(chǎn)物 5 μL，AluI內(nèi)切酶(10U／μL)0.5 μL，10×bufer 1.5 μL，ddH2O 3 μL，37℃水浴過夜；擴增產(chǎn)物經(jīng)含溴化乙錠的1.5%瓊脂糖凝膠電泳分型。

1.4 統(tǒng)計方法

采用SPSS13.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，計量資料采用均數(shù)±標準差（±s）表示，用t檢驗進行組間比較；定性資料組間比較采用χ2檢驗；組間遺傳平衡比較采用Hardy-Weinberg檢驗。

2 結(jié)果

2.1 遺傳平衡檢驗

AT1R基因A1166C位點的多態(tài)性表現(xiàn)為AA、AC和CC 3種基因型。EH組和C組蒙古族人群中AT1R多態(tài)頻率符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)，等位基因的頻率分布趨勢基本相同，表明人群基因遺傳來自同一孟德爾群體，具有較好人群代表性，見表1。

表1 AT1R等位基因分布[n（%）]

2.2 AT1R基因型分布

EH組AT1R基因AA、AC、CC基因型分布頻率分布分別為71.5%、25.0%和3.5%，而在C組AA、AC、CC基因型分布頻率分布分別為 78.9%、14.7%和 6.4%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，EH組和C組AT1R基因基因型分布比例不同，見表2。

表2 AT1R多態(tài)基因型分布[n（%）]

3 討論

原發(fā)性高血壓是多基因遺傳病，其發(fā)生是環(huán)境因素和遺傳因素共同作用的結(jié)果，流行病學(xué)調(diào)查表明，遺傳因素在高血壓發(fā)生發(fā)展中的作用較環(huán)境因素更為重要。EH的候選基因涉及RAS、交感神經(jīng)一腎上腺系統(tǒng)、水鹽代謝、內(nèi)皮細胞功能等至少150余種。雖然目前關(guān)于EH候選基因的研究有很大的進展，但研究結(jié)果不一致[2-7]。因此應(yīng)充分考慮環(huán)境、年齡、性別、種族、疾病等因素的影響，才能找到高血壓的易感基因，闡明原發(fā)性高血壓的基因機制。腎素-血管緊張素系統(tǒng)(Renin Angiotensin System，RAS)與高血壓病相關(guān)的多種病理生理現(xiàn)象有密切聯(lián)系，血管緊張素II（AngII）在其中發(fā)揮極其重要作用，而AT1R參與調(diào)控和介導(dǎo)了AngII的主要心血管效應(yīng)。研究也表明，AT1R基因的AC+CC基因型與EH有關(guān)[2-3]。

該研究所調(diào)查的蒙古族人群居住較集中，與外界通婚少，基本上以牧區(qū)為主，從地理位置及血緣上是相對封閉的人群，遺傳背景和生活方式較為一致，EH組與C組可比性較好，影響統(tǒng)計結(jié)果的混雜因素較少，是研究遺傳相關(guān)疾病的理想人群。該研究也表明，AT1R基因的各個等位基因頻率在正常血壓組和原發(fā)性高血壓人群中分布無明顯差異，而AC+CC型在原發(fā)性高血壓組的比例顯著高于正常對照人群，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。提示，在蒙古族人群中，AT1R基因A1166C基因多態(tài)性可能與原發(fā)性高壓發(fā)病有關(guān)。

該研究與既往研究[8]存在一定差異，這可能與樣本來源、樣本量大小等多種因素有關(guān)。不同不同種族、人群的遺傳背景及環(huán)境因素差異較大。另外，由于條件所限，該研究樣本量較小，實驗結(jié)果的證明力相對較弱。

綜上，AT1R基因A1166C基因多態(tài)性位點可能是蒙古族人發(fā)生原發(fā)性高血壓病的危險因素，但由于原發(fā)性高血壓是一種與多基因遺傳相關(guān)的復(fù)雜疾病，AT1R基因A1166C作為一個單基因位點在蒙古族人原發(fā)性高血壓病發(fā)生發(fā)展中的作用還有待探討。

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